過敏性疾病的免疫學(xué)檢測研究,免疫學(xué)論文內(nèi)容摘要：判定患者過敏和找到過敏原,可通過與過敏相關(guān)的免疫學(xué)檢測進(jìn)行。免疫學(xué)檢查是機(jī)體辨別本身與非己抗原,對本身抗體構(gòu)成天然免疫耐受,對非己抗原產(chǎn)生排擠作用的一種生理功能的檢測。檢測出過敏原,并盡量避免與之接觸,減少過敏性疾病的發(fā)生[1,2]。過敏性疾病的免疫學(xué)檢測主要包括血清總免疫球蛋白E(IgE)、特異性IgE檢測和過敏原皮膚試驗(yàn),除此之外還有特異性激發(fā)試驗(yàn)和嗜堿粒細(xì)胞釋放介質(zhì)能力檢測等,華而不實(shí)過敏原皮試是基本、常用的檢測方式方法,至今無法被取代。過敏原皮試和激發(fā)試驗(yàn)屬體內(nèi)試驗(yàn),而上述其他試驗(yàn)則屬于體外試驗(yàn)。本文關(guān)鍵詞語：過敏性疾病,免疫學(xué)檢測1過敏原皮膚試驗(yàn)過敏原皮膚試驗(yàn)簡稱皮試,是將微量無害的可疑過敏原注入皮膚,與皮膚中致敏肥大細(xì)胞外表的特異性IgE相結(jié)合,經(jīng)一系列的酶激活,使肥大細(xì)胞脫顆粒,釋放組胺等多種化學(xué)介質(zhì),進(jìn)而使注入處局部皮膚出現(xiàn)丘疹和紅暈反響。皮膚試驗(yàn)主要用于檢測Ⅰ型和Ⅳ型變態(tài)反響。1.1皮試液的選擇。(1)過敏原皮試液:需根據(jù)臨床資料、年齡、發(fā)病季節(jié)、地域和環(huán)境因素而定。選用空氣中常見的過敏原,如塵螨、花粉、蟑螂、真菌、寵物皮毛屑等浸液;食物過敏原多項(xiàng)選擇用牛奶、雞蛋、蝦、蟹以及大豆、花生等[3,4,5]。(2)皮試對照液:為了得到準(zhǔn)確的皮試結(jié)果,做皮試應(yīng)同時(shí)設(shè)陽性和陰性對照。陽性對照液常用二鹽酸組胺或二磷酸組胺。陰性對照液多項(xiàng)選擇用生理鹽水或過敏原稀釋保存液。1.2皮膚試驗(yàn)方式方法皮膚試驗(yàn)的方式方法主要有點(diǎn)刺試驗(yàn)、皮內(nèi)試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)和斑貼試驗(yàn)等。當(dāng)前臨床上常用的是點(diǎn)刺試驗(yàn)。皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)臨床應(yīng)用廣泛并逐步取代皮內(nèi)試驗(yàn)。方式方法是用點(diǎn)刺針點(diǎn)刺表皮,將極微量的皮試液滲入皮膚,是非皮內(nèi)注射的一種既簡便又可靠的皮試方式方法。點(diǎn)刺試驗(yàn)觀察結(jié)果和丘疹直徑測量的方式方法同皮內(nèi)試驗(yàn),結(jié)果判定的參考標(biāo)準(zhǔn)如下:以過敏原皮試液所致丘疹面積與陽性對照液所致丘疹面積之比值,來定其反響級別。無丘疹(-);丘疹不明顯();比值25%(+);50%(++),100%(+++),200%(++++)。(+++)以上可有偽足出現(xiàn)。國外當(dāng)前已推廣了分別涂有各種不同過敏原并經(jīng)密封包裝的點(diǎn)刺器具,使用時(shí)只要打開包裝,無需再滴加皮試液,并備有陰、陽性對照。這種方式方法被稱為干點(diǎn)刺試驗(yàn)。該方式方法還未被應(yīng)用于國內(nèi)臨床。2激發(fā)試驗(yàn)人為地將某種過敏原或非過敏原刺激物對靶器官進(jìn)行刺激,繼而通過所引發(fā)的異常感覺和狀態(tài)和(或)靶器官功能改變,來確定該物質(zhì)能否為引發(fā)患者異常感覺和狀態(tài)的病因,或了解器官的反響性。用于診斷過敏性鼻炎-哮喘綜合征的激發(fā)試驗(yàn)是支氣管激發(fā)試驗(yàn)[6]。由于當(dāng)前特異性支氣管激發(fā)試驗(yàn)(用過敏原刺激)很少應(yīng)用,而主要采用非特異性刺激,如醋甲膽堿、組胺、運(yùn)動等,來觀測患者的氣道反響性,故當(dāng)前支氣管激發(fā)試驗(yàn)一詞以氣道反響性測試的出現(xiàn)頻率較高。除了支氣管激發(fā)試驗(yàn)外,其他的激發(fā)試驗(yàn)有鼻黏膜激發(fā)試驗(yàn)、眼結(jié)膜激發(fā)試驗(yàn)、口服激發(fā)試驗(yàn)等。