第二節(jié)基因工程的原理和技術(shù)基因工程的原理：基因重組基因工程的目標：讓人們感興趣的基因在宿主細胞中穩(wěn)定和高效表達?；蚬こ痰幕静僮鞑襟E：1）獲得目的基因；2）形成重組DNA分子；3）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞；4）篩選含有目的基因的受體細胞；5）目的基因的表達。步驟1：獲得目的基因目的基因：是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因如人的胰島素基因、干擾素基因、白細胞介素基因、植物的抗病基因、抗蟲基因、抗除草劑基因、種子貯藏蛋白的基因等。獲得目的基因的方法：已知序列未知序列化學(xué)方法合成利用PCR技術(shù)擴增從基因文庫獲得1）人工合成已知其序列已知其mRNA的序列已知其翻譯產(chǎn)物的氨基酸序列2）聚合酶鏈式反應(yīng)即PCR技術(shù)氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。在酶的作用下，不斷延伸，合成雙鏈DNA。多次循環(huán)，獲得大量雙鏈DNA分子。PCR技術(shù)擴增基因文庫：用重組DNA技術(shù)將某種生物細胞的總DNA或染色體DNA的所有片斷隨機地連接到基因載體上，然后轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)乃拗骷毎?，通過細胞增殖而構(gòu)成各個片段的無性繁殖系(克隆)，在制備的克隆數(shù)目多到可以把某種生物的全部基因都包含在內(nèi)的情況下，這一組克隆的總體就被稱為某種生物的基因文庫。同一定義也適用于某種生物的線粒體DNA或葉綠體DNA的基因文庫。

基因庫是指某一生物群體中的全部基因?；蚩寺∈侵话承┨囟ɑ蚧駾NA片段的克隆?；蛭膸熘邪鵀閿?shù)眾多的克隆，建成后可供隨時選取其中任何一個基因克隆之用。3）從基因文庫中獲取目的基因：基因文庫:將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為基因文庫(genelibrary)基因組文庫:基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫.部分基因文庫:基因文庫中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫.步驟2、、重組DNA分分子的形形成：質(zhì)粒DNA分分子同種限制制酶一個切口口兩個黏性性末端兩個切口口獲得目的的基因DNA連連接酶重組DNA分子子（重組組質(zhì)粒））GAATTCCGTAGAATTCGGATTCTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTCTTAAGGCATCTTAAGCCTAACTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG思考：目的基因因、運載載體質(zhì)粒粒經(jīng)DNA連接接酶處理理，可能能有幾種種產(chǎn)物？？1、目的的基因與與目的基基因結(jié)合合；2、質(zhì)粒粒與質(zhì)粒粒結(jié)合；；3、目的的基因與與質(zhì)粒結(jié)結(jié)合。(08海海南)圖圖為某某種質(zhì)粒粒表達載載體簡圖，小小箭頭所所指分別別為限制制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶酶切位點，ampR為為青霉素素抗性基基因，tctR為四環(huán)環(huán)素抗性性基因，，P為啟啟動因子，，T為終終止子，，ori為復(fù)制制原點。已已知目的的基因的的兩端分分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)內(nèi)的多種種酶的酶酶切位點點。（1）將將含有目目的基因因的DNA與質(zhì)質(zhì)粒表達達載體分分別用EcoRI酶切切，酶切切產(chǎn)物用用DNA連接酶酶進行連連接后，，其中由由兩個DNA片片段之間間連接形形成的產(chǎn)產(chǎn)物有三種。目的基因因—載體體連接物物載體--載體連連接物目的基因因--目目的基因因連接物物（2）用用上述3種連接接產(chǎn)物與與無任何抗抗藥性的的原核宿宿主細胞胞接種到含含四環(huán)的的培養(yǎng)基基中，能能生長的原原核宿主主細胞所所含有的的連接產(chǎn)物物是（4）在在上述實實驗中，，為了防防止目的的基因和和質(zhì)粒表表達載體體在酶切切后產(chǎn)生生的末端端發(fā)生任任意連接接，酶切切時應(yīng)選選用的酶酶時。