電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性檢測試劑盒說明書可見分光光度法UPLC-MS-422450T/24S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶-20℃保存試劑二液體15mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體80mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：112.67mL-20℃42、標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL的對硝基苯酚溶液。β-GAL(EC3)β-β-β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升β-GALp-Nitrophenylβ-D-Galactopyranoside

β-GAL

p-Nitrophenol(400nm)2-3/1mL/一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（104）：500~1000：1的比例（5001mL）冰浴，功率200W3s10s30次）；15000g4℃10min2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。二、測定步驟130min400nm2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：用蒸餾水將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：序號（nmol/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（nmol/mL）150008019202002200100010001003100100010005045010001000255251000100012.5612.5100010006.2576.25010000（空白管）備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需500μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）：試劑名稱（μL）測定管對照管標(biāo)準(zhǔn)管試劑一200蒸餾水200試劑二250250樣本5050迅速混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確水浴30min標(biāo)準(zhǔn)液500試劑三100010001000充分混勻，于400nm處測定吸光值A(chǔ)，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA測定=A測定管ΔA=A-A1-2次。三、β-GAL活性計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度（x，ΔA標(biāo)準(zhǔn)）和濃度（y，nmol/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（x，ΔA測定）帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算樣本生成的產(chǎn)物量y（nmol/mL）。2、β-GAL活性計(jì)算：mg1nmol對-β-GAL活力(U/mgprot)=(y×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T=20×y÷Cpr單位的定義：每g組織每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。β-GAL活力(U/g質(zhì)量反總樣樣總單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。β-GAL活力(U/104cell)=(y×V反總)÷(500×V樣÷V