6、紀(jì)律是自由的第一條件?！诟駹?、紀(jì)律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現(xiàn)在必須完全保持黨的紀(jì)律，否則一切都會陷入污泥中。——馬克思9、學(xué)校沒有紀(jì)律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應(yīng)該：活潑而守紀(jì)律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強(qiáng)而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)6、紀(jì)律是自由的第一條件。——黑格爾7、紀(jì)律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念。——馬卡連柯8、我們現(xiàn)在必須完全保持黨的紀(jì)律，否則一切都會陷入污泥中?！R克思9、學(xué)校沒有紀(jì)律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應(yīng)該：活潑而守紀(jì)律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強(qiáng)而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目。——馬克思染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)

Chromosomepaintingtechniques染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)即將整條染色體、某條染色體臂（長臂或短臂）或者染色體某個片斷的DNA制備成探針，然后用熒光原位雜交的方法，將探針雜交到中期分裂相染色體上，在熒光顯微鏡下觀察熒光素在染色體上標(biāo)記的顏色，從而分析和研究染色體的重組、畸變以及同源基因等的一種新技術(shù)。6、紀(jì)律是自由的第一條件?！诟駹柸旧w涂染技術(shù)染色體涂染1染色體涂染技術(shù)課件染色體涂染技術(shù)課件3染色體涂染技術(shù)課件4染色體涂染技術(shù)課件51.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（flowcytometry）

該法是用一種或多種熒光染料將懸浮液中的中期分裂相染色體染色。由于染色體大小、形態(tài)、組成和結(jié)構(gòu)的不同，所染色的特征有其特異性，從而可以通過流式細(xì)胞術(shù)將特定的染色體收集起來。1.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（fl61.染色體DNA探針的制備

①流式細(xì)胞分類法（flowcytometry）局限性：如果受試物的染色體形態(tài)單一、數(shù)目較多，如牛(2n=60)和狗(2n=78)的所有常染色體及綿羊(2n=54)和馬(2n=64)的大部分常染色體都是端位著絲點(diǎn)，因此，僅根據(jù)染色體的形態(tài)和大小很難將所有的染色體準(zhǔn)確地區(qū)分開來。1.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（flo71.染色體DNA探針的制備

②克隆基因庫或體細(xì)胞雜交株通過特定的克隆基因文庫或者特異性的體細(xì)胞雜交細(xì)胞系制備某條染色體整個或部分DNA探針。該法特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確性高，并且可以與功能遺傳學(xué)的研究結(jié)合起來，但對實(shí)驗(yàn)室要求較高，取材來源和研究范圍有所限制。1.染色體DNA探針的制備②克隆基因庫或體細(xì)胞雜交8

1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增

顯微切割(microdissection)技術(shù)是在顯微狀態(tài)或顯微鏡直視下直接或通過顯微操作系統(tǒng)對欲選取的材料進(jìn)行切割分離并收集用于后續(xù)研究的技術(shù)。

染色體顯微切割分手工切割和激光切割法，倒置顯微鏡上裝配切割臂，安上硅化玻璃針，找到分散良好的分裂相來切割所需染色體片段。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC91.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增

早在上世紀(jì)70年代，染色體顯微切割已應(yīng)用于多線染色體的研究，是細(xì)胞生物學(xué)常用的實(shí)驗(yàn)方法之一。當(dāng)時由于無法直接擴(kuò)增染色體DNA，所以必須在顯微鏡下反復(fù)切割若干拷貝的染色體，才能滿足實(shí)驗(yàn)的要求這不僅費(fèi)力耗時，而且要求實(shí)驗(yàn)操作人員必須具備熟練的染色體分帶和鑒定經(jīng)驗(yàn)，才保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。直到l989年Ludecke等將PCR擴(kuò)增與染色體顯微切割結(jié)合起來，從而改進(jìn)了這種實(shí)驗(yàn)方法。對于同一條染色體，只要切割和收集5～10個拷貝，通過PCR擴(kuò)增，即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。從而極大地提高了實(shí)驗(yàn)技術(shù)的可行性和準(zhǔn)確性。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC101.染色體DNA探針的制備

③通過染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增制備特異性的染色體DNA探針。相對而言，該方法具有直接、準(zhǔn)確、簡便和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。1.染色體DNA探針的制備③通過染色體顯微切割和PC11

