第五章

黃酮類化合物

FLAVONOIDS

本章內(nèi)容

第一節(jié)概述第二節(jié)理化性質(zhì)第三節(jié)

提取分離第四節(jié)

檢識與結(jié)構(gòu)測定

結(jié)構(gòu)類型波譜特征酸性、顯色反應第一節(jié)

概述

此類化合物多為黃色，且具有酮式羰基，故稱黃酮類化合物。廣泛存在于植物中，不少的常用中藥中主要含有此類成分。以黃酮醇類最為常見，其次為黃酮類。大多與糖結(jié)合成苷，稱為黃酮苷類；有的以游離形式存在，即未與糖結(jié)合，稱為游離黃酮或黃酮苷元。一、基本結(jié)構(gòu)和分類（一）基本結(jié)構(gòu)1952年以前，黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮的一系列化合物。色原酮2-苯基色原酮（黃酮）

現(xiàn)在的黃酮類化合物則泛指兩個苯環(huán)（A與B環(huán)）通過中央三碳鏈相互連接而成的一類化合物。

C6-C3-C6BAC母核上取代基常有酚羥基、甲氧基、甲基、異戊烯基等

根據(jù)B環(huán)連接位置（2位或3位）C環(huán)氧化程度（包括2，3位是否存在雙鍵；4位有無－C＝O）C環(huán)是否成環(huán)（1，2位是否開環(huán)）將黃酮類化合物分為以下七大類。1黃酮和黃酮醇2二氫黃酮和二氫黃酮醇3異黃酮和二氫異黃酮醇4查耳酮和二氫查耳酮

