淺談博士后基金申請(qǐng)邱麗娟（qiulijuan@）中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所

淺談博士后基金申請(qǐng)邱麗娟第四章申報(bào)評(píng)審第十二條申請(qǐng)資助的博士后研究人員必須具備良好的思想品德、較高的學(xué)術(shù)水平和較強(qiáng)的科研能力；申報(bào)評(píng)審的項(xiàng)目應(yīng)具有基礎(chǔ)性、原創(chuàng)性和前瞻性，具有重要科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值

第十四條博士后研究人員申請(qǐng)基金資助所報(bào)項(xiàng)目，應(yīng)為本人承擔(dān)。申報(bào)材料的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)真實(shí)可靠，不得弄虛作假第十七條評(píng)審專家對(duì)申請(qǐng)者的研究基礎(chǔ)、研究方法、研究思路、支出預(yù)算和創(chuàng)新能力等方面做出分析判斷，評(píng)審出具有發(fā)展?jié)摿蛣?chuàng)新能力的博士后研究人員，予以資助。

中國(guó)博士后科學(xué)基金資助規(guī)定

第四章申報(bào)評(píng)審第十二條申請(qǐng)資助的博士后研究人員必須具備良一、選題基礎(chǔ)研究選準(zhǔn)科學(xué)問題，結(jié)合科學(xué)發(fā)展前沿應(yīng)用研究選擇國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中迫切需要解決關(guān)鍵科技問題

題目要具體明確，避免過寬，過大資源篩選到種質(zhì)創(chuàng)新和育種結(jié)合問題用最實(shí)用的方法，不是方法越新越好如差異顯示，蛋白組學(xué)，miRNA等題目要具有科學(xué)性，不能只具有操作性如轉(zhuǎn)基因研究，可針對(duì)方法進(jìn)行研究

符合需要性、合理性、可行性、創(chuàng)新性原則一、選題基礎(chǔ)研究題目要具體明確，避免過寬，過大符合需要性選題啟動(dòng)子超表達(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊慐ST-SSR標(biāo)記開發(fā)和遺傳作圖蛋白激酶對(duì)作物耐鹽脅迫的調(diào)控機(jī)理研究黑龍江作物遺傳多樣性及耐冷性研究抗性突變體的鑒定及其抗性機(jī)理研究春化基因的分子標(biāo)記抗性種質(zhì)的遺傳多樣性及優(yōu)異抗源發(fā)掘受體蛋白的選擇性剪接對(duì)抗性影響的研究病原菌資源與其宿主的遺傳分化研究

選題啟動(dòng)子超表達(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊懚?、個(gè)人及申報(bào)項(xiàng)目基本信息1、考慮現(xiàn)有項(xiàng)目與現(xiàn)在項(xiàng)目的關(guān)系，非越多越好2、已完成項(xiàng)目與申報(bào)項(xiàng)目之間的關(guān)系內(nèi)容、經(jīng)費(fèi)的考慮3、博士后時(shí)間短、精力有限二、個(gè)人及申報(bào)項(xiàng)目基本信息1、考慮現(xiàn)有項(xiàng)目與現(xiàn)在項(xiàng)目的關(guān)系，摘要具體明確研究意義研究基礎(chǔ)研究?jī)?nèi)容與目標(biāo)摘要具體明確研究意義研究基礎(chǔ)研究?jī)?nèi)容與目標(biāo)摘要利用基因工程改良油菜耐濕性，對(duì)提高甘藍(lán)型油菜的耐濕性和研究植物耐濕機(jī)理具有重要意義。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)…….，連通植物抗旱和耐濕信號(hào)傳導(dǎo)途徑，具有重要意義。這些材料攜帶有高產(chǎn)、抗病、抗逆等眾多的優(yōu)異基因摘要敘述簡(jiǎn)練嚴(yán)謹(jǐn)摘要利用基因工程改良油菜耐濕性，對(duì)提高甘藍(lán)型油菜的耐濕性三、項(xiàng)目立論依據(jù)1、研究意義

基礎(chǔ)研究需結(jié)合科學(xué)研究發(fā)展趨勢(shì)來論述科學(xué)意義

應(yīng)用研究需結(jié)合國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中迫切需要解決的關(guān)鍵科技問題來論述其應(yīng)用前景

2、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀綜述

要求內(nèi)容翔實(shí)、清晰，層次分明，標(biāo)題突出三、項(xiàng)目立論依據(jù)1、研究意義3、項(xiàng)目創(chuàng)新之處（粗細(xì)處理）

1）以往對(duì)NAC基因的研究主要在于模式植物如擬南芥的胚胎早期發(fā)育或在耐逆境中的作用，還沒有系統(tǒng)研究NAC基因?qū)Υ蠖狗N子發(fā)育的影響。因此，本項(xiàng)目特色之一是闡明NAC蛋白在大豆種子發(fā)育過程中生物學(xué)功能。2）本項(xiàng)目結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因芯片分析技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)，同時(shí)在基因水平和蛋白水平闡明NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控機(jī)理，這也是本項(xiàng)目的特色之一。3）植物的種子發(fā)育是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，目前對(duì)種子發(fā)育的分子機(jī)制還了解較少。本研究通過大豆種子發(fā)育過程中NAC轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)理研究，初步明確NAC基因直接或間接參與的大豆種子發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這對(duì)于進(jìn)一步完善和豐富對(duì)植物種子發(fā)育分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)具有重要意義。學(xué)科交叉明顯：本項(xiàng)目涉及到植物生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、作物學(xué)等學(xué)科，學(xué)科間交叉明顯，容易產(chǎn)生新理論。3、項(xiàng)目創(chuàng)新之處（粗細(xì)處理）1）以往對(duì)NAC基因的研4、參考文獻(xiàn)（新、全、高）CaoD,HouWS,LiuW,YaoWW,WuCX,LiuXB,andHanTF,(2011).OverexpressionofTaNHX2enhancessalttoleranceof‘composite’andwholetransgenicsoybeanplants.PlantCell,TissueandOrganCulture107(3):541-552GleasonC.,ChaudhuriS.,YangT.,MunozA.,PoovaiahB.W.,OldroydG.E.(2006).Nodulationindependentofrhizobiainducedbyacalcium-activatedkinaselackingautoinhibition.Nature441(7097):1149-1152HaoYJ,WeiW,SongQX,ChenHW,ZhangYQ,WangF,ZouHF,LeiG,TianAG,ZhangWK,MaB,ZhangJS,ChenSY.(2011).SoybeanNACtranscriptionfactorspromoteabioticstresstoleranceandlateralrootformationintransgenicplants.PlantJournal68:302-313HayashiT,BanbaM,ShimodaY,KouchiH,HayashiM,Imaizumi-AnrakuH.(2010).AdominantfunctionofCCaMKinintracellularaccommodationofbacterialandfungalendosymbionts.ThePlantJournal63(1):141-154KangH,ZhuH,ChuX,YangZ,YuanS,YuD,WangC,HongZ,ZhangZ.(2011).ANovelInteractionbetweenCCaMKandaProteinContainingtheScythe_NUbiquitin-LikeDomaininLotusjaponicus.

PlantPhysiology155(3):1312-1324.4、參考文獻(xiàn)（新、全、高）CaoD,HouWS,L細(xì)節(jié)決定勝敗好中求好細(xì)節(jié)決定勝敗好中求好需要注意的問題每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實(shí)（文獻(xiàn)）為依據(jù)后面的研究?jī)?nèi)容，前面必須有該領(lǐng)域的進(jìn)展，前后呼應(yīng)體現(xiàn)出本研究的重要性和地位，讓外行也能明白附主要參考文獻(xiàn)：

