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學習內容一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒螺旋體的生物學特性三、梅毒實驗室檢查方法四、梅毒血清學診斷試驗五、梅毒血清學試驗的結果解釋六、梅毒實驗室操作要求七、存在的問題學習內容一、一、梅毒的現(xiàn)狀及定義一、梅毒的現(xiàn)狀1、近年來我國嚴峻的梅毒流行形勢（梅毒實驗室檢測不規(guī)范現(xiàn)狀）。2、今年衛(wèi)生部出臺梅毒10年控制規(guī)劃（梅毒血清學檢測、新方法、新技術的應用性評估）3、目前我國僅對首次就診的孕產婦制訂了梅毒篩查方案，即：首先采用非梅毒螺旋體抗原血清學試驗或梅毒螺旋體抗原血清學試驗之一進行初篩，當篩查結果為陽性時，需用另一類試驗進行復檢。對一般人群尚無明確的篩查診斷流程。一、梅毒的現(xiàn)狀及定義一、梅毒的現(xiàn)狀一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒的定義梅毒是一種全球分布的系統(tǒng)性性傳播疾病。梅毒的病原體是蒼白螺旋體（Treponemiapallidum，TP）。人是梅毒的唯一傳染源，主要傳播途徑主要有性傳播、血液傳播和母嬰傳播3種，可侵犯人體全身器官，臨床表現(xiàn)分為一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒和潛伏梅毒，既能產生各種各樣的癥狀和體征，又可多年無癥狀而呈潛伏狀態(tài)，對人類健康危害極大。一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒的定義二、梅毒螺旋體的生物學特性1.長度為8μm～20μm，平均8μm～10μm，直徑<0.2μm,有6～12個螺旋。2.因其透明不易染色，故稱為蒼白螺旋體。3.梅毒螺旋是一種小而纖細的螺旋狀微生物。4.梅毒螺旋體的特征是螺旋體整齊而規(guī)則，折光性強，較其他螺旋體亮。5.運動緩慢而有規(guī)律，具有三種特征性運動方式：常見是圍繞其長軸旋轉前后移動；其次是全身彎曲如蛇行；少見的是伸縮其螺旋間距而前進二、梅毒螺旋體的生物學特性1.長度為8μm～20μm，平均8二、梅毒螺旋體的生物學特性6.梅毒螺旋體至今還不能在人工培養(yǎng)基上生長繁殖，目前只能將其接種到兔睪丸內增殖、傳代和保存。以橫斷分裂的方式進行增殖，世代時間為30小時～33小時。7.梅毒螺旋體在體外不易存活，煮沸、干燥，一般的消毒劑如汞劑、石炭酸、乙醇等很容易將其殺死。在41℃～42℃時經過1小時～2小時也可將其殺死。8.低溫（-70℃～-196℃）下可保存數年并保持其形態(tài)、活力及毒性。二、梅毒螺旋體的生物學特性6.梅毒螺旋體至今還不能在人工培養(yǎng)三、梅毒實驗室檢查方法梅毒的臨床實驗室檢測方法較多，概括起來分為梅毒的病原體檢查、梅毒的血清免疫學檢查和梅毒的核酸檢查3大類。三、梅毒實驗室檢查方法梅毒的臨床實驗室檢測方法較多，概括起來（一）病原體檢查方法即梅毒螺旋體檢查，采用暗視野顯微鏡檢查或直接免疫熒光試驗(directfluorescentantibodytest，DFA)，在顯微鏡下觀察梅毒螺旋體的特征性形態(tài)和運動方式。該方法是診斷早期現(xiàn)癥最直接的方法，但由于受到患者用藥、檢測儀器狀態(tài)和檢測人員技能等條件的制約，本方法實際檢出率并不高。未檢測到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。本方法費時費力，也不適用于梅毒的大規(guī)模篩查。（一）病原體檢查方法即梅毒螺旋體檢查，采用暗視野顯微鏡檢查或（二）血清免疫學檢查方法1