5橙酮類

6花色素和黃烷醇類

7其他（二）結(jié)構(gòu)類型BCA１．黃酮類（flavones）約占黃酮類化合物總數(shù)的1/4

結(jié)構(gòu)特點2-苯基色原酮為基本母核且3位上無含氧基團取代

木犀草素（luteolin）存在于忍冬藤、菊花、金銀花、浮萍中，具有抗菌作用２．黃酮醇類（flavonols）

約占黃酮類化合物總數(shù)的1/3結(jié)構(gòu)特點2-苯基色原酮為基本母核3位上連有羥基或其他含氧基團槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。蘆丁(rutin)是槲皮素的３－O蕓香苷。３．二二氫黃黃酮類類(flavanones)結(jié)構(gòu)特特點2-苯苯基色色原酮酮母核核的2、3位雙雙鍵被被氫化化而成成4．二二氫黃黃酮醇醇類(flavanonols)結(jié)構(gòu)特特點具有黃黃酮醇醇類的的２、、３位位被氫氫化的的基本本母核核常與相相應的的黃酮酮醇共共存于于同一一植物物體中中水飛薊薊素是是二氫氫黃酮酮醇與與苯丙丙素衍衍生物物縮合合成的的黃酮酮木脂脂素類類成分分。具有保保肝作作用，，用于于治療療急、、慢性性肝炎炎及肝肝硬化化，代代謝中中毒性性肝損損傷。。5．查查耳酮酮類與與二氫氫查耳耳酮結(jié)構(gòu)特特點黃酮C環(huán)的的1、、2位位鍵斷斷裂生生成的的開環(huán)環(huán)衍生生物，，即三三碳鏈鏈不構(gòu)構(gòu)成環(huán)環(huán)。查耳酮酮α，，β位位雙鍵鍵氫化化二氫查查耳酮酮查爾酮酮其鄰鄰羥基基衍生生物可可視為為二氫氫黃酮酮的異異構(gòu)體體，二二者可可相互互轉(zhuǎn)化化。二氫黃黃酮的的吡酮酮環(huán)芳芳香性性低，，在堿堿的作作用下下易開開環(huán)生生成6’-羥基基查耳耳酮，，由無無色轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)為深深黃色色，后后者經(jīng)經(jīng)酸化化又能能轉(zhuǎn)化化為原原來的的二氫氫黃酮酮。紅花苷苷梨根苷苷6.異異黃酮酮類與與二氫氫異黃黃酮類類結(jié)構(gòu)特特點母核為為3-苯基基色原原酮的的結(jié)構(gòu)構(gòu)，即即B環(huán)環(huán)連接接在C環(huán)的的3位位上異黃酮酮的2、3位被被氫化化7．雙雙黃酮酮類結(jié)構(gòu)特特點二分子子黃酮酮衍生生物聚聚合生生成的的二聚聚物，，多為為兩分分子芹芹菜素素通過過3’’-8”／／8’’-8”／／醚鍵鍵連接接構(gòu)成成，多多分布布于裸裸子植植物中中。銀銀杏中中含有有多種種雙黃黃酮，，如銀銀杏素素。8．花色素素類一類以以離子形形式存在的的色原烯烯的衍衍生物物，C環(huán)無無羰基基。是使花花、葉葉、果果、莖莖等呈呈現(xiàn)藍藍、紫紫、紅紅等顏顏色的的色素素。以以苷的的形式式存在在于細細胞液液中。。飛燕草草苷元元9．黃黃烷-3-醇及及黃烷烷-3，4-二二醇類類生源上上是由由二氫氫黃酮酮醇類類還原原而來來，可可看成成是脫去C4位位羰基基氧原子子后的的二氫氫黃酮酮醇類類化合合物10．．橙酮酮類可看作作是黃黃酮的的C環(huán)分分出一一個碳碳原子子變成成五元元環(huán)，其余余部位位不變變，但但C原原子定定位有有所不不同。。是黃酮酮的同同分異異構(gòu)體體，屬屬于苯苯駢呋呋喃的的衍生生物硫磺菊菊素11．．雙苯苯吡酮酮類基本母核核由苯環(huán)環(huán)與色原原酮的２２，3位位駢合而而成石韋中的的異芒果果素具有有止咳祛祛痰的功功效。12、、高異異黃酮類類13、、其他黃黃酮類類復雜衍衍生物：：包包括黃黃酮木脂脂體類；；生物堿堿型黃酮酮等二、黃酮酮類化合合物的生生物合成成途徑查耳酮合合成酶三、黃酮酮類化合合物的生生物活性性1.對對心血管管系統(tǒng)的的作用Vp樣作作用：蘆丁、橙橙皮苷，，能降低低血管脆脆性及異異常通透性，可可用作防防治高血血壓的輔輔助治療療劑。擴冠作用用：蘆丁、槲槲皮素、、葛根素素臨床用用于心絞絞痛和高血壓。。降血脂及及膽固醇醇：木樨樨草素、山楂總總黃酮抑制血小小板聚集集2.抗抗肝臟毒毒作用水飛薊素素具有保保肝作用用3.抗抗炎蘆丁、羥羥乙基蘆蘆丁、二二氫槲皮皮素等4.抗抗菌及抗抗病毒作作用黃芩苷：：抗菌山山奈奈酚：抗抗病毒5.解解痙作用用異甘草素素、大豆豆素：解解除平滑滑肌痙攣攣；6.雌雌性激素素樣作用用大豆素等等異黃酮酮具有雌雌性激素素樣作用用可能與它它們與己己烯雌酚酚結(jié)構(gòu)類類似有關(guān)關(guān)7.清清除人體體自由基基作用8.抗抗腫瘤作作用第二節(jié)黃黃酮類類化合物物的理化化性質(zhì)及及顏色反反應一、物理理性質(zhì)1、性狀狀多為結(jié)晶晶性固體體，少為為（如黃黃酮苷類類）無定定形粉末末2、旋光光性：游離苷元元中，除二氫黃黃酮(醇醇)、黃黃烷(醇醇)及二二氫異黃黃酮類有有旋光外外，其余無無旋光性性。苷類由于于結(jié)構(gòu)中中引入糖糖的分子子，均有旋光光性，且多為為左旋。3.顏顏色：①分子中中是否存存在交叉叉共軛體體系②助色團團的數(shù)目目與位置置色原酮部部分原本本無色，，但在2位引入入苯環(huán)后后，即形形成交叉叉共軛體體系，且且通過電電子的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移，重重排，使使共軛鏈鏈延長，，而表現(xiàn)現(xiàn)出顏色色。黃酮、黃黃酮醇及及苷類灰灰黃黃-黃色色查耳酮黃黃-橙黃色色二氫黃酮酮、二氫氫黃酮醇醇無無色色異黃酮微微黃色其中，黃黃酮、黃黃酮醇及及苷類、、查耳酮酮等因分分子中存存在交叉叉共軛體體系，在在7,4’’位引入入-OH,OCH3等供電子子基團，，使化合物物顏色加加深。花色素及其苷的的顏色隨隨pH的的不同而而改變：：呈現(xiàn)紅紅（pH<7）），紫（（pH8.5））、蘭（（pH>8.5）二.