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規(guī)范，前后一致

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文獻(xiàn)期刊要具有影響

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新、全

礦物質(zhì)對(duì)作物生長(zhǎng)的題目需要注意的問題每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實(shí)申請(qǐng)者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)NAC同源基因可能參與了大豆種子發(fā)育的進(jìn)程（Mengetal,inpress）。本項(xiàng)目組應(yīng)用生物信息學(xué)結(jié)合分子克隆技術(shù)從大豆中分離了6個(gè)NAC同源基因(GmNAC1-GmNAC6)。組織表達(dá)分析表明，GmNAC1主要表達(dá)于根和花芽，GmNAC2主要表達(dá)于葉片、莖和發(fā)育中的種子，GmNAC3在花芽中強(qiáng)烈表達(dá)，在種子中表達(dá)較弱。GmNAC4和GmNAC6則表現(xiàn)為組成型表達(dá)。GmNAC5主要表達(dá)于發(fā)育中的大豆種子，在花芽和莢皮中也有微弱的表達(dá)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)：GmNAC2和GmNAC5都在大豆種子代謝旺盛時(shí)期即30-35DAF的表達(dá)量最高，表明這兩個(gè)基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài)密切有關(guān)，但它們是如何參與調(diào)節(jié)大豆種子發(fā)育進(jìn)程的？有哪些基因參與調(diào)節(jié)？目前還不清楚，需要進(jìn)一步深入研究。這部分與后面的工作基礎(chǔ)不要重復(fù)申請(qǐng)者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向這部分與后面的工作四、項(xiàng)目研究方案研究目標(biāo)（明確）研究?jī)?nèi)容（適當(dāng)）擬解決的關(guān)鍵問題（本研究科學(xué)和科技問題）擬采取的研究方法（技術(shù)方法）技術(shù)路線（畫圖）實(shí)驗(yàn)方案（內(nèi)容的實(shí)施）可行性分析研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展（詳細(xì)）四、項(xiàng)目研究方案研究目標(biāo)（明確）

1、研究目標(biāo)

1）明確GmNAC2和GmNAC5在大豆種子發(fā)育中的生物學(xué)功能；

2）初步闡明GmNAC2和GmNAC5在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并探討GmNAC2和GmNAC5的潛在育種利用價(jià)值。

該項(xiàng)目完成后，可望篩選到一批轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)表SCI科研論文1-2篇，申請(qǐng)專利1項(xiàng)，培養(yǎng)研究生1-2名。1、研究目標(biāo)該項(xiàng)目完成后，可望篩選到一批轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)表S

在現(xiàn)已克隆的GmNAC2和GmNAC5基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開展：4)GmNAC2和GmNAC5基因與其他基因的關(guān)系研究一是在基因表達(dá)水平上，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時(shí)期(開花后5天,15天,25天,35天,45天)的基因表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的基因；二是在蛋白質(zhì)水平上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時(shí)期(開花后5天,15天,25天,35天,45天)的蛋白表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的蛋白。進(jìn)一步分析差異表達(dá)基因與差異表達(dá)蛋白的關(guān)系。2、研究?jī)?nèi)容在現(xiàn)已克隆的GmNAC2和GmNAC5基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一3、擬解決的關(guān)鍵問題

1）目前對(duì)于NAC基因家族的研究報(bào)道多集中在模式植物的胚胎發(fā)育以及耐逆方面作用。對(duì)于大豆而言，由于其種子含有高蛋白和高油份（其種子組成與擬南芥明顯不同），NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中具體作用還不清楚，因此，本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題之一是闡明NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中的生物學(xué)功能。

2）我們的前期研究表明，GmNAC2和GmNAC5在種子中表達(dá)量較高，而在其他組織中表達(dá)量相對(duì)較少，且在種子不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量也不同。但對(duì)這兩個(gè)基因之間及它們與其他基因間的關(guān)系還一無所知。因此，本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題之二是在轉(zhuǎn)基因研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)，探明GmNAC2和GmNAC5以及它們與其他基因間的關(guān)系。目前現(xiàn)狀（原因）/解決問題項(xiàng)目?jī)?nèi)；項(xiàng)目外（抗除草劑）3、擬解決的關(guān)鍵問題目前現(xiàn)狀（原因）/解決問題項(xiàng)目?jī)?nèi)；項(xiàng)目外研究目標(biāo)本課題以誘變產(chǎn)生的低植酸種質(zhì)為材料，采用生物技術(shù)、生物信息學(xué)、現(xiàn)代儀器分析技術(shù)和傳統(tǒng)的育種手段相結(jié)合的方法，對(duì)其進(jìn)行了系列研究，預(yù)期目標(biāo)如下：

1、精細(xì)定位兩個(gè)突變基因，獲得與其連鎖的分子標(biāo)記，遺傳距離<1.0cM，為標(biāo)記輔助選擇、圖位克隆或通過比較基因組分析確定候選基因打下基礎(chǔ)。

2、明確兩個(gè)低植酸突變單獨(dú)使用和組合使用的育種價(jià)值。（三）擬解決的關(guān)鍵問題通過本項(xiàng)目的實(shí)施，獲得可以用于提高大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)、對(duì)農(nóng)藝和其它品質(zhì)性狀又沒有負(fù)面效應(yīng)的低植酸突變基因，找到與其緊密連鎖的分子標(biāo)記。研究目標(biāo)

研究?jī)?nèi)容本項(xiàng)目主要開展TWlpa1-2和ZClpa2-1兩個(gè)低植酸突變基因的定位和育種價(jià)值的研究。包括

1、微衛(wèi)星標(biāo)記初步定位突變基因。（太粗）

2、突變基因目標(biāo)區(qū)段多態(tài)性標(biāo)記的挖掘，并用于該區(qū)段分離單株的HAPLOTYPE分析，從而完成突變基因的精細(xì)定位。

3、通過突變種質(zhì)和常規(guī)品種雜交后代群體中，低植酸和野生型株系的產(chǎn)量、種子田間出苗率和品質(zhì)性狀（低聚糖、脂肪酸含量和組分）的比較分析，研究?jī)蓚€(gè)獨(dú)立的低植酸突變是否對(duì)上述性狀具有負(fù)面影響；確定兩個(gè)突變基因在大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)改良中的價(jià)值。

4、利用分子標(biāo)記輔助選擇，獲得攜帶兩個(gè)突變基因的純合株系，通過分析其植酸含量、農(nóng)藝和品質(zhì)性狀表現(xiàn)，確定兩個(gè)突變基因組合使用時(shí)的效果。標(biāo)題研究?jī)?nèi)容標(biāo)題4、擬采取的研究方法詳細(xì)敘述或引用文獻(xiàn)4、擬采取的研究方法5.技術(shù)路線（標(biāo)出基礎(chǔ)，不能太復(fù)雜）例一5.技術(shù)路線（標(biāo)出基礎(chǔ)，不能太復(fù)雜）例一6、研究方案

1）蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位：GmNAC2與GFP基因融合后的Gateway載體pMDC44系列(Curtis&Grossniklaus,2003,PlantPhysi,133:462-469),用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)，結(jié)合激光共聚焦顯微鏡分析，研究GmNAC2編碼產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。

2）蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性分析

3）基因表達(dá)分析（原位雜交）

4）轉(zhuǎn)基因大豆的獲得與分析

5）基因芯片分析

6）GmNAC2和GmNAC5下游基因的鑒定

7）蛋白質(zhì)組分析從研究?jī)?nèi)容的角度進(jìn)行闡述，不要與研究方法重復(fù)6、研究方案從研究?jī)?nèi)容的角度進(jìn)行闡述，不要與研究方法重復(fù)目前有關(guān)NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請(qǐng)者已克隆了兩個(gè)可能與種子發(fā)育相關(guān)的NAC基因，為進(jìn)一步研究準(zhǔn)備了基礎(chǔ)材料和信息。轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項(xiàng)目實(shí)施的重要環(huán)節(jié)，本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過10多年的摸索，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交驗(yàn)證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi&Yu,2006）。此外,我們也在大豆上建立了基因過量表達(dá)和RNAi技術(shù)轉(zhuǎn)基因體系（易新萍，南農(nóng)博士論文,2006）；通過基因芯片技術(shù)大規(guī)模研究差異表達(dá)基因，由于商品化大豆基因芯片產(chǎn)品（Affymetrix）的問世和推廣而更加容易,應(yīng)用基因芯片，本實(shí)驗(yàn)室也開展了大豆不同器官間的差異表達(dá)基因的研究(黃方等,未發(fā)表資料)；本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊，2005），還研究了種子萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組成的變化（徐曉燕等，2006）。上述分析表明，本項(xiàng)目具有較好的基礎(chǔ)和技術(shù)貯備，研究?jī)?nèi)容和方案是切實(shí)可行的。7、可行性分析目前有關(guān)NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請(qǐng)研究方案及可行性分析（一）突變基因的精細(xì)定位

（1）基于微衛(wèi)星標(biāo)記的初步定位。對(duì)ZClpa2-1基因，我們利用突變種質(zhì)與親緣較遠(yuǎn)的非低植酸常規(guī)品種的雜交后代群體，將其定位在B2連鎖群與Satt416相距4.6cM的位置上。進(jìn)一步將通過擴(kuò)大分離群體單株數(shù)目，利用新的在Satt416區(qū)段有更多多態(tài)性標(biāo)記的定位群體，提高定位精度，獲得更加緊密的微衛(wèi)星標(biāo)記。對(duì)TWlpa1-2基因，將采用與ZClpa2-1基因定位相似的辦法完成初步定位。

