酶Km值的測(cè)定1酶的概念由活細(xì)胞產(chǎn)生的、具有催化功能的生物大分子。2酶與醫(yī)學(xué)健康的關(guān)系3

又稱先天性代謝缺陷?。?/p>

----編碼酶蛋白的基因發(fā)生突變導(dǎo)致合成的酶結(jié)構(gòu)或數(shù)量改變所引發(fā)的機(jī)體代謝紊亂。遺傳性酶病4遺傳性酶病發(fā)病機(jī)制控制某一酶合成的基因發(fā)生突變，或者控制其結(jié)構(gòu)基因的調(diào)控基因發(fā)生突變，引起酶在質(zhì)或者量上發(fā)生改變，其催化作用也隨之發(fā)生改變，從而間接導(dǎo)致代謝紊亂，引起機(jī)體代謝障礙。5遺傳性酶缺陷引起的物質(zhì)代謝途徑受阻示意圖6（一）苯丙酮尿癥(PKU)我國發(fā)病率1/165000病因：苯丙氨酸羥化酶（PAH)基因突變導(dǎo)致PAH缺乏，使苯丙氨酸不能合成酪氨酸?！立?經(jīng)典型苯丙酮尿癥(PKUI)苯丙氨酸對(duì)中樞神經(jīng)毒性作用抑制大腦正常發(fā)育酪氨酸多巴神經(jīng)功能智力低下黑色素毛發(fā)皮膚變淺×苯丙酮酸8基因定位：PAH基因：12q24.1突變類型廣泛，呈現(xiàn)明顯的遺傳異質(zhì)性（一）苯丙酮尿癥(PKU)9臨床表現(xiàn)：出生時(shí)正常，進(jìn)奶以后，一般在3-6個(gè)月時(shí)，即可出現(xiàn)癥狀，1歲時(shí)癥狀明顯。外貌因黑色素足，在生后數(shù)月毛發(fā)皮肝和虹膜色澤變淺，皮膚干燥，有的伴有濕疹，由于尿和汗液中排出苯乙酸，呈特殊的鼠尿臭味神經(jīng)系統(tǒng)癥狀早期可有神經(jīng)行為異常，如興奮不安，多動(dòng)或嗜睡，精神萎靡.（一）苯丙酮尿癥(PKU)10診斷本病為少數(shù)可治性遺傳性代謝病之一，上述癥狀經(jīng)飲食控制治療后可逆轉(zhuǎn)，但智能發(fā)育落后難以轉(zhuǎn)變，應(yīng)力求早期診斷治療，：以避免神經(jīng)系統(tǒng)的不可逆損傷。由于患兒早期癥狀不典型，必須借創(chuàng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。11

1、新生兒期篩查

新生兒喂奶3日后，采集足根末梢血，吸收再生厚濾紙上，晾干后郵寄到篩查中心，采用Guthrie細(xì)菌生長抑制試驗(yàn)半定量測(cè)定，其原理是苯丙氨酸能促進(jìn)已被抑制的枯草桿菌重新生長，以生長圈的范圍測(cè)定血中苯丙氨酸的含量。

122、尿三氯化鐵試驗(yàn)

用于較大嬰兒和兒童的篩查。將三氯化鐵滴入尿液，如立即出現(xiàn)綠色反應(yīng)，則為陽性，表明尿中苯丙氨酸濃度增高。3、血漿氨基酸分析和尿液有機(jī)酸分析

可為本病提供生化診斷依據(jù)，同時(shí)，也可鑒別其他的氨基酸、有機(jī)酸代謝病。

4、尿蝶呤分析

應(yīng)用高壓液相層析（HPLC）測(cè)定尿液中新蝶呤和生物蝶呤的含量，鑒別各類PKU。

13診斷酶學(xué)診斷PAH僅存在于肝細(xì)胞，需經(jīng)肝活檢測(cè)定，不適用于臨床診斷。其他3種酶的活性可采用外周血中紅、白細(xì)胞或皮膚成纖維細(xì)胞測(cè)定。DNA分析該技術(shù)近年來廣泛用于PKU診斷、雜合子檢出和產(chǎn)前診斷。但由于基因的多態(tài)性，分析結(jié)果務(wù)須謹(jǐn)慎。

14治療診斷一旦明確，應(yīng)盡早給予積極治療，主要是飲食療法。開始治療的年齡愈小，效果愈好。低苯丙氨酸飲食主要適用于典型PKU以及血苯丙氨酸持續(xù)高于1.22mmol/L的患者。由于苯丙氨酸是合成蛋白質(zhì)的必需氨基酸，完全缺乏時(shí)亦可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損害，因此對(duì)嬰兒可喂給特制的低苯丙氨酸奶粉，到幼兒期添加輔食時(shí)應(yīng)以淀粉類、蔬菜、水果等低蛋白食物為主。