載體--載體連連接物；；目的基因因--載載體連接接、載體--載體連連接物EcoRI和BamHI（1）常常用的受受體細胞胞：大腸桿菌菌、枯草桿菌菌、土壤農(nóng)桿桿菌、酵母菌、、動植物細細胞等。。步驟3、、將目的的基因?qū)?dǎo)入受體體細胞（2）導(dǎo)導(dǎo)入方法法：（3）導(dǎo)導(dǎo)入過程程：受體細胞胞：細菌菌CaCL2細胞壁的的通透性性增大重組質(zhì)粒粒進入受受體細胞胞目的基因因隨受體體細胞的的繁殖而而復(fù)制將目的基因?qū)胧荏w細胞將受體細胞進行擴增借鑒細菌菌或病毒毒侵染細細胞的途途徑1.將目目的基因因?qū)胫仓参锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化法基因槍法法2.將目目的基因因?qū)雱觿游锛毎@微注射射技術(shù)（最多、、最有效效）3.將目目的基因因?qū)胛⑽⑸锛毤毎鸆a2+處理，以增加細細菌細胞胞壁的通通透性。。①直接導(dǎo)導(dǎo)入法：：電擊、、顯微注注射、直直接吸收收、基因因槍等方方法。（1）電電擊法：：借助電電擊儀高高壓脈沖沖把目的的基因打打入宿主主細胞。。（2）顯顯微注射射法：利利用微量量注射器器在顯微微鏡下直直接把目目的基因因注入宿宿主細胞胞。（3）直直接吸收收法：把把目的基基因和宿宿主細胞胞混在一一起，讓讓其吸收收。（4）基基因槍法法：在金金屬微粒粒上涂一一層目的的基因，，然后發(fā)發(fā)射到宿宿主細胞胞中。②間接導(dǎo)導(dǎo)入法：：常用的的載體是是質(zhì)粒、、λ噬菌菌體。（1）質(zhì)質(zhì)粒是細細菌染色色體DNA以外外的環(huán)狀狀雙鏈DNA分分子，它它能自我我復(fù)制，，也可整整合到細細胞染色色體DNA中與與其一起起表達。。質(zhì)粒通通常還含含有標記記基因，，這可以以從細胞胞的表型型特征來來識別。。（2）λλ噬菌體體是一種種細菌病病毒，其其環(huán)狀雙雙鏈DNA可以以作為目目的基因因的載體體。采用基因因工程的的方法培培育抗蟲蟲棉，下下列導(dǎo)入入目的基基因的做做法正確確的是：：()①將毒素素蛋白注注射到棉棉受精卵卵中②將編碼碼毒素蛋蛋白的DNA序序列，注注射到棉棉受精卵卵中③將編碼碼毒素蛋蛋白的DNA序序列，與與質(zhì)粒重重組，導(dǎo)導(dǎo)入細菌菌，用該該細菌感感染棉的的體細胞胞，再進進行組織織培養(yǎng)④將編碼碼毒素蛋蛋白的DNA序序列，與與細菌質(zhì)質(zhì)粒重組組，注射射到棉的的子房并并進入受受精卵A.①②②B.②②③C.③③④D.④①Ｃ步驟4、、篩選含含有目的的基因的的受體細細胞抗四環(huán)素基因重組DNA四環(huán)素生長被抑制正常生活四環(huán)素步驟5、、目的基基因的表表達1、特定定性狀的的產(chǎn)生與與否；2、是否否產(chǎn)生特特定的產(chǎn)產(chǎn)物。2．利用用外源基基因在受受體細胞胞中表達達，可生生產(chǎn)人類類所需要要的產(chǎn)品品。下列列各項中中能說明明目的基基因完成成了在受受體細胞胞中表達達的是（（））A．棉花花二倍體體細胞中中檢測到到細菌的的抗蟲基基因B．大腸腸桿菌中中檢測到到人胰島島素基因因及其mRNAC．山羊羊乳腺細細胞中檢檢測到人人生長激激素DNA序列列D．酵母母菌細胞胞中提取取到人干干擾素蛋蛋白D思考：干擾素是是一種抗抗病毒藥藥物，其其化學(xué)本本質(zhì)是蛋白白質(zhì)，假假如現(xiàn)在在要用大大腸桿菌菌來生產(chǎn)抗抗病毒干干擾素，，如何操操作？載體質(zhì)粒粒外源DNA片段段外源DNA插入入剪切引入宿主主細胞選出含有有重組DNA的的細胞擴擴增A從人的淋淋巴細胞胞中提取取干擾素素基因，，轉(zhuǎn)移到到大腸桿桿菌質(zhì)粒粒中，再再導(dǎo)入到到其體內(nèi)內(nèi)。(畫圖講講解)1用基基因工程程技術(shù)可可使大腸腸桿菌合合成人的的蛋白質(zhì)質(zhì)。下列列敘述不不正確的的是A．常用用相同的的限制性性內(nèi)切酶酶處理的的基因和質(zhì)粒B．DNA連接接酶和RNA聚合酶酶是構(gòu)建建重組質(zhì)質(zhì)粒必需需的工具具酶C．可用用含抗生生素的培培養(yǎng)基檢檢測大腸腸桿菌中中是否導(dǎo)導(dǎo)入了重重組質(zhì)粒粒D．導(dǎo)入入大腸桿桿菌的目目的基因因不一定定能成功表達達B鞏固練習(xí)習(xí)練習(xí)2．有關(guān)關(guān)基因工工程的敘敘述正確確的是()A.限制制性內(nèi)切切酶只在在獲得目目的基因因時才用用B.重組組質(zhì)粒的的形成在在細胞內(nèi)內(nèi)完成C.