臨床免疫檢驗中的干擾因素內(nèi)源性干擾物質(zhì)1、類風(fēng)濕因子（Rheumatoidfactors,RF）類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor，RF）是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF最初由Rose等（1984年）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清中發(fā)現(xiàn)。RA患者體內(nèi)有產(chǎn)4RF的B細胞克隆，在變性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的Fc段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。類風(fēng)濕因子干擾的排除（1）用F（ab）替代完整的IgG。（2）標本用聯(lián)有熱變性（63°C,10min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）。（3）檢測抗原時，可以用2-筑基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。2、嗜異性抗體嗜異性抗體（Id）是由低純度抗原引起的，又稱之為對非特異性抗原產(chǎn)生的抗體應(yīng)答。天然的嗜異性抗體（IgG）可分為兩類：一類（85%的假陽性或假增高由其引起）可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域，但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類（15%的假陽性或假增高由其引起）可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位，但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性或假增高反應(yīng)。其也可造成假陰性或假降低的結(jié)果。嗜異性抗體干擾的排除使用特異的兔F（ab’）2片段作為固相或酶標抗體。在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig，封閉可能存在的嗜異性抗體。但加入量不足或亞類不同時無效。使用靶特異的非Ig親和蛋白（Affibody）替代固相或酶標抗體之一。采用噬菌體展示技術(shù)展示來自單個金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）聯(lián)合文庫的人IgA結(jié)合親和蛋白，用于IgA的測定，不受異嗜性抗體的影響。使用特異的雞抗體作為固相和測定抗體。3、人抗動物（如小鼠、免、羊等）抗體人抗小鼠抗體（humananti-mouseantibodies，HAMA）：抗鼠抗體對使用鼠源性單克隆抗體的免疫測定，可產(chǎn)生假陽性（定量檢測假增高）或假陰性（定量假降低）結(jié)果。干擾排除的方法使用特異的抗體F(ab')2片段作為固相或測定酶標抗體。在標本或標本稀釋液中加入過量的鼠Ig,封閉可能存在的抗鼠抗體。使用特異的雞抗體IgG作為固相和測定抗體。雞IgG不與人抗鼠抗體反應(yīng)。因而，用其作為固相或酶標抗體不會出現(xiàn)假增高或假降低結(jié)果。4、自身抗體自身抗體如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素、抗甲狀腺激素抗體等，能與其相應(yīng)靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在免疫測定方法中可干擾相應(yīng)抗原抗體的測定。自身抗體干擾排除的方法測定前需用理化方法將其解離后再測定。5、補體補體(complement,C)是存在于正常人和動物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。早在19世紀末Bordet即證實，新鮮血液中含有一種不耐熱的成分，可輔助和補充特異性抗體，介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，故稱為補體。補體是由30余種可溶性蛋白、膜結(jié)合性蛋白和補體受體組成的多分子系統(tǒng)，故稱為補體系統(tǒng)(complementsystem)。根據(jù)補體系統(tǒng)各成分的生物學(xué)功能，可將其分為補體固有成分、補體調(diào)控成分和補體受體(CR)。ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其Fc段的C1q分子結(jié)合位點被暴露出來，使C1q可以將二者連接起來，從而造成假陽性。補體干擾的排除1、用EDTA稀釋標本。2、用53°C，10min加熱血清使C1q滅活。6、溶菌酶溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的8-1，4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶可與等電點較低的蛋白有強的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點約為5，因此，在雙抗體夾心法測定中，溶菌酶可在包被的IgG和酶標的IgG間形成橋接，從而導(dǎo)致假陽性或假增高結(jié)果。