1、非梅毒螺旋體抗原試驗

檢測患者血清中宿主針對機體組織破壞后暴露的脂抗原或者螺旋體表面的脂質產生的非特異性抗類脂抗原的抗體(反應素)。檢測方法包括：快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗RPR)；甲苯胺紅不加熱血清(TRUST)；性病研究實驗室試驗(VDRL)；不加熱血清反應素試驗(USR)。目前最常用的是RPR和TRUST。由于在治療過程中反應素滴度可呈動態(tài)變化，非梅毒螺旋體抗原血清學試驗常用于臨床療效觀察、復發(fā)或再感染的檢查。同時，由于該方法操作簡便、快速，成本低，特別適合基層應用和人群調查。此類方法的缺點是反映不出既往感染，并且受其他疾病影響較大，易產生假陽性結果（二）血清免疫學檢查方法1（二）血清免疫學檢查2

2、梅毒螺旋體抗原血清學試驗

目的檢測梅毒螺旋體IgG、IgM抗體。檢測方法包括：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）梅毒螺旋體顆血球凝集試驗（TPHA）梅毒酶聯(lián)免疫吸咐試驗（TP-ELISA）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒快速檢測（TP-RT）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）。梅毒螺旋體抗原血清學試驗的共同優(yōu)點是特異性強，可以作為非梅毒螺旋體抗原試驗初篩陽性標本的復檢或確證試驗

，但是，由于感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者長時間甚至終生陽性。所以這些方法不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染。亦不能作為療效觀察的指標。（二）血清免疫學檢查22、梅毒螺旋體抗原血清學試驗（三）梅毒螺旋體核酸檢查

可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊髓液等標本的梅毒螺旋體核酸采用PCR進行檢測。核酸檢查的優(yōu)點是特異性高，在早期梅毒、神經梅毒、先天梅毒和伴艾滋病梅毒等診斷中，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染的鑒別診斷中具有一定的價值，也可應用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學分型。該方法缺點是成本高，對實驗條件要求高并且易受多種因素影響，不宜做療效觀察。（三）梅毒螺旋體核酸檢查

可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋四、梅毒血清學診斷試驗目前，梅毒的實驗室血清學診斷技術是檢測梅毒螺旋體抗體主要方法有兩類：1.非梅毒螺旋體血清試驗

2.梅毒螺旋體血清試驗四、梅毒血清學診斷試驗目前，梅毒的實驗室血清學診斷技術是檢測（一）非梅毒螺旋體血清試驗1非梅毒螺旋體抗原試驗

：用心磷脂、卵磷脂、及膽固醇做抗原，檢測宿主對梅毒螺旋體表面的類脂物質所產生的IgG和IgM抗體（抗心磷脂抗體，反應素﹚包括VDRL、USR、RPR、TRUST試驗等性病研究實驗室玻片試驗（VDRL）：屬于沉淀反應，目前應用最廣泛。用心擬脂、卵磷脂、膽固醇為抗原，可作定性和定量試驗，操作簡單，費用低，常用作大量病人的篩選及療效觀察。但在一期梅毒時敏感性不夠高，以及弱陽性時判讀結果困難為其缺點。（一）非梅毒螺旋體血清試驗1非梅毒螺旋體抗原試驗：用心磷脂（一）非梅毒螺旋體血清試驗1血清不需加熱的反應素試驗（URS）：此法在國內已逐步推廣使用，也是一種非螺旋體抗原原血清沉淀試驗。其原理是在VDRL所用抗原中加入了EDTA（乙二胺四醋酸）和氯化膽堿，使操作更為簡單，更便于讀結果，其敏感性與特異性和VDRL相同?？焖傺獫{反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR):此試驗是VDRL試驗的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物，加入了氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代了玻片。試驗結果易于判斷，肉眼即可觀察。也可用血漿進行檢測，試驗結果可保存?？乖?℃冰箱可保存1年。（一）非梅毒螺旋體血清試驗1（一）非梅毒螺旋體血清試驗2臨床應用價值：簡便、快速、敏感性和特異性較好可用于大規(guī)模的人群和產前篩查指示目前疾病的活動程度可作定量試驗，用于療效觀察，早期梅毒經有效治療后，抗體滴度會下降，並轉為陰性，如抗體滴度不下降或下降緩慢或下降后又上升，說明治療失敗、復發(fā)或再感染。晚期梅毒可自然轉陰。（一）非梅毒螺旋體血清試驗2臨床應用價值：