溶溶解性符合苷的的溶解性性規(guī)律。。但水溶溶性與結(jié)構(gòu)的平平面性、取代基團團的種類類和數(shù)目目等有一定定關(guān)系。。平面型分分子非非平面型型分子黃酮二二氫類類（C-環(huán)環(huán)半椅式式結(jié)構(gòu)））黃酮醇異異黃酮（（羰基與與B-環(huán)環(huán)立體障障礙）查耳酮R=OH二二氫黃酮酮醇R=H二二氫黃酮酮分子堆砌砌緊密，，分子間間引力較較大，水水溶度小小分子間排排列不緊緊密，水水分子易易于進入入，水溶溶度大（1）分分子的立立體結(jié)構(gòu)構(gòu)（2）取取代基團團的性質(zhì)質(zhì)、數(shù)目目、連接接位置引入羥基基數(shù)目多多，水溶溶度較大大。羥基甲基基化（-OCH3）,水溶溶度降低低。（1）三三糖苷>雙雙糖苷>單單糖苷>苷苷元（2）3-O-糖苷>7-O-糖苷（（平面性性分子））（3）花花色素(離子型型)>非平平面性分分子>平面面性分子子（3）黃黃酮苷(親水性性)易溶于H2O,MeOH,EtOH等，難難溶或不不溶于苯，氯仿仿等黃酮類化化合物溶溶解性（（極性））規(guī)律:花色素類雖系平面型分子，但因以離子形式存在，具有鹽的通性，故親水性較強，水溶度較大。三、酸堿堿性（1）酸酸性多具有酚羥基而呈酸性性可溶于堿堿性水液液：吡啶啶，甲酰酰胺及二二甲基甲甲酰胺。。酸性規(guī)律律a、7，，4‘-OH酸酸性強于于其他位位置羥基基的酸性性（處于于羰基對對位，羰羰基的共共軛誘導導）。b、5-OH酸酸性最弱弱（處于于羰基鄰鄰位，形形成分子子內(nèi)氫鍵鍵）。c、酚羥羥基數(shù)目目越多，，酸性越越強。羥基位置置酸酸性溶溶解性性7，4‘‘-二羥羥基強強溶溶于于5%NaHCO37或4‘‘-羥基基溶溶于5%Na2CO3一般酚羥羥基溶溶于于0.2%NaOH5-羥基基弱弱溶溶于4%NaOH溶溶液（2）堿堿性-吡喃酮酮上的1-位氧氧原子上有未共共用電子子對，表表性微弱弱的堿性性。可與強無無機酸如如濃硫酸酸，鹽酸酸生成洋鹽，但極極不穩(wěn)定定，加水水即可分分解。在濃硫酸中生成的的洋鹽常常表現(xiàn)特特殊的顏顏色，可可用于鑒鑒別。黃酮、黃黃酮醇———黃~橙色，，并有熒熒光二氫黃酮酮——橙橙紅（冷冷）、紫紫紅（熱熱）查耳酮———橙紅紅~洋紅紅異黃酮（（二氫））——黃黃色橙酮———紅紅~洋洋紅四、顯色色反應(一)還還原反應應1.鹽鹽酸-鎂鎂粉（鹽鹽酸-鋅鋅粉）反反應———鑒定黃酮、黃黃酮醇及及二氫黃黃酮、二二氫黃酮酮醇———（＋））橙紅-紫紅色B環(huán)有-OH或或OCH3取代代時，顏顏色隨之之加深查耳酮、、橙酮、、兒茶素素———（－））但遇濃HCL色色變，需需做空白白對照異黃酮———個別別陽性，，大多陰陰性2.四四氫硼鈉鈉（鉀））反應———專屬屬鑒別二氫黃酮酮類——（＋＋)紅-紫色其它它——（（－）取樣樣品品10mg溶溶于于甲甲醇醇，，加加NaBH410mg，，再再滴滴加加1%濃濃鹽鹽酸酸或或濃濃硫硫酸酸，，呈呈紅紅-紫紫色色。。3.磷磷鉬鉬酸酸試試劑劑反反應應二氫氫黃黃酮酮類類————（（＋＋））棕褐褐色色（二二））金金屬屬鹽鹽類類試試劑劑的的絡(luò)絡(luò)合合反反應應黃酮酮類類化化合合物物分分子子結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)中中多多有有一一下下結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)，，常常可可與與鋁鋁鹽鹽、、鉛鉛鹽鹽、、鋯鋯鹽鹽、、鎂鎂鹽鹽等等試試劑劑生生成成有有色色絡(luò)絡(luò)合合物物。。1.鋁鋁鹽鹽常用用試試劑劑：：1%AlCl3或Al(NO3)3生成成絡(luò)絡(luò)合合物物為為黃色色(max=415nm)，，并并有有熒熒光光。。2.鉛鉛鹽鹽常用用試試劑劑：：1%PbAc2或或堿堿式式醋醋酸酸鉛鉛生成成黃-紅紅色色沉沉淀淀。醋酸酸鉛鉛可可沉沉淀淀具具有有鄰鄰二二酚酚羥羥基基或或兼兼有有3-OH,4=O或或5-OH,4=O者者。。堿式式醋醋酸酸鉛鉛可可沉沉淀淀具具有有一一般般酚酚類類化化合合物物。。3.鋯鋯鹽鹽:常用用試試劑劑：：2%二二氯氯氧氧化化鋯鋯甲甲醇醇液液絡(luò)合合物物穩(wěn)穩(wěn)定定性性次次序序：：3-OH,4-酮酮基基絡(luò)絡(luò)合合物物>5-OH,4-酮酮基基絡(luò)絡(luò)合合物物4.鎂鎂鹽鹽醋酸酸鎂鎂甲醇醇液液作作顯顯色色劑劑，，可可在在紙紙上上進進行行，，加加熱熱，，紫紫外外檢檢視視：：二氫氫黃黃酮酮（（醇醇））類————天天藍藍色色熒熒光光若具具有有C5-OH，，色色澤澤更更明明顯顯。。黃酮酮、、黃黃酮酮醇醇及異黃黃酮酮類————黃黃-橙橙黃黃-褐褐色色。。5.氯氯化化鍶鍶(SrCl2)具有有鄰二二酚酚羥羥基基的黃黃酮酮————綠綠-棕棕色色-黑黑色色沉沉淀淀。。用于于鑒鑒別別6.氯氯化化鐵鐵(FeCl3)————檢檢查查一般般酚酚羥羥基基多數(shù)數(shù)黃黃酮酮類類化化合合物物具具有有酚酚羥羥基基————（（＋＋））（三三））硼硼酸酸顯顯色色反反應應當黃黃酮酮類類化化合合物物分分子子中中適適當當位位置置上上有有羥羥基基時時，，在在無無機機酸酸或或有有機機酸酸存存在在條條件件下下，，可可與與硼硼酸酸反反應應生生成成六六元元環(huán)環(huán)絡(luò)絡(luò)合合物物，，呈呈亮亮黃黃色色條件件：：1具具有有下下列列結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)（（5-羥羥基基黃黃酮酮，，2’’-羥羥基基查查耳耳酮酮）2有有無無機機酸酸或或有有機機酸酸存存在在在草酸酸存在在下下，，顯顯黃色色并并帶帶綠綠色色熒熒光光。在枸櫞櫞酸酸丙丙酮酮存在在條條件件下下，，只只顯黃黃色色而而無無熒熒光光。