（2）新的分子標(biāo)記的開發(fā)與基因精細(xì)定位。開發(fā)新的SNP和CAPS標(biāo)記,利用分離群體分析單株的基因型，從而找到連鎖更加緊密的分子標(biāo)記。（3）定位群體與種子表現(xiàn)型鑒定。本研究將利用以下雜交組合的分離群體進(jìn)行基因定位。TWlpa1-2×浙春3號(hào)（已有組合）、TWlpa1-2×中豆27（已有組合）、TWlpa1-2×浙鮮豆2號(hào)（計(jì)劃使用）。種子的低植酸性狀，采用高無機(jī)磷（HIP）篩選技術(shù)進(jìn)行間接確定（袁鳳杰等，2005）。研究方案及可行性分析（二）低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。利用用于定位的TWlpa1-2和ZClpa2-1遺傳群體，每個(gè)組合培育HIP純合型和野生純合型F5家系各60個(gè)，隨機(jī)取15個(gè)家系混為一組，這樣每個(gè)組合各有三組HIP純合型和野生純合型材料，每個(gè)突變基因各有六組HIP純合型和野生純合型材料。將這六組材料按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分別在杭州春、秋兩季，海南冬春季節(jié)種植。按標(biāo)準(zhǔn)方法考察如下，特性，通過統(tǒng)計(jì)分析，確定兩個(gè)突變基因?qū)@些性狀在不同環(huán)境條件下的影響?？疾斓霓r(nóng)藝性狀包括小區(qū)產(chǎn)量和產(chǎn)量組成因素，如單株莢數(shù)、單株粒數(shù)、單株重和百粒重等。種子收獲后按標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)蛋白含量、油份含量和脂肪酸組成、異黃酮和低聚糖含量進(jìn)行分析。（二）低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。（三）突變基因的聚合和分析從提高種子中營(yíng)養(yǎng)元素的有效性和保護(hù)環(huán)境環(huán)境的角度，植酸含量下降越多效果越明顯；然而植酸在植物的生長(zhǎng)發(fā)育中有著重要的生理功能，因此，研究植酸下降的幅度與植株是否能夠正常生長(zhǎng)的關(guān)系，十分重要。本試驗(yàn)將利用分子標(biāo)記（其中TWlpa1-2采用根據(jù)2-bp缺失設(shè)計(jì)的特異性標(biāo)記，Yuan等2007），在TWlpa1-2和ZClpa2-1兩個(gè)突變種質(zhì)的雜交后代（F3或F4）中選擇兩個(gè)突變基因均為純合的株系。通過對(duì)此類材料植酸含量的分析，探明兩個(gè)突變組合在一起對(duì)植酸合成的影響程度。在此基礎(chǔ)上，通過分析雙突變純合株系材料的農(nóng)藝和品質(zhì)性性狀，確定兩個(gè)突變基因組合使用的育種價(jià)值（方法同2：低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響）（三）突變基因的聚合和分析本試驗(yàn)涉及的研究項(xiàng)目，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完成了材料、方法和技術(shù)平臺(tái)的構(gòu)建，因此，完成實(shí)驗(yàn)計(jì)劃應(yīng)該不存在技術(shù)上的困難?；蚓?xì)定位部分，如前所述，大豆分子遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究日新月異，在未來的幾年中會(huì)有更多的信息可以幫助建立起更有效的方法、技術(shù)，采用更加有效的策略完成預(yù)定任務(wù)。我們根據(jù)現(xiàn)有的基因組信息，提出新標(biāo)記開發(fā)和精細(xì)定位的策略，在執(zhí)行過程中應(yīng)該也不會(huì)遇到無法克服的困難，但有可能工作量會(huì)比較大，無法達(dá)到非常精細(xì)的地步。但我們制定的目標(biāo)是獲得遺傳距離小于1cM的標(biāo)記，這是完全可能的，其他研究者也已經(jīng)有類似的報(bào)道。申請(qǐng)者研究小組已有幾十年大豆育種和相關(guān)基礎(chǔ)研究的歷史，擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富，實(shí)力較強(qiáng)的研究隊(duì)伍，浙江大學(xué)作為合作單位，增強(qiáng)了基礎(chǔ)理論研究的力量；建設(shè)于我院的國(guó)家大豆改良分中心實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建成并投入使用，其品質(zhì)分析和分子生物學(xué)研究所需儀器較齊全；同時(shí)大棚、曬場(chǎng)和試驗(yàn)基地等基礎(chǔ)設(shè)施良好，這些都為本項(xiàng)目的開展和實(shí)施提供了保障?？尚行苑治觯罕驹囼?yàn)涉及的研究項(xiàng)目，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完8.研究計(jì)劃及預(yù)期研究進(jìn)展受理項(xiàng)目11）2008.1-2008.12①GmNAC2和GmNAC5蛋白的轉(zhuǎn)錄活性研究；②GmNAC2的亞細(xì)胞定位研究；③基因過量表達(dá)載體和RNAi載體的構(gòu)建與驗(yàn)證；④開展大豆遺傳轉(zhuǎn)化及分子驗(yàn)證，獲得GmNAC2和GmNAC5單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株（T0代）或單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株（T0代）。2）2009.1-2009.12①GmNAC2和GmNAC5在大豆種子不同發(fā)育時(shí)期的原位雜交分析；②獲得GmNAC2和GmNAC5單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株T1代；③獲得單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株T1代；④通過雜交獲得雙基因過量表達(dá)或雙基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株F1代；⑤利用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡等對(duì)轉(zhuǎn)基因植株種子的發(fā)育過程進(jìn)行分析。規(guī)劃要具體8.研究計(jì)劃及預(yù)期研究進(jìn)展受理項(xiàng)目1規(guī)劃要具體五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件1、已取得的研究成績(jī)（判斷可行性,課題與個(gè)人關(guān)系：博士后的特殊性）近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁(yè)碼等

與本課題無關(guān)不要列（實(shí)事求是）獎(jiǎng)勵(lì)情況須詳細(xì)列出全部受獎(jiǎng)人員、獎(jiǎng)勵(lì)名稱等級(jí)、授獎(jiǎng)年等）五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件1、已取得的研究成績(jī)（判斷可行性,課題近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁(yè)碼等

