PAGEPAGE5分子生物學實驗技術教學大綱課程名稱：分子生物學實驗技術 課程編碼：英文名稱：Molecularbiologyexperiment學 時：36 學分：1.5適用專業(yè)：生物技術、生物工程 課程類別：必課程性質：專業(yè)基礎課先修課程《無機及分析化學《普通生物學《細胞生物學《生物化學》教 材：分子生物學實驗技術 自編講義一、制定本大綱的依據本實驗課程是專為食品科學與生物工程學院生物技術專業(yè)開設的一門專業(yè)實驗技術課，本實驗課在本專業(yè)人才培養(yǎng)中起著及其重要的地位和作用，它是培養(yǎng)學生今后從事教學科研及技術開發(fā)工作最重要的教學實驗環(huán)節(jié)之一，本課程具有知識面寬、實驗性強、精密儀器使用多之特點，其目的是使本科生在參加工作和進入攻讀碩士之前，對已學課程尤其是現代實驗技術手DNA、質粒DNAPCR基因擴增、大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化和DNA重組等方面以及大型精密儀器的操作使用有進一步了解和掌握，提高學生的動手能力，為其今后從事教學、科研工作打下堅實的理論基礎和實際操作能力。針對學生的培養(yǎng)方向，本課程以培養(yǎng)學生掌握生物技術與分子生物學研究的基礎實驗技能為主要目標，力圖最大限度地利用我?，F有的實驗條件，使學生通過本課程的學習和實踐，接觸和掌握從事生物技術研究所必要的實驗手段。通過有限的實驗室實踐，涵蓋分子生物學各個方面的實驗內容，以點帶面，突出重點，促進學生對分子生物學課程學習內容的理解和掌握。二、本實驗課程的具體安排序號實驗項目名稱序號實驗項目名稱內容簡介（50字左右）實驗學時實驗要求實驗類型實驗類別每組人數實驗一 植物染色體DNA的提取和純度鑒定提取染色體DNA，進行純度測定6必修綜合專業(yè)4實驗二實驗二DNA切實驗三實驗四瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化實驗五PCR實驗六DNA堿裂解法提取質粒，并用限制性內切酶酶解DNA，進行瓊脂糖電泳瓊脂糖凝膠電泳分離不同DNA轉化觀察PCR用電泳檢測擴增結果。制備質粒DNA，進行DNA重組子。6必修綜合專業(yè)46必修綜合專業(yè)46必修綜合專業(yè)46必修綜合專業(yè)46必修綜合專業(yè)4三、本實驗課在該課程體系中的地位與作用《分子生物學》是新興的學科，無論對基礎理論研究，還是生產實踐都將產生巨大的影響?！斗肿由飳W實驗技術》是這門學科的重要基礎，是一門實踐性很強的實驗課程。掌握和應用分子生物學實驗技能，是學好這一課程的必要條件。該課程不僅是《分子生物學》教學重要的組成部分，而且在培養(yǎng)學生分析和解決問題的能力，嚴謹的科學態(tài)度和獨立工作的能力方面，有著不可替代的作用。四、學生應達到的實驗能力與標準過學生的獨立實驗設計和實踐，培養(yǎng)學生的創(chuàng)新思維和獨立分析問題、解決問題的能力。本課程實驗技術原理采取以學生自習為主，課堂進行提要式的提示講解和必要的答疑的方式，使學生掌握實驗方法的基本原理和應用范圍。本課程強調實驗技能訓練的重要性，主要課時安排學生實驗，以便盡量提高學時利用率。為了節(jié)省基礎設施投資，提高儀器利用率，本課。在課程成績評定上，強調平時和考試并重，基礎理論和實驗技能相結合的綜合評定方式。五、講授實驗的基本理論與實驗技術知識：實驗一：植物染色體DNA的提取和純度鑒定基本內容：采用SDS裂解細胞膜，使脫氧核糖核蛋白復合物（DNP）解聚，并用苯酚抽提法去除蛋白，從而提取染色體DNA。并對其純度進行鑒定基本要求：掌握提取真核細胞染色體DNA的一種基本方法，學習使用紫外線分光法評估DNA的含量和純度基本儀器設備：臺式高速離心機、塑料離心管、Unico紫外可見分光光度計95102MNaCl1mMEDT、10%SDS70TESS實驗二、質粒DNA的提取、酶切基本內容：培養(yǎng)細菌，利用堿裂解法提取質粒，并用限制性內切酶酶解DNA，進行瓊脂糖電泳?；疽螅和ㄟ^本部分實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒。學習運用瓊脂糖電泳檢測DNA的方法和技術，初步了解限制性內切酶酶解DNA的方法?；緝x器設備：恒溫培養(yǎng)箱、恒溫搖床、臺式離心機、高壓滅菌鍋、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、紫外透射反射儀基本耗材：葡萄糖、三羥甲基氨基甲烷Tri、乙二胺四乙酸、氫氧化鈉、乙酸鉀、冰乙SDSRNA8βEcoRIDNA、硼酸、HindⅢ酶實驗三：瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA基本內容：DNA分子在瓊脂糖凝膠中電泳時有電荷效應和分子篩效應。根據不同相對分子質量的DNA片段電泳速度不一樣的原理，采用瓊脂糖凝膠電泳分離DNA樣品?；疽螅和ㄟ^本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法?；緝x器設備：瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、凝膠成像系統(tǒng)基本耗材：三羥甲基氨基甲烷Tri、硼酸、乙二胺四乙酸EDTDNAmarker5×TBE、凝膠加樣緩沖液實驗四：大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化基本內容：細菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。轉化混合物中的DNA形成抗DNA42收DNA獲得的新的表型（如Ampr等）的選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察細菌生長情況。本實驗從制備感受態(tài)細胞到轉化一天可做完，第二天早晨觀察結果?；疽螅和ㄟ^本實驗，掌握大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化的方法及技術?；緝x器設備：超凈工作臺、低溫離心機、恒溫搖床、恒溫箱、恒溫水浴器DH5αpUC19粒、Eppendorf管、吸頭、小指管、試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等實驗五：PCR基因擴增基本內容：利用PCR技術擴增基因，并用電泳檢測擴增結果。基本要求：通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術?；緝x器設備：PCR熱循環(huán)儀、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、凝膠成像系統(tǒng)4dNTPTaqDNA10×緩沖液（500mmol/l、100mmol/lTris、15mmol/lMgCl0.1%明膠、2吸頭、小指管實驗六：DNA重組基本內容：制備質粒DNA，進行DNA重組，制備感受態(tài)細胞，鑒定重組子?；疽螅和ㄟ^本實驗學會重組DNA連接以及鑒定重組子的方法?；緝x器設備：恒溫搖床、恒溫水浴器、恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、低溫離心機基本耗材：胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、氨芐青霉素、氯化鈣、二甲基甲酰胺EcoRI酶、TDNA連接酶、DH5αλDNA、pUC19質粒、培養(yǎng)皿、接種針、玻璃涂棒、試管、酒43mol/lKA（pH5.X-ga、IPTG六、實驗的考核與成績評定：考核內容：六大實驗的完成情況，實驗報告，學生的動手能力和平時實驗考察。考核方式：通過學生的平時成績進行考核。平時成績包括實驗態(tài)度、實驗室常識40%成績?？己艘螅耗芰ΑＦ?、主要參考書《分子生物學實驗指導《生物化學與分子生物學實驗技術《分