（四四））堿堿性性試試劑劑顯顯色色反反應應日光光及及紫紫外外光光下下，，通通過過紙紙斑斑反反應應，，觀觀察察樣樣品品用用堿堿性性試試劑劑處處理理后后的的色色變變情情況況。。1.二二氫氫黃酮酮類易在堿堿液中中開環(huán)環(huán)，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)變成成相應應異構(gòu)構(gòu)體(查耳耳酮類類化合合物)，顯橙-紅色色。2.黃黃酮酮醇類類在堿液液中先呈黃黃色，通入空空氣后后變?yōu)闉樽厣獡?jù)據(jù)此可可與黃黃酮類類區(qū)別別。3.黃黃酮酮類當分子子中有有鄰二酚酚羥基基取代或或3,4’-二羥羥基取代時時，在在堿液液中不不安定定，很很快氧氧化，，由黃色色深紅色色綠棕色色沉淀淀。(五)與五五氯化化銻的的反應應查耳酮酮的CCl4溶溶液———紅或紫紫紅沉沉淀黃酮、、黃酮酮醇、、二氫氫黃酮酮類———黃黃-橙橙黃色色。（六））Gibbs反反應———5-OH對對位未未被取取代的的黃酮酮。將樣品品溶于于吡啶啶中，，加入入Gibbs試試劑顯顯藍或藍藍綠色色。Gibbs試劑劑:甲液：：0.5%2,6-二氯氯苯醌醌-4氯亞亞胺的的乙醇醇溶液液。乙液：：硼酸酸-氯氯化鉀鉀-氫氫氧化化鉀緩緩沖液液(pH9.4)鑒別下下列化化合物物1.Molish反應(+)C(-)AB鋯鹽＋＋枸櫞櫞酸黃色褪褪去A黃色不不褪B鑒別下下列化化合物物2.第三節(jié)節(jié)黃黃酮酮類化化合物物的提提取分分離一、提提取根據(jù)化化合物物極性性不同同，溶溶解性性不同同，采采用不不同溶溶劑提提取。。1.苷苷元多用CHCl3、Et2O、EtOAc等極極性較較小有有機溶溶劑提提取對于多多OCH3化的成成分，，用苯苯、石石油醚醚提取取；對于極極性大大的成成分，，如查查耳酮酮、橙橙酮、、雙黃黃酮、、羥基基黃酮酮等，，用EtOAc、EtOH、、Me2CO、、MeOH等溶溶劑提提取。。2.苷苷類類——水水或熱熱水提提取，，（多多糖苷苷在熱熱水中中溶解解度較較大，，在冷冷水中中溶解解度較較小））；——也也可用用EtOH、MeOH、、EtOAc提提取。。3.含含酚酚羥基基的苷苷或苷苷元，，可用用堿水水或堿堿性醇醇提取取。二、粗粗提物物的精精制處處理1．溶溶劑萃萃取法法黃酮與與雜質(zhì)質(zhì)分離依依據(jù)：：成分分之間間苷苷與與苷元元之之間的的極性性差異異苷元與與苷元元石油醚醚液乙乙醚液液乙乙酸乙乙酯水水飽飽和正正丁醇醇母母液液（葉綠綠素、、油脂脂素（（蛋蛋白質(zhì)質(zhì)、糖糖等等脂溶性性雜質(zhì)質(zhì)）回收回收減壓回回收水溶性性雜質(zhì)質(zhì))苷元單單糖糖苷多多糖苷苷原料的的提取取濃縮縮液（（水溶溶液））2．堿堿水提提酸沉沉淀法法適用于于含酚羥羥基的化合合物，，此類類易溶溶于堿堿水，，故可可用堿堿水提提取，，再將將堿水水提取取液調(diào)調(diào)成酸酸性，，黃酮酮類即即可沉沉淀析析出。。注意事項：：①酸堿度不不宜過大避免在強堿堿性、加熱熱條件下，，破壞黃酮酮母核；酸化時酸性性也不易過過強，以免免生成佯鹽鹽使析出黃黃酮又溶解解了②鄰二酚羥羥基的保護護堿性條件下下，鄰二酚酚羥基易被被氧化，加加硼砂保護護③加石灰乳乳可除去果果膠、粘液液等水溶性性酸性雜質(zhì)質(zhì)（可使含羥羥基的雜質(zhì)質(zhì)生成鈣鹽鹽沉淀））3．炭炭粉吸附法法適用于苷類類的精制工工作。植物的甲醇醇提取液加加活性炭至至吸附完全全，過濾，，得吸附苷苷的活性炭炭粉末。依次用沸甲甲醇、沸水水、7%酚酚/水、15%酚/醇洗脫，，分步收集集、檢查、、合并。大部分苷類類可用7%酚/水水洗下，經(jīng)減減壓濃縮至至小體積，，乙醚除酚酚，余下水水層經(jīng)減壓壓濃縮得較較純黃酮苷苷。吸附原理異異黃酮、二二氫黃酮（（醇）氯氯仿-甲醇不同同比例（105℃℃，高高度甲基基化或乙酰?；S酮（（醇）混混合溶劑洗洗脫活化）（（極性小小）（加水失活活或不活化化）（（極極性大）（（80:20:1）等比例例1．硅膠柱柱色譜2．氧化鋁鋁柱色譜（（少）具有3-OH或5-OH、、4-羰基基及鄰二酚酚羥基黃酮酮類化合物物與鋁離子子絡(luò)和而被被牢固吸附附，難于洗洗脫。三、分離（一）柱色色譜法分配原理多多羥基基黃酮醇或或黃酮苷類類氯氯仿-甲甲醇-水3.聚酰胺胺層析(適用于分離離醌、酚、、黃酮)原理：酰胺胺羰基與黃黃酮酚羥基基形成氫鍵鍵締合而吸吸附，吸附附能力與酚酚羥基多少少、位置及及介質(zhì)有關(guān)關(guān)?！苽浞址蛛x洗脫劑：常常用水-乙乙醇水可洗下非非黃酮的水水溶性成分分及少數(shù)黃黃酮苷；10%-30%醇可洗下下黃酮苷；；50-95%乙醇醇可洗下黃酮苷苷元各種溶劑在在聚酰胺柱柱上洗脫能能力由弱至強依次為：水，甲醇，，丙酮，氫氫氧化鈉水水溶液，甲甲酰胺，二二甲基甲酰酰胺，脲素素水溶液吸附規(guī)律：：（1）酚羥羥基數(shù)目越越多，吸附附能力越強強。（2）酚羥基基數(shù)目相同的的情況下，酚酚羥基所處的的位置有利于于形成分子內(nèi)內(nèi)氫鍵，吸附附能力減弱。。3-OH或5-OH黃酮酮的吸附力小小于其他位置置-OH黃酮酮；鄰二酚羥基黃黃酮的吸附力力弱于間位或或?qū)ξ环恿u基基黃酮（3）分子內(nèi)內(nèi)芳香化程度度越高，共軛軛雙鍵越多，，吸附力越強強。查耳酮>二二氫黃酮（4）不同黃黃酮母核被吸吸附強弱：黃黃酮醇>黃黃酮>二二氫黃酮醇醇>異黃黃酮（5）與介質(zhì)質(zhì)的關(guān)系：吸吸附力水水（中）>甲甲醇、乙醇醇（濃度由由低到高）>丙酮>堿性溶劑劑>甲酰酰胺>DMF>尿尿素水洗脫規(guī)律：與與吸附規(guī)律正正好相反，即即吸附能力越越強，越難洗洗脫聚酰胺“雙重重色譜”原理理類似正相色譜譜類類似反反相色譜聚酰胺：極性性固定相（極極性酰胺基團團）非非極性固定定相（非極性性脂肪鏈）洗脫劑：有機機溶劑（氯仿仿-甲醇，極極性?。