2.熒光原位雜交

fluorescentinsituhybridazation,FISH

什么是原位雜交？原位雜交是基于DNA分子復(fù)制原理而發(fā)展起來的一種技術(shù)。用帶有標(biāo)記（放射性同位素、熒光染料等）的DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交，然后用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在及定位。2.熒光原位雜交

fluorescent122.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20世紀(jì)80年代末在放射性原為雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導(dǎo)分子結(jié)合，雜交后再通過免疫細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料。2.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20132.熒光原位雜交

基本原理：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素、地高辛，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。2.熒光原位雜交基本原理：142.熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)流程：

FISH樣本的制備→探針的制備→探針標(biāo)記→雜交→（染色體顯帶）→熒光顯微鏡檢測→結(jié)果分析。

2.熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)流程：152.熒光原位雜交

優(yōu)點(diǎn):

熒光試劑和探針經(jīng)濟(jì)、安全；

探針穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可在兩年內(nèi)使用；實(shí)驗(yàn)周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準(zhǔn)確；可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針當(dāng)；

多色FISH在同一個核中顯示不同顏色可同時檢測多種序列；

既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。

缺點(diǎn)：

不能達(dá)到100%雜交，特別是在應(yīng)用較短的cDNA探針時效率明下降。

2.熒光原位雜交優(yōu)點(diǎn):16

染色體涂染技術(shù)的應(yīng)用

染色體涂染技術(shù)主要應(yīng)用于動物分子細(xì)胞遺傳學(xué)、人類疾病、性染色體以及染色體進(jìn)化等研究。1995年以來，劍橋大學(xué)應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行哺乳動物的染色體比對，他們運(yùn)用了YAC等細(xì)胞的多種染色體作探針，以研究重組染色體的斷裂點(diǎn)。澳大利亞Latrobe大學(xué)以染色體涂染技術(shù)探討人的XY染色體的親緣關(guān)系。美國Ambady等人用顯微切割術(shù)和PCR擴(kuò)增建立了豬第6號染色體DNA文庫，尋找微星體，用于豬基因圖的研究。國外實(shí)驗(yàn)室主要研究不同種屬的動物(包括人)或植物染色體(尤其是性染色體)的比較與進(jìn)化，研究過的動物有雞、狗、狐、猴、貓、猿、鼠、兔、牛、羊、山羊以及其它鳥類、有袋類和哺乳類等。染色體涂染技術(shù)的應(yīng)用染色體涂染技術(shù)主要應(yīng)用于動17謝謝謝謝31、只有永遠(yuǎn)躺在泥坑里的人，才不會再掉進(jìn)坑里?！诟駹?/p>

32、希望的燈一旦熄滅，生活剎那間變成了一片黑暗?！樟心凡?/p>

33、希望是人生的乳母?！撇卟?/p>

34、形成天才的決定因素應(yīng)該是勤奮?！?/p>

35、學(xué)到很多東西的訣竅，就是一下子不要學(xué)很多?！蹇?1、只有永遠(yuǎn)躺在泥坑里的人，才不會再掉進(jìn)坑里196、紀(jì)律是自由的第一條件?！诟駹?、紀(jì)律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現(xiàn)在必須完全保持黨的紀(jì)律，否則一切都會陷入污泥中。——馬克思9、學(xué)校沒有紀(jì)律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應(yīng)該：活潑而守紀(jì)律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強(qiáng)而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)6、紀(jì)律是自由的第一條件?！诟駹?、紀(jì)律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現(xiàn)在必須完全保持黨的紀(jì)律，否則一切都會陷入污泥中?！R克思9、學(xué)校沒有紀(jì)律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應(yīng)該：活潑而守紀(jì)律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強(qiáng)而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)

Chromosomepaintingtechniques染色體涂染技術(shù)染色體涂染技術(shù)即將整條染色體、某條染色體臂（長臂或短臂）或者染色體某個片斷的DNA制備成探針，然后用熒光原位雜交的方法，將探針雜交到中期分裂相染色體上，在熒光顯微鏡下觀察熒光素在染色體上標(biāo)記的顏色，從而分析和研究染色體的重組、畸變以及同源基因等的一種新技術(shù)。6、紀(jì)律是自由的第一條件。——黑格爾染色體涂染技術(shù)染色體涂染20染色體涂染技術(shù)課件染色體涂染技術(shù)課件22染色體涂染技術(shù)課件23染色體涂染技術(shù)課件241.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（flowcytometry）

