土壤無機(jī)磷形態(tài)的分級(jí)測(cè)定土壤中磷分為無機(jī)磷和有機(jī)磷兩大類。無機(jī)磷中又可分磷酸鈣、磷酸鋁、磷酸鐵和閉蓄態(tài)磷酸鹽，即為氧化物包裹的磷酸鋁和磷酸鐵。這些磷酸鹽在不同的土壤中存在的比例不同。石灰性土壤中以磷酸鈣鹽為主，強(qiáng)酸性土壤中以磷酸鐵占優(yōu)勢(shì)。在系統(tǒng)分析中NH4F和NaOH處理必須在H2SO4處理之前，因?yàn)榱蛩岵粌H溶解磷酸鈣，也溶解大量的磷酸鋁和磷酸鐵。土壤無機(jī)磷的分級(jí)，過去雖有很多人研究，但比較系統(tǒng)和完整的方法，由張守敬和Jackson于1957年提出，并在60年代又作了許多改正，在酸性或中性土壤上已成為研究土壤無機(jī)形態(tài)組成和轉(zhuǎn)化的主要方法。但是對(duì)主要以磷酸鈣形態(tài)存在的石灰性土壤中無機(jī)磷的分級(jí)，由于該法不能區(qū)分各種磷酸鈣鹽，因此具有一定的缺點(diǎn)。70年代，對(duì)磷酸鈣的分級(jí)雖有所改進(jìn)，但仍不夠完善，所以到目前為止，張守敬和Jackson的方法仍然是國(guó)際上比較廣泛應(yīng)用的方法。80年代末蔣柏藩、顧益初（1989）研究了石灰性土壤無機(jī)磷分級(jí)體系；顧益初、蔣柏藩（1990）并提出了石灰性土壤無機(jī)磷分級(jí)的測(cè)定方法。它的特點(diǎn)是將石灰性土壤中的磷酸鈣鹽分成三種類型∶①磷酸二鈣型；②磷酸八鈣型；③磷灰石型。并用混合浸提劑浸提磷酸鐵鹽。磷酸鋁鹽和閉蓄態(tài)磷酸鹽的浸提方法與張守敬的土壤磷的分級(jí)體系同。新體系的三級(jí)磷酸鈣鹽之和相當(dāng)于張守敬的分級(jí)體系的NH4Cl和H2SO4溶性磷，非閉蓄態(tài)磷酸鐵鹽與閉蓄態(tài)磷酸鹽之和，在這兩個(gè)體系中也基本相當(dāng)。但在張守敬的體系中，磷酸鈣鹽絕大部分都進(jìn)入H2SO4浸提液一級(jí)，而非閉蓄態(tài)的磷酸鐵鹽大多被混入閉蓄態(tài)磷酸鹽之中。方法原理：土壤無機(jī)形態(tài)磷分級(jí)測(cè)定方法的基本原理，是利用不同化學(xué)浸提劑的特性，將土壤中各種形態(tài)的無機(jī)磷酸鹽加以逐級(jí)分離。土壤樣品首先用1mol·LINH4.Cl浸提，提出的部分為水溶性磷，斷鍵的和結(jié)合松弛的磷。除新施磷肥的土壤外，在一般自然土壤中，這部分磷量很少，通常不必測(cè)定這一級(jí)浸出液中的磷。第二級(jí)用0.5mol·LINH4F浸提，所浸提劑在pH8.2的條件下，F(xiàn)7與AP*形成配合物，與Fe**的配合能力很弱，這樣使Al-P（鋁結(jié)合的磷酸鹽）基本上可以與Fe-P（鐵結(jié)合的磷酸鹽）分離。第三級(jí)用0.Imol·LNaOH浸提，由于Fe-P與NaOH的水解反應(yīng)，使Fe-P中的磷酸根轉(zhuǎn)化而釋放。繼而用0.3mol·L~/檸檬酸鈉和連二亞硫酸鈉溶液浸提OP（閉蓄態(tài)磷酸鹽）。這部分磷是被氧化鐵膠膜所包蔽，利用連二亞硫酸鈉強(qiáng)烈的還原作用，使包蔽的氧化鐵還原成亞鐵，繼而被檸檬酸鈉配合，使氧化亞鐵包裹不斷剝離，而浸提出全部閉蓄態(tài)磷。以上Al-P、Fe-P和OP的浸提都是在堿性條件下進(jìn)行的，基性的Ca-P（鈣結(jié)合的磷酸鹽）幾乎不被溶解。