┖軇准状?水，極極性大）先洗脫：苷元元>苷叁叁糖苷>雙糖苷>單糖苷苷>苷元元（柱色譜分離離）Rf值：苷苷元>苷苷苷苷元<苷（（TLC色色譜鑒別）上述規(guī)律也適適用于黃酮類類化合物在聚聚酰胺薄層上上的行為。不符合氫鍵吸吸附規(guī)律符合氫鍵吸附附規(guī)律4.葡聚糖凝凝膠柱色譜主要用兩種型型號的凝膠Sephadex-G型型（適用于水水溶性成分分分離）Sephadex-LH20型（可可用于親脂性性成分分離））原理：游離黃酮———吸附作用洗脫順序：極極性小大。黃酮苷類———分子篩作用洗脫順序：分分子大小?？偟南疵擁樞蛐颍禾嵌嗟能仗巧俚能沼坞x苷元（極極性小大）常用洗脫劑：：①堿水（0.1mol/LNH4OH），鹽水（0.5mol/LNaCl）②醇及含水醇醇③含水丙酮，，甲醇－氯仿仿（二）pH梯度萃取法法——利用酸酸性強弱適合于酸性強弱不同同的黃酮苷元的的分離。根據(jù)黃酮類苷苷元酚羥基數(shù)目及及位置不同其酸性強弱也也不同的性質(zhì)質(zhì)，將混合物物溶于有機溶溶劑，依次用用５％NaHCO3,５％Na2CO3,0.2%NaOH,4%NaOH萃取，7,4’-二二羥基7或4’羥基基一般酚羥基５-羥基黃酮酮（三）根據(jù)分分子中某些特特定官能團進進行分離（1）醋酸鉛鉛沉淀法一般酚羥基的的成分可被堿堿式醋酸鉛沉沉淀，但有鄰二酚羥基的成分可被醋醋酸鉛沉淀，，據(jù)此可將兩兩類成分分離離。（2）硼酸絡(luò)絡(luò)合法根據(jù)具有鄰二酚羥基的黃酮與與硼酸絡(luò)合，，生成物易溶溶于水的性質(zhì)質(zhì)與其它類型型黃酮分離。。通常在不與水水混溶的有機機溶劑如乙醚醚中，用硼酸酸液萃取，水水相即為鄰二二酚羥基類黃黃酮。第四節(jié)黃黃酮類化化合物的檢識識與結(jié)構(gòu)測定定目前主要采用用的方法有：：①色譜方法與標準品或與與文獻對照PPC或TLC得到的Rf②化學鑒別反反應顯色、鉛鹽沉沉淀③光譜方法UV光譜：分分析對比樣品品在甲醇溶液液中及加入酸酸、堿或金屬屬鹽類試劑后后UV光譜的變變化1H-NMR、13C-NMR、MS一、色譜法在在黃酮類鑒定定中的作用紙層析(PPC)原理：分配原原理適用范圍：黃黃酮苷元及苷苷的分離鑒別別苷元則多采用用醇性溶劑展展開，苷類成分可采采用雙相展開開，第一相展開：：醇性溶劑，，如BAW系系統(tǒng)（正丁醇醇：醋酸酸：水4：1：5）—分分配原理第二相展開：：水性溶劑，，如醋酸水——吸附原理理雙相色譜第I向醇醇性展開劑第第II向水水性展開開劑（BAW、TBA、水飽飽和正丁醇））（（2~6%HAc、3%NaCl、1%HCl））正相色譜反反相色譜譜固定相（水））極性>流流動相Rf規(guī)律：極極性小的化合合物Rf大極極性性大的化合物物Rf大苷元（0.7以上）>單單糖苷>雙糖糖苷（0.7以下）苷元中，平面面型分子>非非平面型分子子Rf規(guī)律與左左邊相反母核相同，一一OH>二OH>三OH>四OH>五OH黃酮酮苷元的分離鑒鑒別黃黃酮苷及花色色素類2.薄層層層析(TLC)１）硅膠薄層層用于弱極性黃黃酮。２）聚酰胺層層析適用范圍廣，，可分離含游游離酚羥基或或其苷類。各種色譜的檢檢識：日光下觀察——多數(shù)黃酮有有黃色斑點紫外光下觀察察—多數(shù)黃酮酮呈黃綠色熒熒光斑點氨蒸氣熏—多多數(shù)黃酮有顏顏色變化噴顯色劑（2%AlCl3甲醇液）—多多數(shù)黃酮黃色色變深，熒光加強強二、紫外光譜譜在黃酮類鑒鑒定中的應用用可用于確定黃黃酮母核類型型及確定某些些位置是否含含有羥基。一般程序：①測定樣品在在甲醇中的UV譜以了解解母核類型；；②在甲醇溶液液中分別加入入各種診斷試試劑后測UV譜以了解3,5,7,3’,4’’有無羥基及及鄰二酚羥基基；常用的診斷試試劑有甲醇鈉鈉（NaOMe）、醋酸酸鈉（NaOAc）、醋醋酸鈉/硼酸酸（NaOAc/H3BO3）、三三氯化鋁（AlCl3））及三氯化鋁鋁/鹽酸（AlCl3/HCl）等等③苷類可水解解后（或先甲甲基化再水解解），再用上上法測苷元的的UV譜以了了解糖的連接接位置。（一）在甲醇醇溶液中的紫紫外光譜多數(shù)黃酮類化化合物由兩個個主要吸收帶帶組成：帶Ⅰ（300-400nm））——由B環(huán)環(huán)桂皮?；迪到y(tǒng)引起，主主要反應B環(huán)環(huán)取代情況；；帶Ⅱ（220-280nm）——由A環(huán)苯甲酰基基系統(tǒng)引起，，主要反應A環(huán)取代情況況（1）黃酮、、黃酮醇：在200-400nm之間出現(xiàn)兩兩個主要吸收收峰，二者峰峰形相似，但帶Ⅰ位置不不同，可據(jù)此進行行分類。母核上如7-及4‘位位引入羥基、甲氧基等供電基取代代——相應吸收收帶紅移通常整個母核核上氧取代程程度越高，帶帶Ⅰ越向長波波方向位移。。帶Ⅱ的峰位主主要受A-環(huán)環(huán)氧取代程度度的影響，但但B-環(huán)的取取代基可影響響它的形狀。。當B環(huán)有3‘，4‘-二氧取代時時，帶Ⅱ?qū)闉殡p峰。（2）查耳酮酮及橙酮類：：共同特征是帶Ⅰ強，為為主峰；帶ⅡⅡ較弱，為次次強峰。查耳酮：帶ⅡⅡ位于220～270nm；帶Ⅰ位于340～390nm；橙酮：常顯現(xiàn)現(xiàn)3～4個吸吸收峰，但主主要吸收峰一一般位于370～430nm。（3）異黃酮酮、二氫黃酮酮及二氫黃酮酮醇有由A-環(huán)苯苯甲酰系統(tǒng)引引起的帶Ⅱ吸吸收但因B環(huán)不與與吡喃酮環(huán)上上的羰基共軛軛（或共軛很很弱），故帶帶Ⅰ很弱。二氫黃酮（醇醇）異異黃酮帶II(240-285nm)（苯甲酰系統(tǒng)）帶I(300-400nm)桂皮酰系統(tǒng)類型說明250-285304-350黃酮類-OH越多，帶I、II越紅移；B環(huán)3’,4’有-OH基，帶II為雙峰（主峰伴肩峰）328-357黃酮醇類(3-OR)352-385黃酮醇類(3-OH)245-270

