電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)乳酸（LA）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4308規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液一液體60mL×1瓶4℃保存提取液二液體10mL×1瓶4℃保存試劑一液體6mL×1瓶4℃保存試劑二液體34μL×1支4℃保存試劑三液體8mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×1瓶-20℃保存試劑五液體2mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1EP管中。臨用前按試劑二蒸餾水（V）=10μL：450μL劑二溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；2、試劑四：臨用前每瓶加入3mL蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融，-20℃保存4周；3、標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1.04mL蒸餾水配成100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；4℃保存4周。產(chǎn)品說(shuō)明：乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，NAD+成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原MTT生成紫色物質(zhì)，在570nm處有特征吸收峰。技術(shù)指標(biāo)：最低檢出限：0.0771μmol/mL線性范圍：0.078-5μmol/mL注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：///96操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）(mL)為的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）離心0.8mL0.15mL12000g離心后取上清待測(cè)。（104個(gè)（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL一（功率37于離心上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃12000g離心10min后取上清待測(cè)。血清（漿取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，4℃12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g離心10min后取上清待測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，波長(zhǎng)調(diào)至570nm，分光光度計(jì)用乙醇調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。3、加樣表：測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本（μL）1010--標(biāo)準(zhǔn)品（μL）--10-蒸餾水（μL）-10-10試劑一（μL）40404040試劑二（μL）10-1010試劑四（μL）20202020在EP管中充分混勻，于37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)20min。試劑五（μL）6666試劑三（μL）6060606037℃避光反應(yīng)20min后于25℃，10000rpm離心10min，去上清，留沉淀。乙醇（μL）200200200200570nmAΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管；ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。三、乳酸含量的計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x（ΔA標(biāo)準(zhǔn)為yΔA測(cè)定帶入公式中得到x（μmol/mL）。2、乳酸含量計(jì)算按照樣本蛋白濃度計(jì)算LA含量（μmol/mgprot）=x×V樣本÷（V樣本×Cpr）=x÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算LA含量（μmol/g質(zhì)量）=x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算LA含量（μmol/106cell）=x×（V上清+V提取液二）÷（5×V上清÷V提取液一）=0.2375×x按照液體體積計(jì)算LA含量（μmol/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷[V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]=13.0625×xV0.8mL；V0.15