材

料(以RPR為例)RPR試劑盒：含RPR抗原；直徑為18mm圓圈的特制白色反應卡片；標準針頭（60±1滴/mL）；RPR試驗結果圖片。

其他：水平旋轉器。材料(以RPR為例)定性試驗a.吸取0.05mL血清或血漿加于卡片圈內，并均勻地涂布在整個圈內（每張紙卡有10個或12個反應圈）；

b.將抗原輕輕搖勻，用標準針頭吸取抗原，每個標本加1滴抗原；

c.將卡片置水平旋轉器旋轉8min；

d.立即在明亮光線下觀察結果。

結果

中到大的黑色絮狀物，液體清亮3+~4+強陽性

小到中的黑色絮狀物，液體較清亮2+陽性

小的黑色絮狀物，液體混濁1+弱陽性

僅見活性炭顆粒集于中央一點或均勻分散－陰性定性試驗a.吸取定量試驗RPR定量試驗與TRUST試驗相同。a.在圈內加入0.05mL等滲鹽水（一般作6～8個稀釋度）勿將鹽水涂開；b.吸取0.05mL血清或血漿作系列稀釋（1:2～1:64），當稀釋到最后的第6孔時，棄去0.05mL稀釋液。從第6孔起將血清稀釋液涂布整個圈內，再涂布第5孔，依此向前到第1孔。

c.滴加抗原，旋轉時間、速度和觀察結果同定性試驗。定量試驗RPR定RPR試驗結果RPR試驗結果（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體血清試驗方法有:1.TPHA(梅毒螺旋體血凝試驗)2.TPPA（明膠顆粒凝集試驗）3.FTA－ABS（熒光抗體吸收試驗）4.TP-ELISA（免疫吸附試驗）5.TP-WB－TP和TPLA（蛋白印跡試驗）

方法簡便，結果易讀，適用于大量標本的檢測。

FTA－ABS試驗是“金標準”試驗，具有敏感性高，特異性強等特點。不能作為觀察療效優(yōu)點：特異性高，對非特異性試驗進行證實

缺點：不能區(qū)分是新發(fā)感染或治療后，通常終身持續(xù)陽性

（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體血清試驗方法有:梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）

原理:TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結果。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）

原理:TPPA試驗用材料（以TPPA為例）a.TPPA試劑盒：含蒸餾水（標記A），用于溶解致敏顆粒、未致敏顆粒和質控血清；標本稀釋液（標記B），用于稀釋血清標本；致敏顆粒（標記C），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；未致敏顆粒（標記D），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；質控血清（標記E），冷凍干燥品，用時按規(guī)定量加入A液。b.其他：U型微量反應板；微量加樣器(25μL)；微量滴管(C和D管)；移液管(微量移液管和刻度滴管)；微量板振蕩器。材料（以TPPA為例）a.T梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）試驗前試劑應恢復到15℃~30℃。a.B液加至微量反應板孔內，第1孔100μL，第2孔25μL，第3、4孔各25μL；

b.取血清25μL加至第1孔，混勻后取25μL至第2孔，混勻后取25μL至第3孔，混勻后取25μL至第4孔，混勻后棄去25μL。

c.第3孔加D液（未致敏顆粒）25μL，第4孔加C液（致敏顆粒）25μL；

d.將反應板置振蕩器振蕩30s；

e.置有蓋濕盒，15～25℃避光孵育2h后，觀察結果。梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）試驗前試劑應恢復到15℃~