異黃酮B環(huán)上有-OH,OCH3對帶I影響不大

270-295

二氫黃酮（醇）220-270(較弱)340-390或340-390(Ia)和300-320(Ib)查耳酮類查耳酮2’或4-OH使帶I紅移370-430(3-4個小峰)橙酮類

不同類型黃酮酮類化合物的的紫外光譜2．加入診斷斷試劑后引起起的位移及結(jié)結(jié)構(gòu)測定P191表表5－11診斷試劑帶II帶I說明樣品+MeOH

250-285304-385

兩峰強度基本相同，具體位置與母核上電負性取代基(-OH,-OCH3)有關(guān)，-OH,-OCH3越多，越紅移

NaOMe

紅移40-60nm（強度不變）有4’-OH

紅移50-60nm（強度下降）有3-OH，無4’-OH帶I，II隨加NaOMe時間延長，逐漸衰減有3,4’-OH或3,3’,4’-OH等

（對堿敏感）

NaOAc(未熔融)紅移5-20nm

長波一側(cè)有肩峰7-OH有4’－OH，但無3-OH或7-OHNaOAc(熔融)

紅移40-65nm（強度下降）4’－OH隨時間而衰退有3,4’-OH或3,3’,4’-OH等

（對堿敏感）

診斷試劑帶II帶I說明NaOAc/

H3BO3

紅移12－30nmB環(huán)有鄰二酚羥基紅移5－10nm

A環(huán)有6,7-OH或7,8-OH(5,6-OH無)AlCl3及AlCl3/HClAlCl3/HCl圖＝AlCl3圖無鄰二酚羥基AlCl3/HCl圖≠AlCl3圖有鄰二酚羥基

紫移30－40nmB環(huán)有鄰二酚羥基紫移50－65nmA、B環(huán)均可能有鄰酚二羥基AlCl3/HCl圖＝MeOH圖無3－及5－OHAlCl3/HCl圖≠MeOH圖可能有3－及或5－OH