食物激發(fā)試驗(yàn)適用于對某種食物有過敏史而其皮試結(jié)果又與病史不符的患者。為使試驗(yàn)更具客觀性,排除患者的主觀和精神因素,食物激發(fā)試驗(yàn)盡可能采用雙盲安心撫慰劑對照激發(fā)。3體外檢測技術(shù)和主要檢測項(xiàng)目3.1血清免疫球蛋白E檢測血清IgE的檢測包括血清特異性IgE和血清總IgE,前者是指針對某種過敏原所產(chǎn)生的IgE,用于檢測某人對某一過敏原能否過敏;而后者則是測定血清中IgE的總含量。血清IgE的檢測當(dāng)前普遍采用的是標(biāo)記免疫分析技術(shù),該類技術(shù)包括放射標(biāo)記免疫分析法(放免法)、酶標(biāo)記免疫分析法(酶標(biāo)法)、膠體金標(biāo)記免疫分析法(金標(biāo)法)、酶標(biāo)記熒光免疫分析法(熒光酶標(biāo)法)和化學(xué)發(fā)光法等。正常成人血清IgE含量一般150IU/ml。(1)放射性過敏原吸附試驗(yàn)(RAST):RAST結(jié)果準(zhǔn)確,但因需一定設(shè)備、費(fèi)時(shí),加之放射性核素有半衰期和一定的放射污染,故當(dāng)前應(yīng)用較少。(2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):ELISA是酶標(biāo)法中最常用的方式方法。采用ELISA檢測sIgE,其靈敏度、特異性與RAST相仿,而且價(jià)廉。(3)膠體金標(biāo)記免疫分析法(金標(biāo)法):金標(biāo)法的最大優(yōu)點(diǎn)在于快速、操作簡便,只要滴一滴血清就能夠檢測,15~20分鐘觀察結(jié)果,檢測報(bào)告立等可取。其缺點(diǎn)是靈敏度較低,只能定性或半定量。(4)酶標(biāo)記熒光免疫分析法(熒光酶標(biāo)法):熒光酶標(biāo)法(FEIA)可看作熒光和酶標(biāo)技術(shù)的結(jié)合。該法當(dāng)前用于全自動的CAP過敏原檢測系統(tǒng)(CAP系統(tǒng))檢測儀進(jìn)行自動檢測。靈敏、可靠,而且檢測時(shí)間僅需3小時(shí),給臨床工作帶來了極大的方便。該系統(tǒng)不但能夠檢測過敏原特異性IgE,還能檢測多種過敏性疾病的重要指標(biāo),如總IgE、嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白、類胰蛋白酶、IgA、IgG以及很多本身免疫性疾病的指標(biāo)等。當(dāng)前提供的商品化過敏原檢測品種有500多種。(5)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法:化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法是將化學(xué)發(fā)光與免疫反響相結(jié)合,用以檢測抗原或抗體的方式方法。在血清特異性IgE檢測上,有1次檢測30多種過敏原的Mast檢測法。3.2血清特異性IgE(sIgE)檢測特異性IgE是特應(yīng)性個(gè)體針對某一種過敏原刺激所產(chǎn)生的IgE,特異性IgE的檢測在過敏反響體外診斷中占有重要地位。國內(nèi)當(dāng)前較多采用的是敏篩檢測,敏篩過敏原檢測系統(tǒng)采用免疫印跡法,定量檢測人血清中過敏原特異性IgE抗體。特異性過敏原被吸附于硝酸纖維素膜外表,與病人血清中過敏原特異性的IgE抗體結(jié)合。再與生物素標(biāo)記的抗人IgE抗體結(jié)合,然后加上堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素。在參加BCIP/NBT酶作用底物孵育后,發(fā)生特定的酶顯色反響,試劑條上出現(xiàn)沉淀。顏色深淺與血清中sIgE抗體含量成正比。敏篩定量過敏原檢測系統(tǒng)具有極其良好的重復(fù)性、敏感度、特異性和準(zhǔn)確性。與過敏原皮試相比,血清特異性IgE檢測具有更高層次的可靠性,除此之外,對于藥物、皮膚敏感性等影響而無法做皮試,或皮試結(jié)果不可靠者,血清特異性IgE檢測能顯示其優(yōu)勢。血清特異性IgE檢測,也是選用特異性免疫療法(脫敏治療)的根據(jù)之一。