與本課題無關(guān)不要列（實(shí)事求是）獎(jiǎng)勵(lì)情況須詳細(xì)列出全部受獎(jiǎng)人員、獎(jiǎng)勵(lì)名稱等級(jí)、授獎(jiǎng)年等）近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本受理項(xiàng)目1工作基礎(chǔ)基因克隆與表達(dá)：本實(shí)驗(yàn)室已從大豆中克隆了6個(gè)NAC基因(GmNAC1-GmNAC6)(Mengetal.,2007，inpress)。本研究選擇其中的兩個(gè)與種子發(fā)育相關(guān)的NAC基因GmNAC2和GmNAC5進(jìn)一步分析表明GmNAC基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。為明確大豆NAC蛋白是否定位于核中，我們構(gòu)建了GmNAC5與GFP基因融合的載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GmNAC5是定位在細(xì)胞核（如下圖3）。轉(zhuǎn)基因大豆技術(shù)體系：轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項(xiàng)目實(shí)施的重要環(huán)節(jié)，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交驗(yàn)證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi&Yu,2006）。2、與項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累受理項(xiàng)目12、與項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累基因芯片分析技術(shù)：我們利用大豆寡聚核苷酸芯片（Affymetrix）研究了大豆不同組織的轉(zhuǎn)錄組，已經(jīng)鑒定了221個(gè)大豆花特異表達(dá)基因，并通過Real-timePCR技術(shù)進(jìn)行了芯片結(jié)果的驗(yàn)證（黃方等，未發(fā)表資料）；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：我們已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊,2005），累積了較好的蛋白組分析技術(shù)。上述研究工作基礎(chǔ)為本項(xiàng)目的順利實(shí)施提供了材料和技術(shù)保證。選題基礎(chǔ)研究選準(zhǔn)科學(xué)問題-課件受理項(xiàng)目21、采用我國(guó)不同的大豆種質(zhì)資源，通過物理誘變的方法，篩選到了2份植酸突變種質(zhì)；經(jīng)過5-6個(gè)世代的選育，其目標(biāo)性狀穩(wěn)定遺傳，農(nóng)藝性狀趨于穩(wěn)定。2、遺傳研究表明：2份突變均為隱性單基因所控制；等位性鑒定實(shí)驗(yàn)表明，2個(gè)突變基因非等位。獲得2份低植酸突變體明確低植酸突變由隱性單基因控制提供相關(guān)的數(shù)據(jù)受理項(xiàng)目2獲得2份低植酸突變體明確低植酸突變由隱性單基因控制受理項(xiàng)目23、磷素含量（植酸鹽、低價(jià)肌醇磷酸鹽、總磷和無機(jī)磷）分析表明，突變種質(zhì)中植酸含量顯著下降，達(dá)50％以上，無機(jī)磷大幅上升；突變種質(zhì)ZClpa2-1中低價(jià)肌醇磷酸鹽含量顯著上升，這在大豆低植酸突變種質(zhì)中是一個(gè)新的表現(xiàn)型。突變種質(zhì)中磷素組分發(fā)生的改變，不受環(huán)境條件的影響（以上測(cè)定在德國(guó)慕尼黑大學(xué)分析測(cè)試中心進(jìn)行）。4、對(duì)突變種質(zhì)ZClpa2-1進(jìn)行了基因定位，發(fā)現(xiàn)其突變發(fā)生是一個(gè)新的基因位點(diǎn)。通過的測(cè)序和連鎖分析，發(fā)現(xiàn)TWlpa1-2突變由肌醇-3-磷酸合成酶基因（MIPS1）第3外顯子的1個(gè)2-bp缺失引起，但在大豆中MIPS基因的4個(gè)拷貝均沒有定位的研究報(bào)道。明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)突變體基因變化受理項(xiàng)目2明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)突變體5、對(duì)突變種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比，突變種質(zhì)ZClpa2-1性狀沒有發(fā)生明顯的改變。而突變種質(zhì)TWlpa1-2的成苗率較低，但與親本相比下降幅度較小。6、品質(zhì)性狀分析：與親本野生型相比，突變種質(zhì)TWlpa1-2中蔗糖含量上升，棉籽糖和水蘇糖含量下降，該性狀也是大豆品質(zhì)改良的目標(biāo)之一。而兩個(gè)突變種質(zhì)中的異黃酮含量均發(fā)生了較大的改變。7、建立了植酸以及相關(guān)磷素組成成分的分析測(cè)試技術(shù)，并就此研究開展了一些國(guó)際交流。8、構(gòu)建了不同突變種質(zhì)的分離群體。不夠具體？9、針對(duì)以上的研究?jī)?nèi)容，已完成博士論文一篇（題目？）。其中部分已整理成研究性論文（題目？），將于2007年在TAG上發(fā)表。5、對(duì)突變種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件3、已具備的實(shí)驗(yàn)條件認(rèn)真填寫設(shè)施和條件并非所有的評(píng)委都了解4、尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件3、已具備的實(shí)驗(yàn)條件六、項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)預(yù)算預(yù)算要切實(shí)可行按批復(fù)預(yù)算進(jìn)行審計(jì)了解政策的有關(guān)規(guī)定價(jià)格合理六、項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)預(yù)算預(yù)算要切實(shí)可行七、專家推薦意見對(duì)申報(bào)項(xiàng)目?jī)?nèi)容的真實(shí)性和知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等提出審核意見，并對(duì)申請(qǐng)者的研究方法和創(chuàng)新能力，對(duì)申報(bào)項(xiàng)目的科學(xué)價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值以及預(yù)期成果提出評(píng)價(jià)意見。七、專家推薦意見對(duì)申報(bào)項(xiàng)目?jī)?nèi)容的真實(shí)性和知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等提出審八、申請(qǐng)人承諾與單位審核

申請(qǐng)者承諾我保證填報(bào)內(nèi)容真實(shí)、準(zhǔn)確。如果獲得資助，我將嚴(yán)格遵守《中國(guó)博士后科學(xué)基金資助規(guī)定》，按計(jì)劃認(rèn)真開展研究工作，保證完成研究工作任務(wù)。申請(qǐng)者（簽章）：

年月日申報(bào)單位審核意見我單位已對(duì)申請(qǐng)人的資格和《申請(qǐng)書》內(nèi)容進(jìn)行了認(rèn)真審核，各項(xiàng)內(nèi)容屬實(shí)，符合申請(qǐng)條件。負(fù)責(zé)人（簽章）：?jiǎn)挝唬ㄉw章）：

年月日八、申請(qǐng)人承諾與單位審核申請(qǐng)者承諾我保證填報(bào)內(nèi)容真實(shí)、準(zhǔn)存在的問題

近年來從我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)需求中凝練基礎(chǔ)科學(xué)問題的項(xiàng)目申請(qǐng)有所增加，圍繞農(nóng)學(xué)基礎(chǔ)科學(xué)問題開展多學(xué)科交叉研究的趨勢(shì)更加明顯，依托單位的分布呈現(xiàn)出多樣化的格局，但依然存在下列主要問題：①普遍重視農(nóng)作物基因組研究，但在此基礎(chǔ)上對(duì)生理學(xué)和遺傳學(xué)的機(jī)理揭示不夠；②注重跟蹤國(guó)際研究熱點(diǎn)，與我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際問題結(jié)合不夠緊密③多數(shù)研究工作的系統(tǒng)性和延續(xù)性不夠。2012-2013申請(qǐng)項(xiàng)目應(yīng)以農(nóng)作物及其產(chǎn)品為研究對(duì)象，與其他學(xué)科的交叉不能偏離這一研究主體，否則不屬于本學(xué)科的資助范圍。本學(xué)科不受理以農(nóng)業(yè)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品、林木和模式植物擬南芥等為研究對(duì)象的申請(qǐng)。請(qǐng)準(zhǔn)確填寫申請(qǐng)代碼至二級(jí)申請(qǐng)代碼（C13XX），否則將不予資助。存在的問題

近年來從我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)需求中凝練基礎(chǔ)科學(xué)問題的

從2012年度的項(xiàng)目申請(qǐng)看，多數(shù)申請(qǐng)人能較好把握國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展，注重從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際中凝練科學(xué)問題，重視選題的科學(xué)意義與應(yīng)用潛力，學(xué)術(shù)思想和研究方法的創(chuàng)新性也有所提高，前期研究基礎(chǔ)更加扎實(shí)，申請(qǐng)書撰寫更加規(guī)范。但依然存在下列主要問題：①不少申請(qǐng)跟蹤或仿效國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究現(xiàn)象嚴(yán)重，簡(jiǎn)單地將其他研究方法（或材料）嫁接到另外一個(gè)材料（或方法）上，缺乏創(chuàng)新性；②有些項(xiàng)目申請(qǐng)的研究?jī)?nèi)容，只重視實(shí)驗(yàn)室模擬條件下的研究工作，特別是過分強(qiáng)調(diào)分子水平的研究，而對(duì)田間條件下的研究與驗(yàn)證工作重視不夠；③部分項(xiàng)目申請(qǐng)缺乏對(duì)科學(xué)問題的凝練，研究?jī)?nèi)容寬泛，研究深度不夠，研究工作的系統(tǒng)性和連續(xù)性不強(qiáng)。存在的問題

從2012年度的項(xiàng)目申請(qǐng)看，多數(shù)申請(qǐng)人能較好把握注意事項(xiàng)形式和內(nèi)容統(tǒng)一全角（，。）半角(,.)排版編號(hào)充分準(zhǔn)備各項(xiàng)都要認(rèn)真填寫（太精煉等于沒講，太泛泛也等于沒有，要圖表結(jié)合，標(biāo)注文獻(xiàn)）多征求意見（江蘇省農(nóng)科院）（別人有疑問，就說明闡述方面不夠清楚，申辯機(jī)會(huì)很小，集體決定）沒有不好，只有更好?。ㄔu(píng)審是有比例要求的）注意事項(xiàng)形式和內(nèi)容統(tǒng)一第三章申報(bào)與審核第七條面上資助一年評(píng)審兩次（三月和八月份），申報(bào)時(shí)間以基金會(huì)通知為準(zhǔn)第八條博士后研究人員進(jìn)站后，凡符合《規(guī)定》中要求的條件和范圍的，可提出資助申請(qǐng)。應(yīng)具有原創(chuàng)性、創(chuàng)新性、前沿性，具有較高科學(xué)和應(yīng)用價(jià)值第九條申請(qǐng)者在中國(guó)博士后網(wǎng)上認(rèn)真填寫《申請(qǐng)書》后提交設(shè)站單位，并下載打印一式3份報(bào)送設(shè)站單位審核。填寫內(nèi)容要真實(shí)，申報(bào)的項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)要突出，并將一些重要的成果或獎(jiǎng)勵(lì)（復(fù)印件）附后第十條凡申報(bào)項(xiàng)目?jī)?nèi)容屬涉密的，須在涉密欄目?jī)?nèi)標(biāo)注。屬學(xué)科交叉的，須注明學(xué)科交叉研究所涉及的一級(jí)學(xué)科和二級(jí)學(xué)科中國(guó)博士后科學(xué)基金面上資助實(shí)施辦法