紅移35－55nm有5－OH紅移60nm有3－OH紅移50－60nm可能同時有3－及5－OH紅移17－20nm除有5－OH外還有6－含氧取代說明：1）+NaOMe（堿性性強）,所所有酚OH解解離，紅移另有有3,4’-OH或或3,3’,4’-OH時，在NaOMe作用用下易氧化破破壞，故峰有有衰減。2）NaOAc為弱堿，，僅使酸性較較強者，如7,4’-OH解離。3）與ALCL3形成絡(luò)絡(luò)合物的能力力：3-OH黃酮酮醇>5-OH黃酮酮>鄰二酚酚羥基>5-OH二二氫黃酮醇不在酸性條件件下，五者皆皆與Al3+絡(luò)合但酸性條件下下，鄰二酚羥羥基和5-OH二氫黃酮醇不不與AlCl3絡(luò)合二者相減可檢檢測鄰二酚羥羥基。形成絡(luò)合物越越穩(wěn)定，紅移移越多。A環(huán)質(zhì)子B環(huán)質(zhì)子C環(huán)質(zhì)子糖糖上上質(zhì)子取取代基團團質(zhì)子芳環(huán)質(zhì)子芳芳環(huán)質(zhì)子子與類型有關(guān)關(guān)端基質(zhì)子-OH、、-CH3、其它質(zhì)子-OCH3、-OCOCH3黃酮類化合合物各質(zhì)子子的信號特特征（δ、、峰形狀、、J、峰面面積）δA-H5.7~7.1常見5，7-二OH或7-OH取代δB-H6.5~7.9常見4’-氧代或3’、4’’-二氧代代gluH-1″″位于低低場δ較大4.8~5.70ppm三、1H-NMR（一）A環(huán)環(huán)質(zhì)子1．5,7-二OH黃酮H-6及H-8δδ5.7~6.9（（J=2.5Hz）二重峰峰H-6較H-8在高高場7-OH成成苷時，則則H-6及及H-8信信號均向低低場位移。。1)黃酮酮（醇）及及異黃酮：：H-6(6.0～6.2,d,J=2.5Hz)；；H-8(6.3～6.5,d,J=2.5Hz)7-O-糖糖苷：H-6(6.2～6.4,d,J=2.5Hz)；H-8(6.5～6.9,d,J=2.5Hz)2)二氫氫黃酮及二二氫黃酮醇醇：H-6(5.7～5.9,d,J=2.5Hz)；；H-8(5.9～6.1,d,J=2.5Hz)7-O-糖糖苷：H-6(5.9～6.1,d,J=2.5Hz)；H-8(6.1～6.4,d,J=2.5Hz)2．7-OH黃酮H-5較H-6、H-8低場場，是由于羰羰基的負屏屏蔽效應的的影響。H-6、H-8較5,7-二OH黃黃酮中處于于低場，且且相互位置置可能顛倒倒。1）黃酮、、黃酮醇及及異黃酮：：H-5（7.9～8.2,d,J=9.0Hz）H-6（6.7～7.1,dd,J=9.0,2.5Hz）H-8（6.7～7.0,d,J=2.5Hz)2）二氫黃黃酮及二氫氫黃酮醇：：H-5(7.7～7.9,d,J=9.0Hz)H-6(6.4～6.5,dd,J=9.0,2.5Hz)H-8(6.3～6.4,d,J=2.5Hz)（二）B環(huán)質(zhì)質(zhì)子1．4’-氧取代黃黃酮類化合合物δ6.5-8.1C環(huán)對H-2’,6’的負負屏蔽作用用大于對H-3’,5’；；H-3’,5’受受4’-OR的屏蔽蔽作用——H-2’,6’較較H-3’’,5’’處于低場場；C環(huán)氧化程程度越高，，H-2’’,6’’處于越低低場的位置置。H-3’,5’6.5-7.1,d,J=8.5HzH-2’,6’7.1-8.1,d,J=8.5HzH-2‘,H-6‘δδ7.1～～8.1(d,J=7～9Hz)與C環(huán)有關(guān)關(guān)，據(jù)此可可判斷C環(huán)環(huán)氧化程度度。二氫黃酮類類(7.1～7.3,d);二氫黃酮醇醇類(7.2～7.4,d);異黃酮類(7.2～～7.5,d)；；查耳酮類H-2,H-6(7.4～7.6,d);橙酮類(7.6～7.8,d)；黃酮類(7.7～7.9,d);黃酮醇類(7.9～～8.1,d)2．3’,4’-二氧取代代黃酮類化化合物H-2’受受C環(huán)負屏屏蔽和3’’-OR屏屏蔽作用，，H-6’也也受C環(huán)環(huán)負屏蔽作作用，H-5’則則僅4’-OR屏蔽蔽作用故由低場到到高場的順順序為：H-6’H-2’H-5’。。（1）3’’,4’’-二氧取取代黃酮及及黃黃酮醇醇H-5’6.7-7.1d,J=8.5HzH-2’7.2-7.9d,J=2.5HzH-6’7.2-7.9dd,J=2.5,8.5Hz（2）3’’,4’’-二氧取取代異黃酮酮、二氫黃黃酮及二氫氫黃酮醇H-2’,5’,6’常作作為一個復復雜多重峰峰（通常為為兩組峰））6.7-7.13．3’,4’,5’-三三氧取代黃黃酮類化合合物若R1=R2=R3=H，則則H-2’’,6’為為單峰，6.7-7.5若上述條件件不成立，，則H-2’,6’’分別為二二重峰（J=2Hz）（三）C環(huán)質(zhì)質(zhì)子C環(huán)特征是是區(qū)別各類型型黃酮類化化合物的主要依據(jù)據(jù)1.黃酮酮類H-3δδ6.3（（s）2.異黃黃酮類H-2位于于羰基位，同時受受羰基和苯苯環(huán)的負屏屏蔽作用，，且通過碳碳與氧相連連，故較一一般芳香質(zhì)質(zhì)子低場。。H-2δδ7.6-7.8(S)3.二氫氫黃酮和二二氫黃酮醇醇1)二氫氫黃酮H-3a,H-3b，dd，δ2.8H-3aJ=17Hz（（偕偶），，5Hz（（順偶）H-3bJ=17Hz（（偕偶），，11Hz（反偶））H-2,dd,δδ5.2,Jtrans=11Hz（反反偶）Jcis=5Hz（順偶））（2）二氫氫黃酮醇3-OH苷苷化，供電電子能力下下降，兩個個氫的δ值值升高（向向低場位移移），可用用于判斷二二氫黃酮醇醇苷中糖的的位置。H-2與與H-3為為反反式式雙雙直直立立鍵鍵，，J=11HzH-2δδ4.9,dH-3δδ4.3,d4.查查耳耳酮酮5.橙橙酮酮（四四））糖糖上上的的質(zhì)質(zhì)子子單糖糖與與苷苷元元相相連連時時，，糖上上1??-H與與其其它它H比比較較，，一一般般位位于于較較低低磁磁場場區(qū)區(qū)（（4.0-6.0））。-OR(R=苷苷元元)表表現(xiàn)現(xiàn)吸吸電電子子的的誘誘導導作作用用，，端端基基H受受兩兩個個O的的誘誘導導,故故處處于于低低場場葡萄萄糖糖位位于于不不同同位位置置時時端端基基H化化學學位位移移的的區(qū)區(qū)別別：：C3-OR1??-H約為為5.8C-5,C-6,C-7,C-4’’-OR1??-H約為為4.8-5.2鼠李李糖糖C-CH3δδ0.8-1.2（五五））取取代代基基質(zhì)質(zhì)子子（1））乙乙酰酰氧氧基基質(zhì)質(zhì)子子脂肪肪族族ROCOCH3（糖上））,其質(zhì)質(zhì)子δ1.6～～2.1,芳香族ArOCOCH3（苷元上上）,其其質(zhì)子δδ2.3～2.5，質(zhì)子數(shù)與與苷元酚酚OH數(shù)數(shù)有關(guān)。。（2）甲甲氧基質(zhì)質(zhì)子-OCH3一般在δ3.5～4.10(3Hs)（3）6-及8-C-CH3質(zhì)子6-及8-C-CH3δ2.0～2.5其中6-位CH3質(zhì)子的化化學位移移較8位位CH3質(zhì)子小0.2ppm左左右。（4）酚酚羥基質(zhì)質(zhì)子5-OHδ12.40(12.99)7-OHδ10.933-OHδ9.704’-OHδ(10.01)3’-OHδδ(9.42)四、13C-NMR（一）骨骨架類型型的判斷斷根據(jù)中央央三碳鏈鏈的碳信信號，即即先根據(jù)據(jù)羰基碳碳的δ值值，再結(jié)結(jié)合C2、C3的裂分分和δ值值判斷。。C=OC-2（或C-β）C-3（或C-α）歸屬168.6~169.8(s)137.8~140.7(d)122.1~122.3(s)異橙酮類