定量試驗a.加B液至微量反應板孔，第1孔～第4孔與定性試驗相同，第5孔～第10孔各加25μL；

b.取血清25μL加至第1孔，如定性試驗稀釋方法，從第2孔～第10孔混勻，混勻后第10孔棄去25μL；

c.第3孔加D液25μL，第4孔～第10孔各加C液25μL；

d.以后步驟同定性試驗。結果以最高血清稀釋度能產生陽性反應的稀釋度為抗體滴度結果顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊陽性4+

顆粒光滑覆蓋大部分孔底陽性3+

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)陽性2+

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)陽性1+

顆粒沉集孔底，中央形成一小點可疑±

顆粒緊密沉積孔底中央陰性-

定量試驗a.報告方法

a.陽性報告：定性試驗，血清在1:80以上稀釋度與致敏顆粒發(fā)生凝集反應（1+或更強），與未致敏顆粒（第3孔）不發(fā)生凝集反應。定量試驗則應報告發(fā)生陽性反應的血清最高稀釋度，為血清滴度。

b.陰性報告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發(fā)生凝集反應。報告方法a.陽性

注意事項

a.微量反應板要清潔干凈，孔內無異物。

b.加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應板，而不可使用水平旋轉儀。

c.試劑盒不可置于0℃以下，防止凍結。不同批號試劑不可混合使用。

d.如未致敏顆粒出現(xiàn)凝集反應，應將血清進行吸收處理后再進行試驗，或用其他試驗方法。

注意事項a.梅毒血清反應的假陽性反應（1）梅毒血清反應假陽性的分類①技術性假陽性反應由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成。②生物學假陽性反應是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性（2）急性生物學假陽性反應很多非梅毒螺旋體感染性疾病，如風疹、水痘、傳染性單核細胞增多癥、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、亞急性細菌性心內膜炎、活動性肺結核、絲蟲病和溝端螺旋體病等。（3）慢性生物學假陽性反應可持續(xù)6個月以上或數年，甚至終生。梅毒血清反應的假陽性反應（1）梅毒血清反應假陽性五、梅毒血清學試驗的結果解釋五、梅毒血清學試驗的結果解釋六、梅毒實驗室操作要求

1．實驗室要求清潔明亮，溫度保存在23～29℃。2．儀器設備制定詳細的操作說明書，定期維護。3．玻璃器皿或耗材要清潔干凈。4．試驗操作要適合工作需要，操作人員要持證上崗。5．操作規(guī)程要確實可行，不得隨意改變。6.認真精確操作標本和試劑，包括各種移液器和所操作的用具量的準確。六、梅毒實驗室操作要求1．實驗室要求清潔明亮，溫度7．定期檢查說明書，操作保持與說明書的一致。8．每次試驗設立陽性和陰性質控，包括反應性，介質和每次試驗操作記錄是否一致性；9．標本不應溶血、乳糜狀，應標記血漿或血清，腦脊液是否有紅細胞；10．常規(guī)實驗室應具有一定的空間，所有試驗的記錄，試驗鑒定，溫度記錄和原始數據應保留；11．認真監(jiān)督報告方式和記錄筆誤。

7．定期檢查說明書，操作保持與說明書的一致。12.梅毒血清學試驗操作和結果分析⑴標本的采集和分離①編號或姓名登記②采血、分離血清和貯存⑵試劑準備①溫度、器具的校正②試劑、血清和反應板恢復到試驗溫度③試劑鑒定⑶試驗操作①血清量的控制②試劑量的控制③旋轉儀速度和時間的控制梅毒實驗室檢測技術與評價課件