3.3芯片技術(shù)美國RayBiotech推出通量最高的雙抗夾心法抗體芯片,同時(shí)進(jìn)行定量或半定量檢測,靈敏度、準(zhǔn)確性更高層次。高通量挑選的優(yōu)點(diǎn)是:在未知細(xì)胞因子表示出之前,通過一個(gè)檢測工具就能夠宏觀表現(xiàn)細(xì)胞因子的情況,進(jìn)而對發(fā)現(xiàn)新的標(biāo)志物和指導(dǎo)后續(xù)試驗(yàn)具有重要意義。當(dāng)前,該技術(shù)還沒有應(yīng)用到臨床。3.4嗜堿粒細(xì)胞釋放介質(zhì)能力的體外檢測血清IgE的檢測,只能反映患者血清中能否存在過敏性抗體,而對于與過敏反響密切相關(guān)的其他因素,如IgE與肥大細(xì)胞/嗜堿粒細(xì)胞的結(jié)合能力,以及這些效應(yīng)細(xì)胞在過敏原與IgE結(jié)合后釋放介質(zhì)的能力等,則無法反映,因而,過敏反響效應(yīng)細(xì)胞釋放介質(zhì)能力的檢測就顯得非常重要。由于嗜堿粒細(xì)胞在功能上,尤其是在過敏反響的機(jī)制上與肥大細(xì)胞有著很多共同點(diǎn),且易于在數(shù)毫升靜脈血中分離獲得,所以,臨床上將嗜堿粒細(xì)胞作為試驗(yàn)對象。嗜堿粒細(xì)胞釋放介質(zhì)能力的檢測方式方法,主要有嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)和嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)。嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn):嗜堿粒細(xì)胞經(jīng)純化、洗滌后所得的懸液,用刺激劑(過敏原或其他物質(zhì))刺激后,釋放介質(zhì)組胺。通過測定組胺的量,來反映嗜堿粒細(xì)胞釋放介質(zhì)的能力。該方式方法靈敏度高、結(jié)果可靠。嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn):嗜堿粒細(xì)胞胞漿內(nèi)硫酸肝素顆?？杀粔A性染液(如甲苯胺藍(lán)、阿利新藍(lán)等)染色。試驗(yàn)的方式方法主要有甲苯胺藍(lán)染色的玻片法和阿利新藍(lán)染色的試管法。3.5無創(chuàng)性氣道過敏性炎癥指標(biāo)的評價(jià)。(1)嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)的測定:ECP是由嗜酸粒細(xì)胞激活后所釋放的毒性蛋白之一,是嗜酸粒細(xì)胞活化的標(biāo)志,也是反映氣道炎癥發(fā)生發(fā)展的敏感指標(biāo)。CAR-AS患者血清和誘導(dǎo)痰中的ECP水平明顯高于正常人,此種高水平與支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的ECP水平有很好的一致性,且與CARAS的病情嚴(yán)重程度相關(guān)。臨床上主要開展的是血清ECP含量的測定。(2)類胰蛋白酶的測定:肥大細(xì)胞在過敏反響中起重要作用。測定血清、誘導(dǎo)痰中類胰蛋白酶的含量和活性,能了解肥大細(xì)胞的活化程度。類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞分泌顆粒中特有的一種絲氨酸蛋白,其含量占肥大細(xì)胞總酶量的三分之一,可作為肥大細(xì)胞活化的標(biāo)志,在CARAS發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。血清類胰蛋白酶含量的測定常采用熒光酶標(biāo)法的CAP系統(tǒng)進(jìn)行。血清類胰蛋白酶的正常參考值為5g/L。(3)細(xì)胞因子和黏附分子的檢測:細(xì)胞因子是指由活化的免疫細(xì)胞及某些基質(zhì)細(xì)胞表示出并分泌的一系列生物活性物質(zhì),其化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)或多肽。黏附分子是一系列介導(dǎo)細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間黏附,并具有細(xì)胞間傳遞信息和調(diào)節(jié)細(xì)胞功能等作用(包括炎癥調(diào)節(jié))的糖蛋白。