174.5~184.0(s)160.5~163.2(s)104.7~111.8(d)黃酮類

149.8~155.4(d)122.3~125.9(s)異黃酮類147.9(s)136.0(d)黃酮醇類182.5~182.7(s)146.1~147.7(s)111.6~111.9(d)(=CH-)橙酮類

188.0~197.0(s)

136.9~145.4(d)116.6~128.1(d)查耳酮類75.0~80.3(d)42.8~44.6(t)二氫黃酮類82.7(d)71.2(d)二氫黃酮醇（二）黃黃酮類化化合物取取代圖式式的確定定方法黃酮類化化合物中中芳香碳碳原子的的信號特特征可以以用來確確定取代代基的取取代圖式式。以黃酮為為例，其其13C-NMR信號號如下所所示：黃酮母核核13C-NMR信號號歸屬XZiZoZmZpOH26.6-12.81.6-7.1OCH331.4-14.41.0-7.8-OH及及-OCH3的的引入使使：直接相連連碳原子子(α-碳)大幅度地地向低場位移間位碳雖雖也向低低場位移移，但幅度很小小鄰位碳原原子(ββ-碳)及對位位碳則向向高場位位移1.推斷取代代基的連連接位置置——依依取代基基的位移移效應規(guī)規(guī)律A-環(huán)上上引入取取代基時時，位移移效應只只影響到到A環(huán)，，而B-環(huán)上引引入取代代基時，，位移效效應只影影響到B環(huán)。若若是一個個環(huán)上同同時引入入幾個取取代基時時，其位位移效應應將具有有某種程程度的加加和性。。2．確定定5，7-二羥羥基取代代黃酮圖圖式C-6(d)及及C-8(d)信號在在δ90．0～～100．0C-6信信號總是是比C-8信號號出現(xiàn)在在較低的的磁場尤其在黃黃酮及黃黃酮醇中中差別較較大，約約為4.8。3.確定定黃酮類類化合物物O-苷苷中糖的的連接位位置（1）糖糖的苷化化位移酚性苷中中，糖上端基基碳的苷苷化位移移約為+4.0～+6.0。。（2）苷苷元的苷苷化位移移苷苷元元糖苷化化后：與糖直接接相連碳碳原子（（a-C））向高場位位移，δ降低鄰位及對對位碳原原子則向向低場位位移，δ增大，，且對位碳碳原子的的位移幅幅度大而而且恒定定。五、質(zhì)譜譜在黃酮酮類結(jié)構(gòu)構(gòu)測定中中的應用用黃酮類化化合物主主要有下下列兩種種基本裂裂解途徑徑：途徑-I（RDA裂解解）：裂解規(guī)律律1．分子子離子峰峰為基峰峰—用用于測定定分子量量。2．主要要碎片離離子峰為為裂解途途徑I產(chǎn)產(chǎn)生的的A1和和B1及裂解途途徑II產(chǎn)生的的B2120102途徑-II兩種途徑徑裂解得得到的碎碎片離子子A1、B1、B2等，保留留著A-環(huán)、B-環(huán)的的基本骨骨架，且且碎片A1與相應的的B1碎片的質(zhì)質(zhì)荷比之之和等于于分子離離子的質(zhì)質(zhì)荷比母核推斷斷，A、B-環(huán)取代代情況確確定此外，還還有分子子離子M+生成成[M-1]+(M-H)及[M-28]+(M-CO)；；由A1生成[M-28]+(A1-CO)及B2生成成[B2-28]+(B2-CO)等碎片片離子。。-H黃酮類化化合物基基本裂解解M+（（基峰）），M-28（（M-CO），，120（A1+），，102（B1+），，92（（A1+-CO）A、B-環(huán)的取取代圖式式可分別別通過測測定A1+.B1+.的的m/z的值進進行推斷斷1．黃酮酮類主要按途途徑－ⅠⅠ進行裂裂解化合物A1+.B1+.黃酮1201025，7-二羥基黃酮1521025，7，4'-三羥基黃酮（芹菜素）1521185，7-二羥基，4'-甲氧基黃酮（刺槐素）152132（2）黃黃酮醇類類質(zhì)譜主要按途途徑－ⅡⅡ進行M+（（基峰）），105（B2+）），77（B2+－－CO））上述兩種種基本裂裂解途徑徑是相互互競爭，，相互制制約的，，且B2+，，B2+－CO的離離子豐度度與A1+，B1+及及A1+-CO的豐豐度互成成反比。。結(jié)構(gòu)研究究舉例某化合物物分子式式為C15H10O5，Mg-HCl反應陽陽性，根根據(jù)UV、1H-NMR數(shù)據(jù)據(jù)寫出化化合物結(jié)結(jié)構(gòu)，并并將1H-NMR數(shù)據(jù)據(jù)歸屬。。黃酮C15H10O2黃酮醇C15H9O3二氫黃酮酮C15H12O2二氫黃酮酮醇C15H11O3