⑷實驗報告①核對編號或姓名②試驗結果分析

③重復試驗(結果與臨床表現(xiàn)不符)④進一步與臨床核對（病理討論）⑤登記結果⑥發(fā)送報告

七、存在的問題值得注意的是，臨床實驗室采用梅毒血清學方法檢測標本時，由于方法學本身的局限性、患者的特殊情況、實驗條件和試劑或儀器的狀況等因素的影響，在結果判讀時，可能會出現(xiàn)假陰性或假陽性的情況。1．前帶現(xiàn)象：是指臨床上符合梅毒體征，但未經稀釋血清的TRUST或RPR實驗呈陰性或弱陽性，若將血清稀釋后重復實驗，便可出現(xiàn)陽性結果。原因是血清中抗心磷脂抗體過多，抑制了沉淀反應的出現(xiàn)。為避免此類情況，不能只做原倍血清的檢測，可以同時作倍比稀釋血清的滴度檢測。2．病程的影響：初期或晚期梅毒患者血清TRUST或RPR可呈假陰性。原因是感染初期，非特異性心磷脂抗體遲于特異性抗體出現(xiàn)在血清中，而晚期梅毒非特異性抗體可消失。因此，RPR實驗不適合一期、三期和治療后梅毒的診斷七、存在的問題值得注意的是，臨床實驗室采用梅毒血清學方3．溫度的變化：RPR是絮狀沉淀反應，溫度可以改變絮狀物形成的速度，可能導致RPR假陰性。4、操作不當，可能導致實驗假陽性。5．特殊人群導致非梅毒螺旋體抗原試驗假陽性：多見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、風濕熱和系統(tǒng)性硬化等自身免疫性疾病患者，也可見于水痘、麻風和病毒性肝炎等病毒感染性疾病。此外，一些老人和炎癥患者亦會出現(xiàn)假陽性的結果，可能和他們特殊的生理免疫狀態(tài)有關。6．新生兒攜帶被動抗體導致RPR／TPPA檢測陽性：由于母體血梅毒螺旋體抗體IgG可經胎盤傳給胎兒，使患兒血清呈被動陽性。因此，新生兒RPR或TPPA陽性時應慎重診斷先天性梅毒。因此，無論用何種方法檢測梅毒，其結果必須與臨床實際情況相結合，綜合分析各種情況，科學做出診斷，及時予以治療。3．溫度的變化：RPR是絮狀沉淀反應，溫度可以改變絮狀物形成此ppt下載后可自行編輯謝謝大家此ppt下載后可自行編輯謝謝大家梅毒實驗室檢測技術與評價課件此ppt下載后可自行編輯梅毒實驗室檢測技術與評價此ppt下載后可自行編輯梅毒實驗室檢測技術與評價梅毒實驗室檢測技術與評價課件

