克隆載體表達(dá)載體整理課件

定義：可攜帶插入的外源DNA片段并可轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中大量擴(kuò)增的DNA分子。該分子中含有能夠在受體細(xì)胞中自主復(fù)制的序列和篩選標(biāo)記，常用于外源基因的克隆，如噬菌體或質(zhì)粒。通常采用從病毒、質(zhì)粒或高等生物細(xì)胞中獲取的DNA作為克隆載體，在載體上插入合適大小的外源DNA片段，并注意不能破壞載體的自我復(fù)制性質(zhì)。將重組后的載體引入到宿主細(xì)胞中，并在宿主細(xì)胞中大量繁殖。克隆載體整理課件克隆載體必須具備什么條件?

具有使外源DNA片段插入的限制性酶識別位點(diǎn)（外源性DNA能組入）能將外源DNA導(dǎo)入到受體細(xì)胞并進(jìn)行自我復(fù)制（能繁殖）必須具有選擇標(biāo)記（能篩選出來）A

CB

整理課件常用的克隆載體質(zhì)粒載體

病毒載體(噬菌體載體)混合載體（由以上三類中的兩種以上相互組合或與其他基因組DNA組合而成）整理課件高質(zhì)量的克隆載體所必須具備的一些特征：拷貝數(shù)不能太低，以保證轉(zhuǎn)化效率應(yīng)該有兩個以上用來克隆外源DNA的單一的限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)；應(yīng)該有一個或多個易于檢出的選擇標(biāo)記基因123整理課件專用載體

染色體定位整合載體

啟動子探針載體

誘導(dǎo)型表達(dá)載體

組織特異性表達(dá)載體

反義表達(dá)載體整理課件

定義：在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。包括原核表達(dá)載體和真核表達(dá)載體，可以是質(zhì)粒、噬菌體或病毒等。典型的表達(dá)載體帶有能使基因表達(dá)的調(diào)控序列，并在適當(dāng)位置有可插入外源基因的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。表達(dá)載體整理課件常用細(xì)菌質(zhì)粒進(jìn)行構(gòu)建，構(gòu)建過程中運(yùn)用限制性核酸內(nèi)切酶切割出與目的基因相合的末端（多為黏性末端，也有平末端），采用DNA連接酶連接，導(dǎo)入生物體實(shí)現(xiàn)表達(dá)。標(biāo)記基因可幫助識別質(zhì)粒并檢測是否成功整合到染色體DNA中。

表達(dá)載體四部分：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因

整理課件表達(dá)載體必須具備的條件：

1.載體能夠獨(dú)立的復(fù)制；2.應(yīng)具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；3.應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動子，能被RNA聚合酶所識別；4.應(yīng)具有阻遏子，使啟動子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄；5.應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子，以使RNA聚合酶集中力量轉(zhuǎn)錄克隆的外源基因，同時使很強(qiáng)的終止子所產(chǎn)生的mRNA較為穩(wěn)定；