第三章申報(bào)與審核第七條面上資助一年評(píng)審兩次（三月和八第三章申報(bào)與審核第十一條申請(qǐng)者需經(jīng)合作導(dǎo)師和一位同行專家兩人推薦。推薦人要審核《申請(qǐng)書》真實(shí)性，知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等內(nèi)容，評(píng)議申報(bào)項(xiàng)目在學(xué)術(shù)思想上的創(chuàng)新、特色，研究目標(biāo)、內(nèi)容、方法的創(chuàng)新性和可行性進(jìn)行，對(duì)預(yù)期成果實(shí)現(xiàn)的可能性給予評(píng)價(jià)。推薦意見需專家本人簽名

第十二條設(shè)站單位負(fù)責(zé)組織本單位的申報(bào)，依據(jù)《規(guī)定》要求，對(duì)申請(qǐng)者資格、材料審核并簽署意見，蓋章后向基金會(huì)報(bào)送紙質(zhì)《申請(qǐng)書》一式3份，同時(shí)在中國(guó)博士后網(wǎng)上提交《申請(qǐng)書》。屬涉密不網(wǎng)上提交，需報(bào)送電子版和紙質(zhì)《申請(qǐng)書》一式8份?；饡?huì)不接受博士后個(gè)人申報(bào)第十四條基金會(huì)根據(jù)設(shè)站單位的報(bào)告對(duì)申報(bào)材料進(jìn)行驗(yàn)收登記，并對(duì)申報(bào)人資格進(jìn)行審核，不符合《規(guī)定》要求的向設(shè)站單位反饋第三章申報(bào)與審核第十一條申請(qǐng)者需經(jīng)合作導(dǎo)師和一位同行第四章評(píng)審第十六條基金會(huì)根據(jù)學(xué)科分組情況，從專家?guī)熘须S機(jī)抽取同學(xué)科專家組成專家評(píng)審組。為了保證評(píng)審的公正性和合理性，解決學(xué)科交叉研究評(píng)審中針對(duì)性不強(qiáng)的問題，屬學(xué)科交叉的研究項(xiàng)目，均選擇相關(guān)學(xué)科領(lǐng)域的專家評(píng)審。每個(gè)學(xué)科組由5名專家組成

基金會(huì)以網(wǎng)絡(luò)或通訊方式將各組申請(qǐng)材料送評(píng)審專家第十七條評(píng)審專家依據(jù)《專家評(píng)審表》中的評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)申請(qǐng)者申報(bào)的項(xiàng)目進(jìn)行綜合評(píng)審，評(píng)審實(shí)行百分制，按分列的項(xiàng)目權(quán)重評(píng)分，總分即是個(gè)人的成績(jī)。專家在《專家評(píng)審表》上簽名后送基金會(huì)第十八條基金會(huì)按學(xué)科組匯總專家評(píng)審結(jié)果，以返回評(píng)審結(jié)果的專家打分的平均數(shù)對(duì)每一學(xué)科組申請(qǐng)者進(jìn)行排序

第十九條根據(jù)本期應(yīng)資助人數(shù)的比例，按申報(bào)人數(shù)分配各學(xué)科組資助的名額，四舍五入取整中國(guó)博士后科學(xué)基金面上資助實(shí)施辦法

第四章評(píng)審第十六條基金會(huì)根據(jù)學(xué)科分組情況，從專家?guī)熘芯C合評(píng)價(jià)等級(jí)參考標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)創(chuàng)新性科學(xué)意義或應(yīng)用前景研究?jī)?nèi)容總體研究方案優(yōu)強(qiáng)重要恰當(dāng)合理良立意新穎較重要較好較好中一定尚可但需修改差某些關(guān)鍵方面有明顯不足綜合評(píng)價(jià)等級(jí)參考標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)創(chuàng)新性科學(xué)意義或應(yīng)用前景研究?jī)?nèi)容總體總結(jié)詳讀指南，保證形式過關(guān)（NSFC）提出問題（選題）提出問題的根據(jù)（立題依據(jù)）解決問題（研究?jī)?nèi)容、方案等）研究問題的特色（創(chuàng)新性）支撐（基礎(chǔ)、設(shè)施）做什么為什么做怎么做為什么讓你做做法怎樣清楚明晰，深入淺出總結(jié)詳讀指南，保證形式過關(guān)（NSFC）做什么為什么做怎么預(yù)祝申請(qǐng)成功！預(yù)祝申請(qǐng)成功！

淺談博士后基金申請(qǐng)邱麗娟（qiulijuan@）中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所

淺談博士后基金申請(qǐng)邱麗娟第四章申報(bào)評(píng)審第十二條申請(qǐng)資助的博士后研究人員必須具備良好的思想品德、較高的學(xué)術(shù)水平和較強(qiáng)的科研能力；申報(bào)評(píng)審的項(xiàng)目應(yīng)具有基礎(chǔ)性、原創(chuàng)性和前瞻性，具有重要科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值

第十四條博士后研究人員申請(qǐng)基金資助所報(bào)項(xiàng)目，應(yīng)為本人承擔(dān)。申報(bào)材料的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)真實(shí)可靠，不得弄虛作假第十七條評(píng)審專家對(duì)申請(qǐng)者的研究基礎(chǔ)、研究方法、研究思路、支出預(yù)算和創(chuàng)新能力等方面做出分析判斷，評(píng)審出具有發(fā)展?jié)摿蛣?chuàng)新能力的博士后研究人員，予以資助。

中國(guó)博士后科學(xué)基金資助規(guī)定

第四章申報(bào)評(píng)審第十二條申請(qǐng)資助的博士后研究人員必須具備良一、選題基礎(chǔ)研究選準(zhǔn)科學(xué)問題，結(jié)合科學(xué)發(fā)展前沿應(yīng)用研究選擇國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中迫切需要解決關(guān)鍵科技問題

題目要具體明確，避免過寬，過大資源篩選到種質(zhì)創(chuàng)新和育種結(jié)合問題用最實(shí)用的方法，不是方法越新越好如差異顯示，蛋白組學(xué)，miRNA等題目要具有科學(xué)性，不能只具有操作性如轉(zhuǎn)基因研究，可針對(duì)方法進(jìn)行研究

符合需要性、合理性、可行性、創(chuàng)新性原則一、選題基礎(chǔ)研究題目要具體明確，避免過寬，過大符合需要性選題啟動(dòng)子超表達(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊慐ST-SSR標(biāo)記開發(fā)和遺傳作圖蛋白激酶對(duì)作物耐鹽脅迫的調(diào)控機(jī)理研究黑龍江作物遺傳多樣性及耐冷性研究抗性突變體的鑒定及其抗性機(jī)理研究春化基因的分子標(biāo)記抗性種質(zhì)的遺傳多樣性及優(yōu)異抗源發(fā)掘受體蛋白的選擇性剪接對(duì)抗性影響的研究病原菌資源與其宿主的遺傳分化研究

選題啟動(dòng)子超表達(dá)基因?qū)ψ魑锾匦缘挠绊懚?、個(gè)人及申報(bào)項(xiàng)目基本信息1、考慮現(xiàn)有項(xiàng)目與現(xiàn)在項(xiàng)目的關(guān)系，非越多越好2、已完成項(xiàng)目與申報(bào)項(xiàng)目之間的關(guān)系內(nèi)容、經(jīng)費(fèi)的考慮3、博士后時(shí)間短、精力有限二、個(gè)人及申報(bào)項(xiàng)目基本信息1、考慮現(xiàn)有項(xiàng)目與現(xiàn)在項(xiàng)目的關(guān)系，摘要具體明確研究意義研究基礎(chǔ)研究?jī)?nèi)容與目標(biāo)摘要具體明確研究意義研究基礎(chǔ)研究?jī)?nèi)容與目標(biāo)摘要利用基因工程改良油菜耐濕性，對(duì)提高甘藍(lán)型油菜的耐濕性和研究植物耐濕機(jī)理具有重要意義。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)…….，連通植物抗旱和耐濕信號(hào)傳導(dǎo)途徑，具有重要意義。這些材料攜帶有高產(chǎn)、抗病、抗逆等眾多的優(yōu)異基因摘要敘述簡(jiǎn)練嚴(yán)謹(jǐn)摘要利用基因工程改良油菜耐濕性，對(duì)提高甘藍(lán)型油菜的耐濕性三、項(xiàng)目立論依據(jù)1、研究意義

