液相色譜柱安裝與使用

目錄一、液相色譜柱的安裝1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)2、色譜柱的安裝二、液相色譜柱的使用1、樣品的前處理2、流動(dòng)相的配制3、色譜柱的平衡4、流動(dòng)相流速的選擇

5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則三、液相色譜柱的維護(hù)液相色譜柱安裝與使用1色譜柱在高效液相色譜儀中的作用和峰形產(chǎn)生原理

色譜柱高壓泵檢測(cè)器色譜工作站進(jìn)樣器液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。色譜柱在高效液相色譜儀中的作用和峰形產(chǎn)生原理

色譜柱高壓泵2液相色譜柱安裝與使用一、液相色譜柱的安裝：1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：（1）空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓環(huán)用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸)。

液相色譜柱安裝與使用一、液相色譜柱的安裝：3液相色譜柱安裝與使用在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑，以避免腐蝕。

液相色譜柱安裝與使用在兩端柱接頭內(nèi)，柱管4液相色譜柱安裝與使用（2）柱填料：液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類(lèi)是依據(jù)填料類(lèi)型而定。

正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類(lèi)正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。

反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分。

常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間。

液相色譜柱安裝與使用（2）柱填料：5液相色譜柱安裝與使用2、色譜柱的安裝：（1）拆開(kāi)柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類(lèi)型、尺寸、出廠(chǎng)日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

液相色譜柱安裝與使用2、色譜柱的安裝：6液相色譜柱安裝與使用（3）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。液相色譜柱安裝與使用（3）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱7液相色譜柱安裝與使用二、液相色譜柱的使用：

色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

液相色譜柱安裝與使用二、液相色譜柱的使用：

色譜8液相色譜柱安裝與使用1、樣品的前處理：（1）最好使用流動(dòng)相溶解樣品。（2）使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。（3）使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。液相色譜柱安裝與使用1、樣品的前處理：9液相色譜柱安裝與使用2、流動(dòng)相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：（1）流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。（2）流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。（3）流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

液相色譜柱安裝與使用2、流動(dòng)相的配制：

液相色譜10液相色譜柱安裝與使用（4）流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。（5）流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。（6）在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。液相色譜柱安裝與使用（4）流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器11液相色譜柱安裝與使用3、平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠(chǎng)測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10~20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠(chǎng)測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡液相色譜柱安裝與使用3、平衡色譜柱12液相色譜柱安裝與使用新色譜柱的平衡方法：（1）首先用0.2ml/min的流速將色譜柱平衡過(guò)夜，然后將流速升高到1.0ml/min沖洗30分鐘，以便將色譜柱的填料充分平衡至最佳狀態(tài)，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。（2）平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高。（3）用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(xiàn)(緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡)。

液相色譜柱安裝與使用新色譜柱的平衡方法：13液相色譜柱安裝與使用4、流動(dòng)相流速的選擇：

因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。液相色譜柱安裝與使用4、流動(dòng)相流速的選擇：

因14液相色譜柱安裝與使用5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則：（1）由強(qiáng)到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn)，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

（2）三倍規(guī)則：每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中，注意觀察各個(gè)峰的分離情況。

（3）粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。先用100%的有機(jī)溶劑，再降下來(lái)。因?yàn)橛行┓蛛x96%即可分離。液相色譜柱安裝與使用5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則：15液相色譜柱安裝與使用6、常用洗脫劑極性大小排列表（由小到大）：

石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<二氯甲烷<三氯甲烷<乙醚<甲乙酮<二氧六環(huán)<乙酸乙酯<乙酸甲酯<正丁醇<丙酮<正丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<有機(jī)酸液相色譜柱安裝與使用6、常用洗脫劑極性大小排列表（由小到大）16液相色譜柱安裝與使用7、溶劑互溶表液相色譜柱安裝與使用7、溶劑互溶表17液相色譜柱安裝與使用三、色譜柱的維護(hù)和貯存：

1.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）；

2.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2~7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍；

3.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化；

4.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理；

5.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈，并保存在乙腈中；

6.壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。

液相色譜柱安裝與使用三、色譜柱的維護(hù)和貯存：

1.使用預(yù)柱18液相色譜柱安裝與使用7.色譜柱貯存方法：

(1)．短期貯存：先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗)，再把柱的兩頭用密封螺絲密封嚴(yán)。

(2)．長(zhǎng)期貯存：以色譜柱使用說(shuō)明書(shū)中指定的溶劑充滿(mǎn)色譜柱，再把柱兩頭用密封螺絲封嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)造成柱填料干縮，導(dǎo)致柱效嚴(yán)重降低。

(3)．色譜柱應(yīng)貯存在4℃以上的室溫下，如置于0℃以下環(huán)境里，柱內(nèi)會(huì)結(jié)冰，將導(dǎo)致柱效降低。

(4)．警示：柱子不能貯存在水或水性溶劑中，否則會(huì)因柱內(nèi)微生物滋生而導(dǎo)致?lián)p壞。

液相色譜柱安裝與使用7.色譜柱貯存方法：

(119液相色譜柱安裝與使用8.色譜柱的再生：(1)．色譜柱使用一段時(shí)間后柱效會(huì)下降，這時(shí)可考慮對(duì)色譜柱進(jìn)行再生。進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵，而使用一個(gè)廉價(jià)的泵。(2)．在清洗開(kāi)始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次柱效和容量因子等，以比較色譜柱性能的改善，確定清洗的效果。

(3)．所用沖洗溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40~60倍。確保色譜柱中沒(méi)有樣品和緩沖溶液，清洗前所用的溶劑應(yīng)與最初清洗時(shí)所用的溶劑相溶。應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測(cè)試所用的流動(dòng)相與色譜柱中最后的溶劑相溶。

