會計學1ceRNA機制及研究方案介紹ceRNA的基本特征ceRNA的研究現(xiàn)狀ceRNA的方案設計ceRNA的驗證實驗設計實例解讀分享目錄2第1頁/共30頁miRNA作用方式3第2頁/共30頁RNA和miRNA作用方式4RNA——miRNA：1對多；多對1；多對多第3頁/共30頁ceRNA的邏輯關(guān)系5ceRNA假說（competitiveendogenousRNA，競爭性內(nèi)源RNA）:共享miRNA結(jié)合位點的轉(zhuǎn)錄本會競爭性結(jié)合相同的miRNA第4頁/共30頁ceRNA機制的生物學功能RNA轉(zhuǎn)錄本通過與編碼RNA競爭性的結(jié)合microRNA，從而稀釋掉細胞內(nèi)游離microRNA的濃度，降低microRNA對編碼RNA的抑制，進而提高目的基因的表達量6第5頁/共30頁ceRNA的種類7第6頁/共30頁ceRNA部分研究結(jié)果8第7頁/共30頁ceRNA的國自然面上項目申請狀況9第8頁/共30頁10ceRNA的課題申請狀況第9頁/共30頁ceRNA的方案設計

ceRNA關(guān)系對的獲取及基本qPCR分析；

ceRNA關(guān)系對中各成分與疾病相關(guān)性驗證；

ceRNA關(guān)系對中的競爭性關(guān)系的驗證；11第10頁/共30頁12ceRNA關(guān)系對的獲取第11頁/共30頁13ceRNA的驗證試驗（LncRNA為例）第12頁/共30頁實例分享一：

LncRNApagbc對miRNA的海綿調(diào)控作用促進膽囊腫瘤發(fā)生WuX,WangF,LiH,etal.LncRNA‐PAGBCactsasamicroRNAspongeandpromotesgallbladdertumorigenesis[J].EmboReports,2017.（IF8.568）高通量測序+qPCR驗證+LncRNA功能驗證14第13頁/共30頁文獻一技術(shù)路線15第14頁/共30頁目的LncRNA的確定

高通量測序LncRNA+miRNA測序：9對膽囊癌與癌旁組織選取5條LncRNA在26對癌與癌旁組織進行qPCR驗證

構(gòu)建lncRNA-PAGBC-mRNA的基因共表達模型

16第15頁/共30頁目的LncRNA的確定驗證LncRNA-PAGBC在大樣本中的表達在60個癌與癌旁組織中進行l(wèi)ncRNA-PAGBC表達量的統(tǒng)計分析，證明lncRNA-PAGBC與癌癥的相關(guān)性17第16頁/共30頁目的LncRNA的確定對77個病例進行關(guān)于lncRNA-PAGBC的生存分析對lncRNA-PAGBC進行兩個細胞系中進行亞細胞定位18第17頁/共30頁目的LncRNA的確定在膽囊癌細胞系（GBC、NOZ）中進行l(wèi)ncRNAPAGBC沉默，分析細胞增殖及裸鼠成瘤19第18頁/共30頁目的LncRNA的確定在膽囊癌細胞系中進行l(wèi)ncRNAPAGBC過表達，分析癌細胞的遷移、侵襲和成瘤能力20第19頁/共30頁LncRNA‐PAGBC的與miRNA關(guān)系對確定整合LncRNA與miRNA數(shù)據(jù)，預測出PAGBC的6條靶miRNA選用雙熒光素酶報告系統(tǒng)進行關(guān)系對驗證（293T細胞、NOZ細胞）

21第20頁/共30頁LncRNA‐PAGBC的靶基因確定結(jié)合miR-133b、miR-511靶基因預測以及篇首的高通量數(shù)據(jù)，推測出靶基因SOX4和PIK3R3癌細胞中分別轉(zhuǎn)入LncRNA‐PAGBC的突變體（分別針對miR-133b、miR-511結(jié)合位點）后，進行靶基因表達檢測

22第21頁/共30頁LncRNA‐PAGBC的目的基因確定癌細胞中分別轉(zhuǎn)入LncRNA‐PAGBC的突變體、過表達+miRNAinhibitor、miRNAmimic，進行靶基因表達檢測23第22頁/共30頁結(jié)論通過高通量測序發(fā)現(xiàn)與膽囊癌相關(guān)的特定LncRNA，經(jīng)過在病例中的檢測初步篩選出目的LncRNA；沉默、過表達LncRNA在體內(nèi)及體外的功能試驗，驗證出LncRNA‐PAGBC與膽囊癌細胞的增殖有關(guān)系；通過生信分析從LncRNA‐PAGBC預測出6個靶miRNA中，通過體內(nèi)、體外試驗確定出其靶標miR-133b、miR-511；LncRNA‐PAGBC通過競爭性的與miR-133b、miR-511結(jié)合，促進SOX4和PIK3R3表達升高，進而活化了AKT/mTOR通路；24第23頁/共30頁lncRNAHOTAIR在腎癌細胞中通過miR-217調(diào)節(jié)HIF-1α/Axl信號途徑高通量測序+qPCR驗證+LncRNA功能驗證QuanH,OuL,WeiZ,etal.LncRNAHOTAIRregulatesHIF-1α/AXLsignalingthroughinhibitionofmiR-217inrenalcellcarcinoma[J].CellDeath&Disease,2017,8(5):e2772.（IF5.965）25實例分享二：第24頁/共30頁研究路線26第25頁/共30頁皮膚黑色素瘤中的競爭性內(nèi)源RNA調(diào)控分子機制高通量測序+qPCR驗證+circRNA功能驗證XuS,JingS,ShengY,etal.IntegrativeanalysisofcompetingendogenousRNAnetworkfocusingonlongnoncodingRNAassociatedwithprogressionofcutaneousmelanoma[J].CancerMedicine,2018(8Suppl).（IF3.362）27實例分享三：第26頁/共30頁方案設計測序+qPCR：15W；IF：4分左右；功能試驗：15-25W；IF：3-5分左右；測序+qPCR+功能試驗：35-40W；IF：6-8分28第27頁/共30頁SalmenaL,PolisenoL,TayY,etal.ceRNAhypothesis:TheRosettaStoneofahiddenRNAlanguage?[J].Cell,2011,146(3):353-8.ThomsonDW,Ding