該法是用一種或多種熒光染料將懸浮液中的中期分裂相染色體染色。由于染色體大小、形態(tài)、組成和結(jié)構(gòu)的不同，所染色的特征有其特異性，從而可以通過流式細(xì)胞術(shù)將特定的染色體收集起來。1.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（fl251.染色體DNA探針的制備

①流式細(xì)胞分類法（flowcytometry）局限性：如果受試物的染色體形態(tài)單一、數(shù)目較多，如牛(2n=60)和狗(2n=78)的所有常染色體及綿羊(2n=54)和馬(2n=64)的大部分常染色體都是端位著絲點(diǎn)，因此，僅根據(jù)染色體的形態(tài)和大小很難將所有的染色體準(zhǔn)確地區(qū)分開來。1.染色體DNA探針的制備①流式細(xì)胞分類法（flo261.染色體DNA探針的制備

②克隆基因庫或體細(xì)胞雜交株通過特定的克隆基因文庫或者特異性的體細(xì)胞雜交細(xì)胞系制備某條染色體整個或部分DNA探針。該法特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確性高，并且可以與功能遺傳學(xué)的研究結(jié)合起來，但對實(shí)驗(yàn)室要求較高，取材來源和研究范圍有所限制。1.染色體DNA探針的制備②克隆基因庫或體細(xì)胞雜交27

1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增

顯微切割(microdissection)技術(shù)是在顯微狀態(tài)或顯微鏡直視下直接或通過顯微操作系統(tǒng)對欲選取的材料進(jìn)行切割分離并收集用于后續(xù)研究的技術(shù)。

染色體顯微切割分手工切割和激光切割法，倒置顯微鏡上裝配切割臂，安上硅化玻璃針，找到分散良好的分裂相來切割所需染色體片段。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC281.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增

早在上世紀(jì)70年代，染色體顯微切割已應(yīng)用于多線染色體的研究，是細(xì)胞生物學(xué)常用的實(shí)驗(yàn)方法之一。當(dāng)時由于無法直接擴(kuò)增染色體DNA，所以必須在顯微鏡下反復(fù)切割若干拷貝的染色體，才能滿足實(shí)驗(yàn)的要求這不僅費(fèi)力耗時，而且要求實(shí)驗(yàn)操作人員必須具備熟練的染色體分帶和鑒定經(jīng)驗(yàn)，才保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。直到l989年Ludecke等將PCR擴(kuò)增與染色體顯微切割結(jié)合起來，從而改進(jìn)了這種實(shí)驗(yàn)方法。對于同一條染色體，只要切割和收集5～10個拷貝，通過PCR擴(kuò)增，即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。從而極大地提高了實(shí)驗(yàn)技術(shù)的可行性和準(zhǔn)確性。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC291.染色體DNA探針的制備

③通過染色體顯微切割和PCR擴(kuò)增制備特異性的染色體DNA探針。相對而言，該方法具有直接、準(zhǔn)確、簡便和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。1.染色體DNA探針的制備③通過染色體顯微切割和PC30

2.熒光原位雜交

fluorescentinsituhybridazation,FISH

什么是原位雜交？原位雜交是基于DNA分子復(fù)制原理而發(fā)展起來的一種技術(shù)。用帶有標(biāo)記（放射性同位素、熒光染料等）的DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交，然后用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在及定位。2.熒光原位雜交

fluorescent312.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20世紀(jì)80年代末在放射性原為雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導(dǎo)分子結(jié)合，雜交后再通過免疫細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料。2.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20322.熒光原位雜交

基本原理：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素、地高辛，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。2.熒光原位雜交基本原理：332.熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)流程：

FISH樣本的制備→探針的制備→探針標(biāo)記→雜交→（染色體顯帶）→熒光顯微鏡檢測→結(jié)果分析。

2.熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)流程：342.熒光原位雜交

優(yōu)點(diǎn):

熒光試劑和探針經(jīng)濟(jì)、安全；

探針穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可在兩年內(nèi)使用；實(shí)驗(yàn)周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準(zhǔn)確；可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針當(dāng)；

多色FISH在同一個核中顯示不同顏色可同時檢測