基礎(chǔ)研究需結(jié)合科學(xué)研究發(fā)展趨勢(shì)來論述科學(xué)意義

應(yīng)用研究需結(jié)合國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中迫切需要解決的關(guān)鍵科技問題來論述其應(yīng)用前景

2、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀綜述

要求內(nèi)容翔實(shí)、清晰，層次分明，標(biāo)題突出三、項(xiàng)目立論依據(jù)1、研究意義3、項(xiàng)目創(chuàng)新之處（粗細(xì)處理）

1）以往對(duì)NAC基因的研究主要在于模式植物如擬南芥的胚胎早期發(fā)育或在耐逆境中的作用，還沒有系統(tǒng)研究NAC基因?qū)Υ蠖狗N子發(fā)育的影響。因此，本項(xiàng)目特色之一是闡明NAC蛋白在大豆種子發(fā)育過程中生物學(xué)功能。2）本項(xiàng)目結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因芯片分析技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)，同時(shí)在基因水平和蛋白水平闡明NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控機(jī)理，這也是本項(xiàng)目的特色之一。3）植物的種子發(fā)育是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，目前對(duì)種子發(fā)育的分子機(jī)制還了解較少。本研究通過大豆種子發(fā)育過程中NAC轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)理研究，初步明確NAC基因直接或間接參與的大豆種子發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這對(duì)于進(jìn)一步完善和豐富對(duì)植物種子發(fā)育分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)具有重要意義。學(xué)科交叉明顯：本項(xiàng)目涉及到植物生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、作物學(xué)等學(xué)科，學(xué)科間交叉明顯，容易產(chǎn)生新理論。3、項(xiàng)目創(chuàng)新之處（粗細(xì)處理）1）以往對(duì)NAC基因的研4、參考文獻(xiàn)（新、全、高）CaoD,HouWS,LiuW,YaoWW,WuCX,LiuXB,andHanTF,(2011).OverexpressionofTaNHX2enhancessalttoleranceof‘composite’andwholetransgenicsoybeanplants.PlantCell,TissueandOrganCulture107(3):541-552GleasonC.,ChaudhuriS.,YangT.,MunozA.,PoovaiahB.W.,OldroydG.E.(2006).Nodulationindependentofrhizobiainducedbyacalcium-activatedkinaselackingautoinhibition.Nature441(7097):1149-1152HaoYJ,WeiW,SongQX,ChenHW,ZhangYQ,WangF,ZouHF,LeiG,TianAG,ZhangWK,MaB,ZhangJS,ChenSY.(2011).SoybeanNACtranscriptionfactorspromoteabioticstresstoleranceandlateralrootformationintransgenicplants.PlantJournal68:302-313HayashiT,BanbaM,ShimodaY,KouchiH,HayashiM,Imaizumi-AnrakuH.(2010).AdominantfunctionofCCaMKinintracellularaccommodationofbacterialandfungalendosymbionts.ThePlantJournal63(1):141-154KangH,ZhuH,ChuX,YangZ,YuanS,YuD,WangC,HongZ,ZhangZ.(2011).ANovelInteractionbetweenCCaMKandaProteinContainingtheScythe_NUbiquitin-LikeDomaininLotusjaponicus.

PlantPhysiology155(3):1312-1324.4、參考文獻(xiàn)（新、全、高）CaoD,HouWS,L細(xì)節(jié)決定勝敗好中求好細(xì)節(jié)決定勝敗好中求好需要注意的問題每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實(shí)（文獻(xiàn)）為依據(jù)后面的研究?jī)?nèi)容，前面必須有該領(lǐng)域的進(jìn)展，前后呼應(yīng)體現(xiàn)出本研究的重要性和地位，讓外行也能明白附主要參考文獻(xiàn)：

——

規(guī)范，前后一致

——

文獻(xiàn)期刊要具有影響

——

新、全

礦物質(zhì)對(duì)作物生長(zhǎng)的題目需要注意的問題每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實(shí)申請(qǐng)者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)NAC同源基因可能參與了大豆種子發(fā)育的進(jìn)程（Mengetal,inpress）。本項(xiàng)目組應(yīng)用生物信息學(xué)結(jié)合分子克隆技術(shù)從大豆中分離了6個(gè)NAC同源基因(GmNAC1-GmNAC6)。組織表達(dá)分析表明，GmNAC1主要表達(dá)于根和花芽，GmNAC2主要表達(dá)于葉片、莖和發(fā)育中的種子，GmNAC3在花芽中強(qiáng)烈表達(dá)，在種子中表達(dá)較弱。GmNAC4和GmNAC6則表現(xiàn)為組成型表達(dá)。GmNAC5主要表達(dá)于發(fā)育中的大豆種子，在花芽和莢皮中也有微弱的表達(dá)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)：GmNAC2和GmNAC5都在大豆種子代謝旺盛時(shí)期即30-35DAF的表達(dá)量最高，表明這兩個(gè)基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài)密切有關(guān)，但它們是如何參與調(diào)節(jié)大豆種子發(fā)育進(jìn)程的？有哪些基因參與調(diào)節(jié)？目前還不清楚，需要進(jìn)一步深入研究。這部分與后面的工作基礎(chǔ)不要重復(fù)申請(qǐng)者的研究前期工作進(jìn)展及進(jìn)一步的研究方向這部分與后面的工作四、項(xiàng)目研究方案研究目標(biāo)（明確）研究?jī)?nèi)容（適當(dāng)）擬解決的關(guān)鍵問題（本研究科學(xué)和科技問題）擬采取的研究方法（技術(shù)方法）技術(shù)路線（畫圖）實(shí)驗(yàn)方案（內(nèi)容的實(shí)施）可行性分析研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展（詳細(xì)）四、項(xiàng)目研究方案研究目標(biāo)（明確）

1、研究目標(biāo)

1）明確GmNAC2和GmNAC5在大豆種子發(fā)育中的生物學(xué)功能；

2）初步闡明GmNAC2和GmNAC5在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并探討GmNAC2和GmNAC5的潛在育種利用價(jià)值。

該項(xiàng)目完成后，可望篩選到一批轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)表SCI科研論文1-2篇，申請(qǐng)專利1項(xiàng)，培養(yǎng)研究生1-2名。1、研究目標(biāo)該項(xiàng)目完成后，可望篩選到一批轉(zhuǎn)基因植株，發(fā)表S

在現(xiàn)已克隆的GmNAC2和GmNAC5基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開展：4)GmNAC2和GmNAC5基因與其他基因的關(guān)系研究一是在基因表達(dá)水平上，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時(shí)期(開花后5天,15天,25天,35天,45天)的基因表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的基因；二是在蛋白質(zhì)水平上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時(shí)期(開花后5天,15天,25天,35天,45天)的蛋白表達(dá)差異,鑒定差異表達(dá)的蛋白。進(jìn)一步分析差異表達(dá)基因與差異表達(dá)蛋白的關(guān)系。2、研究?jī)?nèi)容在現(xiàn)已克隆的GmNAC2和GmNAC5基因的基礎(chǔ)上，進(jìn)一3、擬解決的關(guān)鍵問題

1）目前對(duì)于NAC基因家族的研究報(bào)道多集中在模式植物的胚胎發(fā)育以及耐逆方面作用。對(duì)于大豆而言，由于其種子含有高蛋白和高油份（其種子組成與擬南芥明顯不同），NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中具體作用還不清楚，因此，本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題之一是闡明NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中的生物學(xué)功能。

2）我們的前期研究表明，GmNAC2和GmNAC5在種子中表達(dá)量較高，而在其他組織中表達(dá)量相對(duì)較少，且在種子不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量也不同。但對(duì)這兩個(gè)基因之間及它們與其他基因間的關(guān)系還一無所知。因此，本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題之二是在轉(zhuǎn)基因研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)，探明GmNAC2和GmNAC5以及它們與其他基因間的關(guān)系。目前現(xiàn)狀（原因）/解決問題項(xiàng)目?jī)?nèi)；項(xiàng)目外（抗除草劑）3、擬解決的關(guān)鍵問題目前現(xiàn)狀（原因）/解決問題項(xiàng)目?jī)?nèi)；項(xiàng)目外研究目標(biāo)本課題以誘變產(chǎn)生的低植酸種質(zhì)為材料，采用生物技術(shù)、生物信息學(xué)、現(xiàn)代儀器分析技術(shù)和傳統(tǒng)的育種手段相結(jié)合的方法，對(duì)其進(jìn)行了系列研究，預(yù)期目標(biāo)如下：