質(zhì)粒都都可以作作為載體體D.蛋白白質(zhì)的結(jié)結(jié)構(gòu)可為為合成目目的基因因提供資資料D1.有關(guān)關(guān)基因工工程的敘敘述中，，錯誤的的是（（））A、DNA連接接酶將黏黏性末端端的堿基基對連接接起來B、限制制性核酸酸內(nèi)切酶酶用于目目的基因因的獲得得C、目的的基因須須由載體體導(dǎo)入受受體細胞胞D、人工工合成目目的基因因不用限限制性內(nèi)內(nèi)切酶A6、將ada（（腺苷酸酸脫氨酶酶基因））通過質(zhì)質(zhì)粒pET28b導(dǎo)入入大腸桿桿菌并成成功表達達腺苷酸酸脫氨酶酶。下列列敘述錯錯誤的是是A.每每個大腸腸桿菌細細胞至少少含一個個重組質(zhì)質(zhì)粒B.每每個重組組質(zhì)粒至至少含一一個限制制性核酸酸內(nèi)切酶酶識別位位點C.每每個限制制性核酸酸內(nèi)切酶酶識別位位點至少少插入一一個adaD.每每個人的的ada至少表表達一個個腺苷酸酸脫氨酶酶分子C如下圖是是將人的的生長激激素基因因?qū)爰毤毦鶥細細胞內(nèi)制制造“工工程菌””示意圖圖（））注：GeneI和GeneⅡ表示兩種標記基因表示限制酶僅有的識別序列放大GGATCCCCTAGGGATCCTAG目的基因GGATCCCCTAGGGeneIGeneIIGATCCTAG謝謝9、靜夜夜四無無鄰，，荒居居舊業(yè)業(yè)貧。。。12月月-2212月月-22Thursday,December8,202210、雨中中黃葉葉樹，，燈下下白頭頭人。。。12:03:4212:03:4212:0312/8/202212:03:42PM11、以我獨獨沈久，，愧君相相見頻。。。12月-2212:03:4212:03Dec-2208-Dec-2212、故人江江海別，，幾度隔隔山川。。。12:03:4212:03:4212:03Thursday,December8,202213、乍見翻疑夢夢，相悲各問問年。。12月-2212月-2212:03:4212:03:42December8,202214、他鄉(xiāng)生白發(fā)發(fā)，舊國見青青山。。08十二月月202212:03:42下午午12:03:4212月-2215、比不不了得得就不不比，，得不不到的的就不不要。。。。十二月月2212:03下下午12月月-2212:03December8,202216、行動動出成成果，，工作作出財財富。。。2022/12/812:03:4212:03:4208December202217、做前前，能能夠環(huán)環(huán)視四四周；；做時時，你你只能能或者者最好好沿著著以腳腳為起起點的的射線線向前前。。。12:03:42下下午午12:03下下午12:03:4212月月-229、沒沒有有失失敗敗，，只只有有暫暫時時停停止止成成功功??！。。12月月-2212月月-22Thursday,December8,202210、很很多多事事情情努努力力了了未未必必有有結(jié)結(jié)果果，，但但是是不不努努力力卻卻什什么么改改變變也也沒沒有有。。。。12:03:4212:03:4212:0312/8/202212:03:42PM11、成功功就是是日復(fù)復(fù)一日日那一一點點點小小小努力力的積積累。。。12月月-2212:03:4212:03Dec-2208-Dec-2212、世間間成事事，不不求其其絕對對圓滿滿，留留一份份不足足，可可得無無限完完美。。。12:03:4212:03:4212:03Thursday,December8,202213、不知香積寺寺，數(shù)里入云云峰。。12月-2212月-2212:03:4212:03:42December8,202214、意志堅強的的人能把世界界放在手中像像泥塊一樣任任意揉捏。08十二月月202212:03:42下午午12:03:4212月-2215、楚塞三三湘接，，荊門九九派通。。。。十二月2212:03下下午12月-2212:03December8,202216、少年年十五五二十十時，，步行行奪得得胡馬馬騎。。。2022/12/812:03:4212:03:4208December202217、空山山新雨雨后，，天氣氣晚來來秋。。。12:03:42下下午午12:03下下午12:03:4212月月-229、楊柳柳散和和風(fēng)，，青山山澹吾吾慮。。。12月月-2212月月-22Thursday,December8,202210、閱讀讀一切切好書書如同同和過過去最最杰出出的人人談話話。12:03:4212:03:4212:0312/8/202212:03:42PM11、越是沒有有本領(lǐng)的就就越加自命命不凡。12月-2212:03:4212