此后，土壤再用0.5mol·L-1H2SO4.浸提，在這一強(qiáng)酸性溶液中，Ca-P（包括氟磷灰石）絕大部分被浸提出來。主要儀器：往復(fù)振蕩機(jī)、電動(dòng)離心機(jī)（100mL離心管，6000r·min~'）、電動(dòng)攪拌機(jī)、恒溫水??；pH計(jì)、分光光度計(jì)或比色計(jì)。試劑：操作步驟:（1）Al—P的測(cè)定。稱取通過100目的風(fēng)干土樣1.0000g，置于100mL離心管中，加入1.0mol·L·INH4Cl溶液50mL，在20~25℃下振蕩30min，離心（約3500r·min~l，8min），棄去上層清液（必要時(shí)也可以測(cè)定）。再在NH4Cl浸提過的土樣中加入0.5mol·L/NH4F（pH8.2）溶液50mL，在20～25℃下振蕩1h，取出離心（約3500r-min-1，8min），將上層清液傾入小塑料瓶中。吸取上述浸出液20mL于50mL容量瓶中，加入0.8mol·L-H3BO3溶液20mL，再加2，6-二硝基酚指示劑2滴，用稀HCl和稀NHOH溶液調(diào)節(jié)pH至待測(cè)液呈微黃，用鉬銻抗法測(cè)定，同時(shí)作空白試驗(yàn)。工作曲線的繪制由于加入H3BO3溶液可以完全消除浸出液中F7的干擾，因此在磷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中不必另加NH4F和H3BO3溶液。。（2）Fe—P的測(cè)定浸提過Al—P的土樣用飽和NaCl溶液洗兩次（每次25mL，離心后棄去），然后加入0.1mol·L-1NaOH溶液50mL，在20~25℃振蕩2h，靜置16h，再振蕩2h，離心（約4500r-min-1，10min）。傾出上層清液于三角瓶中，并在浸出液中加濃H2SO4（在結(jié)果計(jì)算時(shí)應(yīng)考慮加入H2SO4的體積）1.5mL，搖勻后放置過夜，過濾，以除去凝絮的有機(jī)質(zhì)。吸取適量濾液（注1），用鉬銻抗比色測(cè)定磷。（3）O—P的測(cè)定浸提液Fe—P的土樣用飽和NaCl溶液洗兩次（每次25mL，離心后棄去），然后加0.3mol·L一檸檬酸鈉溶液40mL，充分?jǐn)嚢杷橥翂K，再加連二亞硫酸鈉1.0g，放入80~90℃水浴中，待離心管內(nèi)溶液溫度和水浴溫度平衡后，用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌15min，再加入0.5mol·L-1NaOH溶液10mL（連續(xù)攪拌10min），冷卻后離心（約4500rmin1，10min），將上層清液傾入100mL容量瓶中。土樣用飽和NaCl溶液洗兩次（每次20mL），離心后上層清液一并倒入容量瓶中，用水定容。吸取上述浸出液10mL于50mL三角瓶中，加入三酸混合液10mL，瓶口放一小漏斗，在電爐上消煮，逐步升高溫度，待HNO3和HClO4全部分解，有H2SO4回流時(shí)即可取下。冷卻后成白色固體，加入50mL水，煮沸，使全部溶解后，用0.1mol·L-|（1/2H2SO4）溶液洗入100mL容量瓶中，定容。吸取30mL溶液于50mL容量瓶中，用鉬銻抗比色法測(cè)定磷，同時(shí)做空白試驗(yàn)。（4）Ca—P的測(cè)定浸提過O—P的土樣加入0.5mol·L//（1/2