學習內容一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒螺旋體的生物學特性三、梅毒實驗室檢查方法四、梅毒血清學診斷試驗五、梅毒血清學試驗的結果解釋六、梅毒實驗室操作要求七、存在的問題學習內容一、一、梅毒的現(xiàn)狀及定義一、梅毒的現(xiàn)狀1、近年來我國嚴峻的梅毒流行形勢（梅毒實驗室檢測不規(guī)范現(xiàn)狀）。2、今年衛(wèi)生部出臺梅毒10年控制規(guī)劃（梅毒血清學檢測、新方法、新技術的應用性評估）3、目前我國僅對首次就診的孕產婦制訂了梅毒篩查方案，即：首先采用非梅毒螺旋體抗原血清學試驗或梅毒螺旋體抗原血清學試驗之一進行初篩，當篩查結果為陽性時，需用另一類試驗進行復檢。對一般人群尚無明確的篩查診斷流程。一、梅毒的現(xiàn)狀及定義一、梅毒的現(xiàn)狀一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒的定義梅毒是一種全球分布的系統(tǒng)性性傳播疾病。梅毒的病原體是蒼白螺旋體（Treponemiapallidum，TP）。人是梅毒的唯一傳染源，主要傳播途徑主要有性傳播、血液傳播和母嬰傳播3種，可侵犯人體全身器官，臨床表現(xiàn)分為一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒和潛伏梅毒，既能產生各種各樣的癥狀和體征，又可多年無癥狀而呈潛伏狀態(tài)，對人類健康危害極大。一、梅毒的現(xiàn)狀及定義二、梅毒的定義二、梅毒螺旋體的生物學特性1.長度為8μm～20μm，平均8μm～10μm，直徑<0.2μm,有6～12個螺旋。2.因其透明不易染色，故稱為蒼白螺旋體。3.梅毒螺旋是一種小而纖細的螺旋狀微生物。4.梅毒螺旋體的特征是螺旋體整齊而規(guī)則，折光性強，較其他螺旋體亮。5.運動緩慢而有規(guī)律，具有三種特征性運動方式：常見是圍繞其長軸旋轉前后移動；其次是全身彎曲如蛇行；少見的是伸縮其螺旋間距而前進二、梅毒螺旋體的生物學特性1.長度為8μm～20μm，平均8二、梅毒螺旋體的生物學特性6.梅毒螺旋體至今還不能在人工培養(yǎng)基上生長繁殖，目前只能將其接種到兔睪丸內增殖、傳代和保存。以橫斷分裂的方式進行增殖，世代時間為30小時～33小時。7.梅毒螺旋體在體外不易存活，煮沸、干燥，一般的消毒劑如汞劑、石炭酸、乙醇等很容易將其殺死。在41℃～42℃時經過1小時～2小時也可將其殺死。8.低溫（-70℃～-196℃）下可保存數年并保持其形態(tài)、活力及毒性。二、梅毒螺旋體的生物學特性6.梅毒螺旋體至今還不能在人工培養(yǎng)三、梅毒實驗室檢查方法梅毒的臨床實驗室檢測方法較多，概括起來分為梅毒的病原體檢查、梅毒的血清免疫學檢查和梅毒的核酸檢查3大類。三、梅毒實驗室檢查方法梅毒的臨床實驗室檢測方法較多，概括起來（一）病原體檢查方法即梅毒螺旋體檢查，采用暗視野顯微鏡檢查或直接免疫熒光試驗(directfluorescentantibodytest，DFA)，在顯微鏡下觀察梅毒螺旋體的特征性形態(tài)和運動方式。該方法是診斷早期現(xiàn)癥最直接的方法，但由于受到患者用藥、檢測儀器狀態(tài)和檢測人員技能等條件的制約，本方法實際檢出率并不高。未檢測到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。本方法費時費力，也不適用于梅毒的大規(guī)模篩查。（一）病原體檢查方法即梅毒螺旋體檢查，采用暗視野顯微鏡檢查或（二）血清免疫學檢查方法1

1、非梅毒螺旋體抗原試驗

檢測患者血清中宿主針對機體組織破壞后暴露的脂抗原或者螺旋體表面的脂質產生的非特異性抗類脂抗原的抗體(反應素)。檢測方法包括：快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗RPR)；甲苯胺紅不加熱血清(TRUST)；性病研究實驗室試驗(VDRL)；不加熱血清反應素試驗(USR)。目前最常用的是RPR和TRUST。由于在治療過程中反應素滴度可呈動態(tài)變化，非梅毒螺旋體抗原血清學試驗常用于臨床療效觀察、復發(fā)或再感染的檢查。同時，由于該方法操作簡便、快速，成本低，特別適合基層應用和人群調查。此類方法的缺點是反映不出既往感染，并且受其他疾病影響較大，易產生假陽性結果（二）血清免疫學檢查方法1（二）血清免疫學檢查2

2、梅毒螺旋體抗原血清學試驗

目的檢測梅毒螺旋體IgG、IgM抗體。檢測方法包括：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）梅毒螺旋體顆血球凝集試驗（TPHA）梅毒酶聯(lián)免疫吸咐試驗（TP-ELISA）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒快速檢測（TP-RT）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）。梅毒螺旋體抗原血清學試驗的共同優(yōu)點是特異性強，可以作為非梅毒螺旋體抗原試驗初篩陽性標本的復檢或確證試驗

，但是，由于感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者長時間甚至終生陽性。所以這些方法不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染。亦不能作為療效觀察的指標。（二）血清免疫學檢查22、梅毒螺旋體抗原血清學試驗（三）梅毒螺旋體核酸檢查

可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊髓液等標本的梅毒螺旋體核酸采用PCR進行檢測。核酸檢查的優(yōu)點是特異性高，在早期梅毒、神經梅毒、先天梅毒和伴艾滋病梅毒等診斷中，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染的鑒別診斷中具有一定的價值，也可應用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學分型。該方法缺點是成本高，對實驗條件要求高并且易受多種因素影響，不宜做療效觀察。（三）梅毒螺旋體核酸檢查