15預(yù)防避免近親結(jié)婚。開展新生兒篩查，以早期發(fā)現(xiàn)，盡早治療。對(duì)有本病家族史的孕婦必須采DNA分析或檢測(cè)羊水中蝶吟等方法對(duì)其胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。16酶的應(yīng)用用酶進(jìn)行疾病的診斷用酶進(jìn)行疾病的預(yù)防和治療用酶制造各種藥物生物工程091黃晨子17根據(jù)體內(nèi)酶活性的變化診斷疾病酸性磷酸酶酸性磷酸酶是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解生成無機(jī)磷酸的水解酶。人血清酸性磷酸酶的最適PH為5~6，最適作用溫度37?С。正常人血清中的酸性磷酸酶來源于骨、肝、腎、脾、胰等組織。前列腺癌患者以及出現(xiàn)肝炎、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、紅細(xì)胞病變等疾病時(shí)，血清中酸性磷酸酶的活性都會(huì)升高。18根據(jù)體內(nèi)酶活性的變化診斷疾病堿性磷酸酶堿性磷酸酶在堿性條件下催化磷酸單酯水解生成無機(jī)磷酸的水解酶。人血清堿性磷酸酶的最適PH為9.5~10，最適作用溫度37?С。堿性磷酸酶在體內(nèi)分布廣泛，特別是骨骼組織、牙齒、腎臟、和小腸中含量較高等組織。主要由造骨細(xì)胞產(chǎn)生，對(duì)于佝僂病、骨骼軟化癥、骨瘤、骨骼廣泛性轉(zhuǎn)移癌等骨骼疾病患者，以及甲狀旁腺功能亢進(jìn)、黃疸型肝炎疾病患者，血清中堿性磷酸酶的活性都會(huì)升高。19用酶進(jìn)行疾病的預(yù)防和治療尿激酶、鏈激酶：溶血栓劑，治療血栓病。酪氨酸酶生產(chǎn)（神經(jīng)遞質(zhì)），多用于治療帕金森綜合癥。溶菌酶（黏多糖溶解酶）：破壞革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁而殺死細(xì)菌。抗菌、止血消腫、加快傷口愈合，也用于治療鼻炎、咽喉炎、口腔潰瘍等。20用酶制造各種藥物核苷磷酸化酶制造阿糖腺苷無色桿菌蛋白酶制造人胰島素多核苷酸磷酸化酶生產(chǎn)聚肌胞青霉素?；钢圃彀牒铣煽股卅隆野彼崦钢圃於喟?1酶Km值的測(cè)定2223242526堿性磷酸酶酚在堿性條件下與酚試劑（酚試劑同時(shí)也是酶反應(yīng)的終止液）反應(yīng)，其光吸收與磷酸底物濃度成正比。

故以1/A取代1/v作為縱坐標(biāo)作圖。27試劑(ml)1234560.5mM磷酸苯二鈉0.10.20.30.40.50.5蒸餾水0.40.30.20.1--堿性緩沖液0.250.250.250.250.250.25混勻后，370C水浴5min堿性磷酸酶液0.10.10.10.10.1-冰上混勻后，370C水浴15min（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)）酚試劑0.150.150.150.150.150.15冰上堿性磷酸酶液-----0.110％Na2CO30.30.30.30.30.30.3混勻后，37℃水浴15min，以第6管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，在660nm波長處進(jìn)行比色，讀取各管A值。28管號(hào)A6601/A660[S]1/[S]123456處理結(jié)果以1/A660對(duì)1/[s]按Lineweaver-Burk作圖法作圖，求出堿性磷酸酶的Km29分光光度計(jì)的使用30分光光度計(jì)的使用分光光度法則是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比。31有效數(shù)字的處理實(shí)驗(yàn)重復(fù)有效數(shù)字32標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（standardcurve）是指通過測(cè)定一系列已知組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的某理化性質(zhì)，而得到的性質(zhì)的數(shù)值曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的物理/化學(xué)屬性跟儀器響應(yīng)之間的函數(shù)關(guān)系。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的是推導(dǎo)待測(cè)物質(zhì)的理化屬性。在分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。3334標(biāo)準(zhǔn)曲線的要素變量可信度有效范圍35變量標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)(X)表示可以精確測(cè)量的變量(如標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度)，稱為普通變量。縱坐標(biāo)(Y)表示儀器的響應(yīng)值(也稱測(cè)量值，如吸光度、電極電位等)，稱為隨機(jī)變量。

36可信度37有效范圍（線性范圍）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的物理/化學(xué)屬性有一定的有效范圍。儀器存在一定的相應(yīng)范圍。因此標(biāo)準(zhǔn)曲線存在一定的有效范圍38標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作圖表名稱坐標(biāo)字體大小公式、相關(guān)系數(shù)39實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫實(shí)驗(yàn)方法與步驟及以上略實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果的呈現(xiàn)要清晰、規(guī)范，計(jì)算過程清楚，作圖要規(guī)范。分析討論 簡單分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果 討論實(shí)驗(yàn)方法（如測(cè)定生物分子含量的方法、標(biāo)準(zhǔn)曲線的原理與應(yīng)用以及數(shù)據(jù)處理等）。實(shí)