實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌檢驗(yàn)的基本技術(shù)和方法臨床微生物學(xué)和微生物檢驗(yàn)

教員：顧江

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內(nèi)容提要實(shí)驗(yàn)室的生物安全革蘭氏染色細(xì)菌的基本技術(shù)實(shí)驗(yàn)室生物安全避免病原微生物對(duì)工作人員的危害避免病原微生物對(duì)環(huán)境的污染保證被試驗(yàn)因子免受污染強(qiáng)化工作和管理人員生物安全意識(shí)。掌握規(guī)范的微生物操作技術(shù)和方法。安全措施實(shí)驗(yàn)課總體安排細(xì)菌檢驗(yàn)的基本技術(shù)和方法球菌的培養(yǎng)和鑒定（綜合）腸桿菌的培養(yǎng)和鑒定（綜合）抗菌藥物敏感性試驗(yàn)厭氧菌的培養(yǎng)和鑒定分枝桿菌屬的鑒定臨床真菌的培養(yǎng)和鑒定臨床常見病毒的檢測病原菌分子診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（設(shè)計(jì)）1.細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查2.細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)本次課實(shí)驗(yàn)內(nèi)容細(xì)菌檢驗(yàn)的基本技術(shù)和方法教學(xué)目標(biāo)與要求了解：細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查的常用方法常用培養(yǎng)基的種類和用途理解：細(xì)菌革蘭染色原理

掌握：1.細(xì)菌涂片的制作方法和革蘭染色操作方法

2.細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)難點(diǎn)重點(diǎn)標(biāo)本葡萄球菌、大腸桿菌試劑革蘭染色液、生理鹽水其他培養(yǎng)基（普通瓊脂平板、半固體、液體培養(yǎng)基）、接種環(huán)、接種針、載玻片、酒精燈、顯微鏡等實(shí)驗(yàn)器材細(xì)菌檢驗(yàn)基本技術(shù)革蘭染色法【原理】結(jié)晶紫1min盧戈碘1min95%乙醇30s稀釋復(fù)紅30s革蘭陽性菌革蘭陰性菌細(xì)胞壁等電點(diǎn)致密脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入疏松脂質(zhì)含量多，乙醇易滲入pI2～3，帶負(fù)電荷較多pI4～5，帶負(fù)電荷較少核糖核酸鎂鹽數(shù)量多，結(jié)合力強(qiáng)數(shù)量少，結(jié)合力弱【結(jié)果】染色性細(xì)菌形態(tài)排列方式革蘭染色法陽紫陰紅初步鑒定細(xì)菌初步指導(dǎo)治療【實(shí)驗(yàn)意義】【影響因素】1)操作因素：涂片厚??；脫色時(shí)間；2)染液因素：應(yīng)防止染液蒸發(fā)而改變濃度，涂片積水過多會(huì)改變?nèi)疽簼舛龋?）細(xì)菌因素：菌齡過大，假陰性革蘭染色法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容二細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)根據(jù)所用培養(yǎng)基性質(zhì)和培養(yǎng)目的采用不同方法普通瓊脂平板半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基分離細(xì)菌觀察細(xì)菌動(dòng)力保存菌種細(xì)菌增菌生化鑒定接種方法平板劃線分離法半固體穿刺法液體接種法旋轉(zhuǎn)約60分離單個(gè)菌落接種方法37C培養(yǎng)18-24h分區(qū)劃線法1旋轉(zhuǎn)約60Back平板劃線分離法用于肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。接種方法液體接種法3Back【器材和試劑】菌種：大腸桿菌、葡萄球菌培養(yǎng)基：普通瓊脂平板半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基其他：接種環(huán)、接種針

【操作內(nèi)容】

將細(xì)菌接種到普通瓊脂平板，半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中（每人一套培養(yǎng)基）接種方法【分離接種】將兩株細(xì)菌分別接種至不同培養(yǎng)基普通瓊脂平板半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基平板劃線分離法（分區(qū)劃線法）半固體穿刺法液體接種法學(xué)生操作12337C培養(yǎng)18-24h