1、精細(xì)定位兩個(gè)突變基因，獲得與其連鎖的分子標(biāo)記，遺傳距離<1.0cM，為標(biāo)記輔助選擇、圖位克隆或通過比較基因組分析確定候選基因打下基礎(chǔ)。

2、明確兩個(gè)低植酸突變單獨(dú)使用和組合使用的育種價(jià)值。（三）擬解決的關(guān)鍵問題通過本項(xiàng)目的實(shí)施，獲得可以用于提高大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)、對(duì)農(nóng)藝和其它品質(zhì)性狀又沒有負(fù)面效應(yīng)的低植酸突變基因，找到與其緊密連鎖的分子標(biāo)記。研究目標(biāo)

研究?jī)?nèi)容本項(xiàng)目主要開展TWlpa1-2和ZClpa2-1兩個(gè)低植酸突變基因的定位和育種價(jià)值的研究。包括

1、微衛(wèi)星標(biāo)記初步定位突變基因。（太粗）

2、突變基因目標(biāo)區(qū)段多態(tài)性標(biāo)記的挖掘，并用于該區(qū)段分離單株的HAPLOTYPE分析，從而完成突變基因的精細(xì)定位。

3、通過突變種質(zhì)和常規(guī)品種雜交后代群體中，低植酸和野生型株系的產(chǎn)量、種子田間出苗率和品質(zhì)性狀（低聚糖、脂肪酸含量和組分）的比較分析，研究?jī)蓚€(gè)獨(dú)立的低植酸突變是否對(duì)上述性狀具有負(fù)面影響；確定兩個(gè)突變基因在大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)改良中的價(jià)值。

4、利用分子標(biāo)記輔助選擇，獲得攜帶兩個(gè)突變基因的純合株系，通過分析其植酸含量、農(nóng)藝和品質(zhì)性狀表現(xiàn)，確定兩個(gè)突變基因組合使用時(shí)的效果。標(biāo)題研究?jī)?nèi)容標(biāo)題4、擬采取的研究方法詳細(xì)敘述或引用文獻(xiàn)4、擬采取的研究方法5.技術(shù)路線（標(biāo)出基礎(chǔ)，不能太復(fù)雜）例一5.技術(shù)路線（標(biāo)出基礎(chǔ)，不能太復(fù)雜）例一6、研究方案

1）蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位：GmNAC2與GFP基因融合后的Gateway載體pMDC44系列(Curtis&Grossniklaus,2003,PlantPhysi,133:462-469),用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)，結(jié)合激光共聚焦顯微鏡分析，研究GmNAC2編碼產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。

2）蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性分析

3）基因表達(dá)分析（原位雜交）

4）轉(zhuǎn)基因大豆的獲得與分析

5）基因芯片分析

6）GmNAC2和GmNAC5下游基因的鑒定

7）蛋白質(zhì)組分析從研究?jī)?nèi)容的角度進(jìn)行闡述，不要與研究方法重復(fù)6、研究方案從研究?jī)?nèi)容的角度進(jìn)行闡述，不要與研究方法重復(fù)目前有關(guān)NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請(qǐng)者已克隆了兩個(gè)可能與種子發(fā)育相關(guān)的NAC基因，為進(jìn)一步研究準(zhǔn)備了基礎(chǔ)材料和信息。轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項(xiàng)目實(shí)施的重要環(huán)節(jié)，本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過10多年的摸索，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交驗(yàn)證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi&Yu,2006）。此外,我們也在大豆上建立了基因過量表達(dá)和RNAi技術(shù)轉(zhuǎn)基因體系（易新萍，南農(nóng)博士論文,2006）；通過基因芯片技術(shù)大規(guī)模研究差異表達(dá)基因，由于商品化大豆基因芯片產(chǎn)品（Affymetrix）的問世和推廣而更加容易,應(yīng)用基因芯片，本實(shí)驗(yàn)室也開展了大豆不同器官間的差異表達(dá)基因的研究(黃方等,未發(fā)表資料)；本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊，2005），還研究了種子萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組成的變化（徐曉燕等，2006）。上述分析表明，本項(xiàng)目具有較好的基礎(chǔ)和技術(shù)貯備，研究?jī)?nèi)容和方案是切實(shí)可行的。7、可行性分析目前有關(guān)NAC基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請(qǐng)研究方案及可行性分析（一）突變基因的精細(xì)定位

（1）基于微衛(wèi)星標(biāo)記的初步定位。對(duì)ZClpa2-1基因，我們利用突變種質(zhì)與親緣較遠(yuǎn)的非低植酸常規(guī)品種的雜交后代群體，將其定位在B2連鎖群與Satt416相距4.6cM的位置上。進(jìn)一步將通過擴(kuò)大分離群體單株數(shù)目，利用新的在Satt416區(qū)段有更多多態(tài)性標(biāo)記的定位群體，提高定位精度，獲得更加緊密的微衛(wèi)星標(biāo)記。對(duì)TWlpa1-2基因，將采用與ZClpa2-1基因定位相似的辦法完成初步定位。

（2）新的分子標(biāo)記的開發(fā)與基因精細(xì)定位。開發(fā)新的SNP和CAPS標(biāo)記,利用分離群體分析單株的基因型，從而找到連鎖更加緊密的分子標(biāo)記。（3）定位群體與種子表現(xiàn)型鑒定。本研究將利用以下雜交組合的分離群體進(jìn)行基因定位。TWlpa1-2×浙春3號(hào)（已有組合）、TWlpa1-2×中豆27（已有組合）、TWlpa1-2×浙鮮豆2號(hào)（計(jì)劃使用）。種子的低植酸性狀，采用高無機(jī)磷（HIP）篩選技術(shù)進(jìn)行間接確定（袁鳳杰等，2005）。研究方案及可行性分析（二）低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。利用用于定位的TWlpa1-2和ZClpa2-1遺傳群體，每個(gè)組合培育HIP純合型和野生純合型F5家系各60個(gè)，隨機(jī)取15個(gè)家系混為一組，這樣每個(gè)組合各有三組HIP純合型和野生純合型材料，每個(gè)突變基因各有六組HIP純合型和野生純合型材料。將這六組材料按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分別在杭州春、秋兩季，海南冬春季節(jié)種植。按標(biāo)準(zhǔn)方法考察如下，特性，通過統(tǒng)計(jì)分析，確定兩個(gè)突變基因?qū)@些性狀在不同環(huán)境條件下的影響?？疾斓霓r(nóng)藝性狀包括小區(qū)產(chǎn)量和產(chǎn)量組成因素，如單株莢數(shù)、單株粒數(shù)、單株重和百粒重等。種子收獲后按標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)蛋白含量、油份含量和脂肪酸組成、異黃酮和低聚糖含量進(jìn)行分析。（二）低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。（三）突變基因的聚合和分析從提高種子中營(yíng)養(yǎng)元素的有效性和保護(hù)環(huán)境環(huán)境的角度，植酸含量下降越多效果越明顯；然而植酸在植物的生長(zhǎng)發(fā)育中有著重要的生理功能，因此，研究植酸下降的幅度與植株是否能夠正常生長(zhǎng)的關(guān)系，十分重要。本試驗(yàn)將利用分子標(biāo)記（其中TWlpa1-2采用根據(jù)2-bp缺失設(shè)計(jì)的特異性標(biāo)記，Yuan等2007），在TWlpa1-2和ZClpa2-1兩個(gè)突變種質(zhì)的雜交后代（F3或F4）中選擇兩個(gè)突變基因均為純合的株系。通過對(duì)此類材料植酸含量的分析，探明兩個(gè)突變組合在一起對(duì)植酸合成的影響程度。在此基礎(chǔ)上，通過分析雙突變純合株系材料的農(nóng)藝和品質(zhì)性性狀，確定兩個(gè)突變基因組合使用的育種價(jià)值（方法同2：低植酸突變對(duì)農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響）（三）突變基因的聚合和分析本試驗(yàn)涉及的研究項(xiàng)目，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完成了材料、方法和技術(shù)平臺(tái)的構(gòu)建，因此，完成實(shí)驗(yàn)計(jì)劃應(yīng)該不存在技術(shù)上的困難。基因精細(xì)定位部分，如前所述，大豆分子遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究日新月異，在未來的幾年中會(huì)有更多的信息可以幫助建立起更有效的方法、技術(shù)，采用更加有效的策略完成預(yù)定任務(wù)。我們根據(jù)現(xiàn)有的基因組信息，提出新標(biāo)記開發(fā)和精細(xì)定位的策略，在執(zhí)行過程中應(yīng)該也不會(huì)遇到無法克服的困難，但有可能工作量會(huì)比較大，無法達(dá)到非常精細(xì)的地步。但我們制定的目標(biāo)是獲得遺傳距離小于1cM的標(biāo)記，這是完全可能的，其他研究者也已經(jīng)有類似的報(bào)道。申請(qǐng)者研究小組已有幾十年大豆育種和相關(guān)基礎(chǔ)研究的歷史，擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富，實(shí)力較強(qiáng)的研究隊(duì)伍，浙江大學(xué)作為合作單位，增強(qiáng)了基礎(chǔ)理論研究的力量；建設(shè)于我院的國(guó)家大豆改良分中心實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建成并投入使用，其品質(zhì)分析和分子生物學(xué)研究所需儀器較齊全；同時(shí)大棚、曬場(chǎng)和試驗(yàn)基地等基礎(chǔ)設(shè)施良好，這些都為本項(xiàng)目的開展和實(shí)施提供了保障?？尚行苑治觯罕驹囼?yàn)涉及的研究項(xiàng)目，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完8.研究計(jì)劃及預(yù)期研究進(jìn)展受理項(xiàng)目11）2008.1-2008.12①GmNAC2和GmNAC5蛋白的轉(zhuǎn)錄活性研究；②GmNAC2的亞細(xì)胞定位研究；③基因過量表達(dá)載體和RNAi載體的構(gòu)建與驗(yàn)證；④開展大豆遺傳轉(zhuǎn)化及分子驗(yàn)證，獲得GmNAC2和GmNAC5單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株（T0代）或單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株（T0代）。2）2009.1-2009.12①GmNAC2和GmNAC5在大豆種子不同發(fā)育時(shí)期的原位雜交分析；②獲得GmNAC2和GmNAC5單基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株T1代；③獲得單基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株T1代；④通過雜交獲得雙基因過量表達(dá)或雙基因表達(dá)抑制的轉(zhuǎn)基因植株F1代；⑤利用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡等對(duì)轉(zhuǎn)基因植株種子的發(fā)育過程進(jìn)行分析。規(guī)劃要具體8.研究計(jì)劃及預(yù)期研究進(jìn)展受理項(xiàng)目1規(guī)劃要具體五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件1、已取得的研究成績(jī)（判斷可行性,課題與個(gè)人關(guān)系：博士后的特殊性）近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁(yè)碼等

