PAGE3PAGE1目的：為檢驗人工牛黃規(guī)定一個標(biāo)準(zhǔn)的程序，以便獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗數(shù)據(jù)。范圍：適用于人工牛黃的檢驗。職責(zé)：檢驗室主任、檢驗員。規(guī)程：1 性狀：本品為黃色疏松的粉末；味苦，微甘。2鑒別：2.1試劑與儀器2.1.1硫酸2.1.2硝酸2.1.3甲醇2.2.4膽酸豬去氧膽酸對照品2.1.5異辛烷-正丁醚-冰醋酸(8:5:5)2.2.610%磷鉬酸的乙醇溶液2.1.7牛膽粉2.1.8甲苯-冰醋酸-水(7.5:10:0.3)2.1.9硅膠G薄層板2.1.10試管2.1.11容量瓶(10ml)2.1.12微量進(jìn)樣器2.1.13層析缸2.1.14電子天平（萬分之一克）2.1.15恒溫干燥箱2.2項目與步驟2.2.1取本品適量，分為二份，一份加硫酸顯污綠色；另一份加硝酸顯紅色為符合規(guī)定。2.2.2精密稱取本品0.1g，置10ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取膽酸、去氧膽酸對照品各0.01g，置10ml容量瓶中，各加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。照薄層色諳法（SOP-QC-304-00）試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-正丁醚-冰醋酸(8:5:5)為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸的乙醇溶液，于105℃烘約5分鐘使顯色。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)為符合規(guī)定。 2.2.3精密稱取本品0.1g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試 品溶液。另精密稱取牛膽粉對照品0.02g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度， 搖勻，作為對照品溶液。照薄層色譜法（SOP-QC-304-00）試驗，吸取上述供試品溶液和 對照品溶液各8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠板G薄層板上，以甲苯-冰醋酸-水(7.5：10：0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸的乙醇溶液，于105℃烘烤約15分鐘。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)為符合規(guī)定。3檢查3.1試劑與儀器3.1.1甲醇3.1.2異辛烷-正丁醚-冰醋酸（8:5:5）3.1.3層析缸3.1.4水分測定儀3.1.5硅膠G薄層板3.1.6微量進(jìn)樣器3.2項目與步驟3.2.1水分：精密稱取本品約0.1g，按水分測定法（SOP-QC-326-00）測定，本品的水分不得過5.0%為符合規(guī)定。3.2.2豬去氧膽酸的限量檢查：對照品溶液的配制：精密稱取豬去氧膽酸0.01g，置10ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的配制：精密稱取供試品0.1g，用適量甲醇轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，密塞；振搖使樣品溶解，放置，取上清液作為供試品溶液。檢查法：照薄層色譜法（SOP-QC-304-00）試驗，精密量取供試品溶液4μl及對照品溶液1.5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-正丁醚-冰醋酸（8:5:5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸的乙醇溶液，于105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，豬去氧膽酸斑點(diǎn)的顏色應(yīng)深于或等于對照品色譜為符合規(guī)定。4含量測定4.1膽酸4.1.1試劑與儀器4.1.1.160%冰醋酸4.1.1.2新配制的糠醛水溶液（1-100）4.1.1.3硫酸溶液4.1.1.4帶塞試管4.1.1.5容量瓶（50ml）4.1.1.6濾紙漏斗4.1.1.7漏斗架4.1.1.8刻度移液管4.1.1.9紫外分光光度計4.2檢驗步驟4.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：取在105℃干燥至恒重的膽酸對照品12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含膽酸0.5mg）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.6、0.8與1.0ml，分別置于帶塞試管中，均用60%冰醋酸溶液稀釋成1.0ml，加新配的糠醛水溶液(1→100)各1.0ml，在冰浴中放置5分鐘，加硫酸溶液(取硫酸50ml與蒸餾水65ml混合制成)13ml，混勻，在70℃水浴中加熱10分鐘，迅速移至冰浴中，放置2分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照分光光度法(SOP-QC-301-00)測定，在605nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.2.2測定法取本品約0.1g，精密稱定，加60%冰醋酸溶液數(shù)ml，充分研磨，移入50ml量瓶中，殘渣再加60%冰醋酸溶液，研磨后，全部移入量瓶中，再用60%冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液各1ml，分別置于甲、乙兩個帶塞試管中，于甲管中加新配制的糠醛水溶液1ml，乙管加水1ml作空白，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制項下的方法自“在冰浴中放置5分鐘”起，依法制定吸收度。按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量，即得。本品膽酸含量按干燥品計，不得少于13.0%為符合規(guī)定。4.3膽紅素4.3.1試劑與儀器4.3.1.1氯仿、膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品4.3.1.2棕色容量瓶(100ml,50ml)4.3.1.3刻度移液管4.3.1.4紫外分光光度計4.4檢驗步驟4.4.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：取膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品約0.01g，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿30ml使溶解，在60℃水浴中振搖片刻，使充分溶解，取出，用水冷卻后，放至室溫，加氯仿稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液(0.1mg/ml)；精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10.0ml，置50ml棕色量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，即為標(biāo)準(zhǔn)溶液(約20μg/ml)。4.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取膽紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分別置于25ml棕色量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，即得每ml含3.2、4.0、4.8、5.6、6.4μg膽紅素的標(biāo)準(zhǔn)液，照分光光度法(SOP-QC-301-00)測定，在453nm處測定吸收度。4.4.3測定法取樣品0.08g，精密稱定，加氯仿30ml轉(zhuǎn)移至100ml棕色量瓶中，置60℃水