細(xì)胞因子和黏附分子的檢測方式方法主要有:生物學(xué)檢測法、免疫學(xué)檢測法、分子生物學(xué)方式方法、免疫組織化學(xué)法。(4)尿中白三烯E4(LTE4)測定:白三烯由嗜堿粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞產(chǎn)生,與過敏性鼻炎哮喘綜合征的發(fā)作有關(guān)。LTE4是白三烯中的一個(gè)組分。(5)呼出氣體中一氧化氮濃度測定:細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮合酶(NOS)。分為固有型NOS(cNOS)和誘導(dǎo)型NOS(iNOS)兩種類型。過敏性鼻炎患者由于氣道炎癥細(xì)胞聚集及氣道上皮損傷,iNOS活性增加以及NCNA神經(jīng)末梢的NO異常釋放,使氣道內(nèi)NO濃度明顯增加。正常人呼出氣體中的NO濃度為10~25ppb。(6)誘導(dǎo)痰分析:誘導(dǎo)痰是讓患者霧化吸入高滲氯化鈉溶液誘導(dǎo)后所獲取的痰液。利用誘導(dǎo)痰,可進(jìn)行痰中細(xì)胞分類和檢測多種細(xì)胞活性物質(zhì)(如細(xì)胞因子)以及細(xì)胞活性物質(zhì)的mRNA表示出等。誘導(dǎo)痰中細(xì)胞因子的檢測亦是無創(chuàng)性氣道炎癥指標(biāo),如白介素-4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-8和可溶性白介素-2受體(sIL-2R)、-干擾素(IFN-)、腫瘤壞死因子-(TNF-)、粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等檢測,有助于氣道炎癥的判定。誘導(dǎo)痰分析當(dāng)前應(yīng)用較多的是痰液中嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量和嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)水平分析。(7)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞(TSLP):TSLP能夠引發(fā)骨髓外造血經(jīng)過,并激發(fā)過敏性炎癥,進(jìn)而引起各類過敏性疾病。TSLP的相關(guān)免疫學(xué)應(yīng)用將拭目以待。4生物共振儀檢測過敏原生物共振過敏原檢測系統(tǒng)的檢測原理屬于量子醫(yī)學(xué)范疇,主要通過紅外線掃描器,對患者的雙手指甲褶處的微血管進(jìn)行掃描檢測。以基礎(chǔ)波值為基準(zhǔn),當(dāng)人體與上述過敏原樣本產(chǎn)生共振反響并超過基礎(chǔ)波閾值時(shí)即可確認(rèn)對該過敏原過敏[6,7]。該方式方法優(yōu)點(diǎn)是沒有痛苦,能夠同時(shí)檢測500~1000余種過敏原,費(fèi)用相對低廉,但結(jié)果的精到準(zhǔn)確性仍然有一定爭議。以下為參考文獻(xiàn)[1]張?zhí)?陳劍秋,朱春生,等.濟(jì)南市過敏性鼻炎患兒血清sIgE檢測分析[J].中國臨床醫(yī)生,2020,41(10)∶55-56.[2]文昭明.變態(tài)反響性疾病的診治[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.28-36.[3]李明華,殷凱生,蔡映云.哮喘病學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005.16-30.[4]TurveySE,CroninB,ArnoldAD,etal.Antibioticdesensitizationfortheallergicpatient:5yearsofexperienceandpractice[J].AnnAllergyAsthmaImmunol,2004(92)∶426.[5]LEWISSA,WeissST,PlattsMillsTA,etal.Theroleofindoorallergensensitizationandexposureincausingmorbidityinwomenwithasthma[J].AmJRespi