可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋四、梅毒血清學診斷試驗目前，梅毒的實驗室血清學診斷技術是檢測梅毒螺旋體抗體主要方法有兩類：1.非梅毒螺旋體血清試驗

2.梅毒螺旋體血清試驗四、梅毒血清學診斷試驗目前，梅毒的實驗室血清學診斷技術是檢測（一）非梅毒螺旋體血清試驗1非梅毒螺旋體抗原試驗

：用心磷脂、卵磷脂、及膽固醇做抗原，檢測宿主對梅毒螺旋體表面的類脂物質所產生的IgG和IgM抗體（抗心磷脂抗體，反應素﹚包括VDRL、USR、RPR、TRUST試驗等性病研究實驗室玻片試驗（VDRL）：屬于沉淀反應，目前應用最廣泛。用心擬脂、卵磷脂、膽固醇為抗原，可作定性和定量試驗，操作簡單，費用低，常用作大量病人的篩選及療效觀察。但在一期梅毒時敏感性不夠高，以及弱陽性時判讀結果困難為其缺點。（一）非梅毒螺旋體血清試驗1非梅毒螺旋體抗原試驗：用心磷脂（一）非梅毒螺旋體血清試驗1血清不需加熱的反應素試驗（URS）：此法在國內已逐步推廣使用，也是一種非螺旋體抗原原血清沉淀試驗。其原理是在VDRL所用抗原中加入了EDTA（乙二胺四醋酸）和氯化膽堿，使操作更為簡單，更便于讀結果，其敏感性與特異性和VDRL相同?？焖傺獫{反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR):此試驗是VDRL試驗的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物，加入了氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代了玻片。試驗結果易于判斷，肉眼即可觀察。也可用血漿進行檢測，試驗結果可保存?？乖?℃冰箱可保存1年。（一）非梅毒螺旋體血清試驗1（一）非梅毒螺旋體血清試驗2臨床應用價值：簡便、快速、敏感性和特異性較好可用于大規(guī)模的人群和產前篩查指示目前疾病的活動程度可作定量試驗，用于療效觀察，早期梅毒經有效治療后，抗體滴度會下降，並轉為陰性，如抗體滴度不下降或下降緩慢或下降后又上升，說明治療失敗、復發(fā)或再感染。晚期梅毒可自然轉陰。（一）非梅毒螺旋體血清試驗2臨床應用價值：

材

料(以RPR為例)RPR試劑盒：含RPR抗原；直徑為18mm圓圈的特制白色反應卡片；標準針頭（60±1滴/mL）；RPR試驗結果圖片。

其他：水平旋轉器。材料(以RPR為例)定性試驗a.吸取0.05mL血清或血漿加于卡片圈內，并均勻地涂布在整個圈內（每張紙卡有10個或12個反應圈）；

b.將抗原輕輕搖勻，用標準針頭吸取抗原，每個標本加1滴抗原；

c.將卡片置水平旋轉器旋轉8min；

d.立即在明亮光線下觀察結果。

結果

中到大的黑色絮狀物，液體清亮3+~4+強陽性

小到中的黑色絮狀物，液體較清亮2+陽性

小的黑色絮狀物，液體混濁1+弱陽性

僅見活性炭顆粒集于中央一點或均勻分散－陰性定性試驗a.吸取定量試驗RPR定量試驗與TRUST試驗相同。a.在圈內加入0.05mL等滲鹽水（一般作6～8個稀釋度）勿將鹽水涂開；b.吸取0.05mL血清或血漿作系列稀釋（1:2～1:64），當稀釋到最后的第6孔時，棄去0.05mL稀釋液。從第6孔起將血清稀釋液涂布整個圈內，再涂布第5孔，依此向前到第1孔。

c.滴加抗原，旋轉時間、速度和觀察結果同定性試驗。定量試驗RPR定RPR試驗結果RPR試驗結果（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體血清試驗方法有:1.TPHA(梅毒螺旋體血凝試驗)2.TPPA（明膠顆粒凝集試驗）3.FTA－ABS（熒光抗體吸收試驗）4.TP-ELISA（免疫吸附試驗）5.TP-WB－TP和TPLA（蛋白印跡試驗）

