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文檔簡介
在食品、化工、輕紡、醫(yī)藥等領(lǐng)域大規(guī)模使用酶制劑,說明酶制劑使用有很多優(yōu)點,你能舉出一些嗎?催化效率高、低能耗、低污染等生產(chǎn)中直接使用酶存在哪些問題?酶制劑存在的缺陷:1、通常對強酸、強堿、高溫和有機溶劑等條件非常敏感,容易失活;2、溶液中的酶很難回收,不能被再次利用,提高了生產(chǎn)成本;3、反應(yīng)后會混在產(chǎn)物中,可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。(一)固定化酶的應(yīng)用實例——生產(chǎn)高果糖漿一、基礎(chǔ)知識(1)高果糖漿的生產(chǎn)原理葡萄糖異構(gòu)酶果糖葡萄糖(2)葡萄糖異構(gòu)酶固定將酶固定在顆粒狀載體上,裝入反應(yīng)柱中。(3)高果糖漿的生產(chǎn)操作從反應(yīng)柱上端注入葡萄糖溶液,從下端流出果糖溶液,一個反應(yīng)柱可連續(xù)使用半年。(一)固定化酶的應(yīng)用實例一、基礎(chǔ)知識固定化酶技術(shù)的優(yōu)點:1.使酶既能與反應(yīng)物接觸,又能與產(chǎn)物分離;2.固定在載體上的酶可以被反復(fù)使用。
一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng),而在生產(chǎn)實際中很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能進(jìn)行,所以操作比較麻煩??刹捎霉潭ɑ?xì)胞技術(shù)。1.將酶或細(xì)胞固定化的方法(二)固定化細(xì)胞技術(shù)一、基礎(chǔ)知識包埋法:將酶(或細(xì)胞)包埋在細(xì)微網(wǎng)格里
利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)化學(xué)結(jié)合法(交聯(lián)法):
將酶(或細(xì)胞)相互連接起來吸附法:將酶(或細(xì)胞)吸附在載體表面上【比較】酶和細(xì)胞的固定方法和特點固定對象酶細(xì)胞適宜固定法化學(xué)結(jié)合法物理吸附法包埋法特點體積小,固定一種酶體積大,固定一系列酶;難以化學(xué)結(jié)合和吸附所需條件適宜的溫度、pH適宜的溫度、pH、營養(yǎng)物質(zhì)2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別聯(lián)系:應(yīng)用相同,都能催化某些反應(yīng)區(qū)別:1)固定化細(xì)胞技術(shù)操作容易,成本低,容易回收;2)固定化細(xì)胞技術(shù)對酶活性影響更小;3)固定化細(xì)胞固定的一系列酶;4)由于大分子難以通過細(xì)胞膜,因此固定化細(xì)胞的應(yīng)用有一定的限制;(二)固定化細(xì)胞技術(shù)一、基礎(chǔ)知識
固定化細(xì)胞時應(yīng)當(dāng)選用不溶于水的多孔性載體材料,如明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等(二)固定化細(xì)胞技術(shù)一、基礎(chǔ)知識3.固定化細(xì)胞的材料活化是指讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常生活狀態(tài)的過程。活化是指什么?
1g干酵母+10mL蒸餾水→50mL燒杯→攪拌均勻→放置1h,使之活化。二、實驗操作(一)制備固定化酵母細(xì)胞(1)酵母細(xì)胞的活化
0.83gCaCl2+150mL蒸餾水→200mL燒杯→溶解備用(一)制備固定化酵母細(xì)胞(2)配制CaCl2溶液(3)配制海藻酸鈉溶液
0.7g海藻酸+10mL水→50mL燒杯→酒精燈小火(或間斷)加熱,并不斷攪拌,使之溶化→蒸餾水定容到10mL。二、實驗操作2.微火加熱并不斷攪拌的目的是什么?1.海藻酸鈉溶液濃度要適宜,為什么?防止海藻酸鈉焦糊。濃度過高,很難形成凝膠珠;濃度過低,形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞數(shù)目少,影響實驗效果。將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫,加入活化酵母細(xì)胞液,攪拌后吸入到注射器中。(一)制備固定化酵母細(xì)胞(4)海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞的混合(5)固定化酵母細(xì)胞以恒定速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中,形成凝膠珠狀顆粒。二、實驗操作1.CaCl2的作用?使膠體聚沉2.如何判斷固定化酵母細(xì)胞是否成功?觀察凝膠珠的顏色和形狀。若凝膠珠顏色過淺、呈白色,說明海藻酸鈉的濃度偏低,固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少;若凝膠珠不是圓形或橢圓形,則說明海藻酸鈉的濃度偏高,制作失敗。檢驗?zāi)z珠:1、用鑷子夾起一個凝膠珠放在實驗桌上用手?jǐn)D壓,如果凝膠珠不容易破裂,沒有液體流出,就說明凝膠珠制作成功。2、在實驗桌上用力摔打凝膠珠,如果凝膠珠很容易彈起,也表明制備的凝膠珠是成功的。(1)沖洗:將固定的酵母細(xì)胞凝膠珠用蒸餾水沖洗2~3次。(2)發(fā)酵:150mL10%葡萄糖+固定化酵母細(xì)胞→200mL錐形瓶→密封→25℃發(fā)酵24h。(二)固定化酵母細(xì)胞的發(fā)酵二、實驗操作直接使用酶固定化酶固定化細(xì)胞酶的種類一種或幾種一種一系列酶常用載體無高嶺土、皂土、硅膠、凝膠明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素、聚丙烯酰胺制作方法無化學(xué)結(jié)合固定化、物理吸附固定化包埋法固定化營養(yǎng)物質(zhì)不需要不需要需要催化反應(yīng)單一或多種單一一系列反應(yīng)底物各種物質(zhì)各種物質(zhì)小分子物質(zhì)缺點①對環(huán)境
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