與本課題無關(guān)不要列（實(shí)事求是）獎(jiǎng)勵(lì)情況須詳細(xì)列出全部受獎(jiǎng)人員、獎(jiǎng)勵(lì)名稱等級(jí)、授獎(jiǎng)年等）五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件1、已取得的研究成績(jī)（判斷可行性,課題近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁(yè)碼等

與本課題無關(guān)不要列（實(shí)事求是）獎(jiǎng)勵(lì)情況須詳細(xì)列出全部受獎(jiǎng)人員、獎(jiǎng)勵(lì)名稱等級(jí)、授獎(jiǎng)年等）近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本受理項(xiàng)目1工作基礎(chǔ)基因克隆與表達(dá)：本實(shí)驗(yàn)室已從大豆中克隆了6個(gè)NAC基因(GmNAC1-GmNAC6)(Mengetal.,2007，inpress)。本研究選擇其中的兩個(gè)與種子發(fā)育相關(guān)的NAC基因GmNAC2和GmNAC5進(jìn)一步分析表明GmNAC基因的表達(dá)可能與種子發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。為明確大豆NAC蛋白是否定位于核中，我們構(gòu)建了GmNAC5與GFP基因融合的載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GmNAC5是定位在細(xì)胞核（如下圖3）。轉(zhuǎn)基因大豆技術(shù)體系：轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本項(xiàng)目實(shí)施的重要環(huán)節(jié)，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交驗(yàn)證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率（Yi&Yu,2006）。2、與項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累受理項(xiàng)目12、與項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累基因芯片分析技術(shù)：我們利用大豆寡聚核苷酸芯片（Affymetrix）研究了大豆不同組織的轉(zhuǎn)錄組，已經(jīng)鑒定了221個(gè)大豆花特異表達(dá)基因，并通過Real-timePCR技術(shù)進(jìn)行了芯片結(jié)果的驗(yàn)證（黃方等，未發(fā)表資料）；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：我們已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的變化規(guī)律（鄭蕊,2005），累積了較好的蛋白組分析技術(shù)。上述研究工作基礎(chǔ)為本項(xiàng)目的順利實(shí)施提供了材料和技術(shù)保證。選題基礎(chǔ)研究選準(zhǔn)科學(xué)問題-課件受理項(xiàng)目21、采用我國(guó)不同的大豆種質(zhì)資源，通過物理誘變的方法，篩選到了2份植酸突變種質(zhì)；經(jīng)過5-6個(gè)世代的選育，其目標(biāo)性狀穩(wěn)定遺傳，農(nóng)藝性狀趨于穩(wěn)定。2、遺傳研究表明：2份突變均為隱性單基因所控制；等位性鑒定實(shí)驗(yàn)表明，2個(gè)突變基因非等位。獲得2份低植酸突變體明確低植酸突變由隱性單基因控制提供相關(guān)的數(shù)據(jù)受理項(xiàng)目2獲得2份低植酸突變體明確低植酸突變由隱性單基因控制受理項(xiàng)目23、磷素含量（植酸鹽、低價(jià)肌醇磷酸鹽、總磷和無機(jī)磷）分析表明，突變種質(zhì)中植酸含量顯著下降，達(dá)50％以上，無機(jī)磷大幅上升；突變種質(zhì)ZClpa2-1中低價(jià)肌醇磷酸鹽含量顯著上升，這在大豆低植酸突變種質(zhì)中是一個(gè)新的表現(xiàn)型。突變種質(zhì)中磷素組分發(fā)生的改變，不受環(huán)境條件的影響（以上測(cè)定在德國(guó)慕尼黑大學(xué)分析測(cè)試中心進(jìn)行）。4、對(duì)突變種質(zhì)ZClpa2-1進(jìn)行了基因定位，發(fā)現(xiàn)其突變發(fā)生是一個(gè)新的基因位點(diǎn)。通過的測(cè)序和連鎖分析，發(fā)現(xiàn)TWlpa1-2突變由肌醇-3-磷酸合成酶基因（MIPS1）第3外顯子的1個(gè)2-bp缺失引起，但在大豆中MIPS基因的4個(gè)拷貝均沒有定位的研究報(bào)道。明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)突變體基因變化受理項(xiàng)目2明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)突變體5、對(duì)突變種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比，突變種質(zhì)ZClpa2-1性狀沒有發(fā)生明顯的改變。而突變種質(zhì)TWlpa1-2的成苗率較低，但與親本相比下降幅度較小。6、品質(zhì)性狀分析：與親本野生型相比，突變種質(zhì)TWlpa1-2中蔗糖含量上升，棉籽糖和水蘇糖含量下降，該性狀也是大豆品質(zhì)改良的目標(biāo)之一。而兩個(gè)突變種質(zhì)中的異黃酮含量均發(fā)生了較大的改變。7、建立了植酸以及相關(guān)磷素組成成分的分析測(cè)試技術(shù)，并就此研究開展了一些國(guó)際交流。8、構(gòu)建了不同突變種質(zhì)的分離群體。不夠具體？9、針對(duì)以上的研究?jī)?nèi)容，已完成博士論文一篇（題目？）。其中部分已整理成研究性論文（題目？），將于2007年在TAG上發(fā)表。5、對(duì)突變種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件3、已具備的實(shí)驗(yàn)條件認(rèn)真填寫設(shè)施和條件并非所有的評(píng)委都了解4、尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑五、項(xiàng)目研究基礎(chǔ)與條件3、已具備的實(shí)驗(yàn)條件六、項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)預(yù)算預(yù)算要切實(shí)可行按批復(fù)預(yù)算進(jìn)行審計(jì)了解政策的有關(guān)規(guī)定價(jià)格合理六、項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)預(yù)算預(yù)算要切實(shí)可行七、專家推薦意見對(duì)申報(bào)項(xiàng)目?jī)?nèi)容的真實(shí)性和知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等提出審核意見，并對(duì)申請(qǐng)者的研究方法和創(chuàng)新能力，對(duì)申報(bào)項(xiàng)目的科學(xué)價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值以及預(yù)期成果提出評(píng)價(jià)意見。七、專家推薦意見對(duì)申報(bào)項(xiàng)目?jī)?nèi)容的真實(shí)性和知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等提出審