方法簡便，結果易讀，適用于大量標本的檢測。

FTA－ABS試驗是“金標準”試驗，具有敏感性高，特異性強等特點。不能作為觀察療效優(yōu)點：特異性高，對非特異性試驗進行證實

缺點：不能區(qū)分是新發(fā)感染或治療后，通常終身持續(xù)陽性

（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體血清試驗方法有:梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）

原理:TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結果。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）

原理:TPPA試驗用材料（以TPPA為例）a.TPPA試劑盒：含蒸餾水（標記A），用于溶解致敏顆粒、未致敏顆粒和質控血清；標本稀釋液（標記B），用于稀釋血清標本；致敏顆粒（標記C），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；未致敏顆粒（標記D），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；質控血清（標記E），冷凍干燥品，用時按規(guī)定量加入A液。b.其他：U型微量反應板；微量加樣器(25μL)；微量滴管(C和D管)；移液管(微量移液管和刻度滴管)；微量板振蕩器。材料（以TPPA為例）a.T梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）試驗前試劑應恢復到15℃~30℃。a.B液加至微量反應板孔內，第1孔100μL，第2孔25μL，第3、4孔各25μL；

b.取血清25μL加至第1孔，混勻后取25μL至第2孔，混勻后取25μL至第3孔，混勻后取25μL至第4孔，混勻后棄去25μL。

c.第3孔加D液（未致敏顆粒）25μL，第4孔加C液（致敏顆粒）25μL；

d.將反應板置振蕩器振蕩30s；

e.置有蓋濕盒，15～25℃避光孵育2h后，觀察結果。梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）試驗前試劑應恢復到15℃~

定量試驗a.加B液至微量反應板孔，第1孔～第4孔與定性試驗相同，第5孔～第10孔各加25μL；

b.取血清25μL加至第1孔，如定性試驗稀釋方法，從第2孔～第10孔混勻，混勻后第10孔棄去25μL；

c.第3孔加D液25μL，第4孔～第10孔各加C液25μL；

d.以后步驟同定性試驗。結果以最高血清稀釋度能產生陽性反應的稀釋度為抗體滴度結果顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊陽性4+

顆粒光滑覆蓋大部分孔底陽性3+

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)陽性2+

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)陽性1+

顆粒沉集孔底，中央形成一小點可疑±

顆粒緊密沉積孔底中央陰性-

定量試驗a.報告方法

a.陽性報告：定性試驗，血清在1:80以上稀釋度與致敏顆粒發(fā)生凝集反應（1+或更強），與未致敏顆粒（第3孔）不發(fā)生凝集反應。定量試驗則應報告發(fā)生陽性反應的血清最高稀釋度，為血清滴度。

b.陰性報告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發(fā)生凝集反應。報告方法a.陽性

注意事項

a.微量反應板要清潔干凈，孔內無異物。

b.加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應板，而不可使用水平旋轉儀。

c.試劑盒不可置于0℃以下，防止凍結。不同批號試劑不可混合使用。

d.如未致敏顆粒出現(xiàn)凝集反應，應將血清進行吸收處理后再進行試驗，或用其他試驗方法。

注意事項a.梅毒血清反應的假陽性反應（1）梅毒血清反應假陽性的分類①技術性假陽性反應由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成。②生物學假陽性反應是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性（2）急性生物學假陽性反應很多非梅毒螺旋體感染性疾病，如風疹、水痘、傳染性單核細胞增多癥、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、亞急性細菌性心內膜炎、活動性肺結核、絲蟲病和溝端螺旋體病等。（3）慢性生物學假陽性反應可持續(xù)6個月以上或數年，甚至終生。梅毒血清反應的假陽性反應（1）梅毒血清反應假陽性五、梅毒血清學試驗的結果解釋