排除方法為保證免疫測定的可靠性，有必要從標本中去除溶菌酶或?qū)⑵浞忾]，Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶，防止其聯(lián)接IgG。7、抗試劑成份的抗體抗鏈霉親合素抗體(anti-streptavidinantibodies):鏈霉親合素(streptavidin)是由Streptomycesavidinni產(chǎn)生的，機體為什么會出現(xiàn)抗鏈霉親合素抗體的原因目前尚不清楚。抗釘抗體(antirutheniumantibodies)。8、 被動獲得的外源抗體或抗原靜脈輸注免疫球蛋白獲得抗病原體的抗體(如抗梅毒抗體、抗-HCV、抗-HBs等)；新生兒獲得的來自母體的特異IgG；新生兒獲得的來自乙肝“大三陽〃母親的HBeAg。9、 交叉反應(yīng)(crossreaction)交叉反應(yīng)是兩種來源不同的抗原，彼此之間可以有相同的抗原決定簇，由此決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體不僅可分別與其自身表面的相應(yīng)抗原表位結(jié)合，而且還能與另一種抗原的相同表位結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，稱為交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)現(xiàn)象的形成可能與下列因素有關(guān):1、 共同抗原，不同生物體的某些生物大分子具有相同的抗原結(jié)構(gòu)；2、 共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；3、 相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空間構(gòu)象十分類似，可以和同一種抗體的互補決定區(qū)相契合。激素、小分子半抗原等易受到交叉反應(yīng)影響。10、生物素（biotin）生物素又被稱為維生素B7或維生素H，是一種水溶性B族維生素。生物素的缺乏主要會損害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng)，在普通人群中長期的生物素缺乏可能導(dǎo)致毛發(fā)、指甲、皮膚的損害。生物素-親合素系統(tǒng)是上世紀70年代末發(fā)展起來的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。在體外診斷的實際應(yīng)用中更是具有巨大的優(yōu)越性，生物素可與幾乎所有生物大分子結(jié)合，親和力高，結(jié)合穩(wěn)定，靈敏度高，具有多級放大作用。生物素干擾存在于使用生物素-親和素系統(tǒng)或生物素-抗生物素系統(tǒng)的檢測中。與儀器廠家、儀器型號、發(fā)光底物無關(guān)，同一廠家不同項目包被方式也可能不同。生物素對化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生干擾需要一定的濃度，不同項目/試劑抗生物素干擾的能力不同。生物素干擾可能產(chǎn)生假陽性，也可能產(chǎn)生假陰性。一般來說，夾心法產(chǎn)生假陰性，競爭法產(chǎn)生假陽性。外源性干擾物質(zhì)1、溶血溶血(Hemolysis)紅細胞破裂，血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解，簡稱溶血?？捎啥喾N理化因素和毒素引起。在體外，如低滲溶液、機械性強力振蕩、突然低溫冷凍(-20°C?一25°C)或突然化凍、過酸或過堿，以及酒精、乙醚、皂堿、膽堿鹽等均可引起溶血。標本溶血時可釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異

性顯色，干擾測定結(jié)果。解決方法標本采集和處理時必須注意避免溶血。2、 標本被細菌污染細菌菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，在ELISA試驗中可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。3、 標本保存時間過長部分項目因穩(wěn)定性時間較短，需嚴格注意標本保存時間。項目名粽NSE（神經(jīng)原特異性烯醇化醺）INSE（神經(jīng)原特異性烯醇化醺）IS100CsiooSS）HE4〔鞘睪蛋白4）ProGRPf胃泌素釋放前體）Folate（葉酸）Insulin（展島素）Cpeptide（Clt）24小時（15-25*C6小時）2天C15-254C8小時）2天（15-25*C6小時）73:小時（20°C9小時）2天（20-25°C2小時）24小時（15-25"C4小時）24小時（15-25*C4小時）4、標本凝固不全血液采集后，如收集管中無促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時后開始凝固，18~24h完全凝固。日常檢驗中，常在血液還未開始凝固時即離心分離血清，此時因血液沒有完全凝固，離出的〃血清〃并非為完全的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，易形成干擾，造成假陽性。解決方法血液標本采集后，應(yīng)使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分