(4)．a(chǎn)）正相填料：用四氫呋喃沖洗、用甲醇沖洗、用四氫呋喃沖洗、二氯甲烷沖洗、用無(wú)苯正己烷沖洗。

b）反相填料：用HPLC級(jí)的水沖洗、沖洗時(shí)進(jìn)四等份的200ul的二甲亞楓（DMSO）、用甲醇沖洗、用氯仿沖洗、用甲醇沖洗。

c）陰離子交換填料：用HPLC級(jí)的水沖洗、用甲醇沖洗、用氯仿沖洗。

d）陽(yáng)離子交換填料：用HPLC級(jí)的水沖洗，在沖洗過(guò)程中進(jìn)四等份的200ul的二甲亞楓（DMSO）、用四氫呋喃沖洗。

e）蛋白質(zhì)凝膠過(guò)濾填料：去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染物有二種清洗與再生方法。弱保留蛋白質(zhì)：用30mol/lpH3.0的磷酸鹽緩沖液沖洗；強(qiáng)保留蛋白質(zhì)：用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60分鐘。液相色譜柱安裝與使用8.色譜柱的再生：20謝謝觀看！第八版第七版第六版第五版第四版第三版WSY18@56.com2006.9.5第二版WSY18@56.com2006.8.8第一版WSY18@56.com2006.7.2版本改編者日期備注謝謝觀看！第八版第七版第六版第五版第四版第三版WSY18@521液相色譜柱安裝與使用

目錄一、液相色譜柱的安裝1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)2、色譜柱的安裝二、液相色譜柱的使用1、樣品的前處理2、流動(dòng)相的配制3、色譜柱的平衡4、流動(dòng)相流速的選擇

5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則三、液相色譜柱的維護(hù)液相色譜柱安裝與使用22色譜柱在高效液相色譜儀中的作用和峰形產(chǎn)生原理

色譜柱高壓泵檢測(cè)器色譜工作站進(jìn)樣器液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。色譜柱在高效液相色譜儀中的作用和峰形產(chǎn)生原理

色譜柱高壓泵23液相色譜柱安裝與使用一、液相色譜柱的安裝：1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：（1）空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓環(huán)用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸)。

液相色譜柱安裝與使用一、液相色譜柱的安裝：24液相色譜柱安裝與使用在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑，以避免腐蝕。

液相色譜柱安裝與使用在兩端柱接頭內(nèi)，柱管25液相色譜柱安裝與使用（2）柱填料：液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類(lèi)是依據(jù)填料類(lèi)型而定。

正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類(lèi)正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。

反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分。

常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間。

液相色譜柱安裝與使用（2）柱填料：26液相色譜柱安裝與使用2、色譜柱的安裝：（1）拆開(kāi)柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類(lèi)型、尺寸、出廠(chǎng)日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

液相色譜柱安裝與使用2、色譜柱的安裝：27液相色譜柱安裝與使用（3）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。液相色譜柱安裝與使用（3）按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱28液相色譜柱安裝與使用二、液相色譜柱的使用：

色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

液相色譜柱安裝與使用二、液相色譜柱的使用：

色譜29液相色譜柱安裝與使用1、樣品的前處理：（1）最好使用流動(dòng)相溶解樣品。（2）使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。（3）使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。液相色譜柱安裝與使用1、樣品的前處理：30液相色譜柱安裝與使用2、流動(dòng)相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：（1）流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。（2）流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。（3）流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

液相色譜柱安裝與使用2、流動(dòng)相的配制：

液相色譜31液相色譜柱安裝與使用（4）流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。（5）流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。（6）在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。液相色譜柱安裝與使用（4）流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器32液相色譜柱安裝與使用3、平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠(chǎng)測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10~20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠(chǎng)測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡液相色譜柱安裝與使用3、平衡色譜柱33液相色譜柱安裝與使用新色譜柱的平衡方法：（1）首先用0.2ml/min的流速將色譜柱平衡過(guò)夜，然后將流速升高到1.0ml/min沖洗30分鐘，以便將色譜柱的填料充分平衡至最佳狀態(tài)，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。（2）平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高。（3）用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(xiàn)(緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡)。

液相色譜柱安裝與使用新色譜柱的平衡方法：34液相色譜柱安裝與使用4、流動(dòng)相流速的選擇：

因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。液相色譜柱安裝與使用4、流動(dòng)相流速的選擇：

因35液相色譜柱安裝與使用5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則：（1）由強(qiáng)到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn)，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

（2）三倍規(guī)則：每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中，注意觀察各個(gè)峰的分離情況。

（3）粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。先用100%的有機(jī)溶劑，再降下來(lái)。因?yàn)橛行┓蛛x96%即可分離。液相色譜柱安裝與使用5、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相調(diào)整的三原則：36液相色譜柱安裝與使用6、常用洗脫劑極性大小排列表（由小到大）：

石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<二氯甲烷<三氯甲烷<乙醚<甲乙酮<二氧六環(huán)<乙酸乙酯<乙酸甲酯<正丁醇<丙酮<正丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<有機(jī)酸液相色譜柱安裝與使用6、常用洗脫劑極性大小排列表（由小到大）37液相色譜柱安裝與使用7、溶劑互溶表液相色譜柱安裝與使用7、溶劑互溶表38液相色譜柱安裝與使用三、色譜柱的維護(hù)和貯存：

1.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）；

2.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2~7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍；

3.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化；

4.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理；

5.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈，并保存在乙腈中；

6.壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。

液相色譜柱安裝與使用三、色譜柱的維護(hù)和貯存：

1.使用預(yù)柱39液相色譜柱安裝與使用7.色譜柱貯存方法：

(1)．短期貯存：先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗)，再把柱的兩頭用密封螺