標準解讀

GB 31655-2021食品安全國家標準《哺乳動物體內堿性彗星試驗》為評估食品及其成分在哺乳動物體內引起的DNA損傷提供了一套標準化方法。該標準詳細規(guī)定了試驗原理、試驗材料、試驗步驟、結果判定及數據處理等方面的要求，旨在確保測試結果的準確性和可比性，進而評價食品的安全性。

試驗原理：

堿性彗星試驗是一種靈敏的生物檢測技術，用于檢測單個細胞水平上的DNA斷裂情況。通過將細胞暴露于電場中，受損的DNA形成彗星狀尾巴，其長度和形狀反映了DNA損傷的程度。本標準采用哺乳動物（如大鼠、小鼠）作為試驗模型，評估食品或食品成分潛在的遺傳毒性。

試驗材料：

  • 試驗動物：需符合特定的健康與年齡條件。
  • 細胞樣本：通常取自肝臟、腎臟等靶器官。
  • 試驗樣品：待檢測的食品或食品成分需按一定濃度準備。

試驗步驟：

  1. 樣品處理：將試驗動物暴露于待測樣品，確定合適的劑量和暴露時間。
  2. 組織采集：收集指定器官的細胞樣本。
  3. 細胞鋪片：將細胞均勻鋪展于載玻片上。
  4. 細胞裂解與堿性處理：去除蛋白質，使DNA暴露。
  5. 電泳：在電場作用下，受損DNA向陽極遷移形成彗星。
  6. 染色與分析：對形成的彗星進行染色，通過顯微鏡觀察并拍照記錄。
  7. 圖像分析：利用專業(yè)軟件測量彗星尾部長度等參數，評估DNA損傷程度。

結果判定與數據處理：

  • 根據彗星尾部的長度和/或其他形態(tài)學參數，量化DNA損傷水平。
  • 設定陰性對照組和陽性對照組，用以校驗試驗的有效性和可靠性。
  • 應對多組數據進行統(tǒng)計分析，判斷樣品是否引起顯著的DNA損傷。

該標準強調了實驗操作的規(guī)范性和數據分析的嚴謹性，為食品安全評估提供了科學依據，有助于監(jiān)管機構、科研單位及生產廠商評估食品的遺傳毒性風險，保障公眾健康。


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  • 現行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2021-02-22 頒布
  • 2021-08-22 實施
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GB 31655-2021食品安全國家標準哺乳動物體內堿性彗星試驗_第1頁
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文檔簡介

中華人民共和國國家標準

GB31655—2021

食品安全國家標準

哺乳動物體內堿性彗星試驗

2021-02-22發(fā)布2021-08-22實施

中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布

國家市場監(jiān)督管理總局

GB31655—2021

食品安全國家標準

哺乳動物體內堿性彗星試驗

1范圍

本標準規(guī)定了哺乳動物體內堿性彗星試驗的基本試驗方法和技術要求

。

本標準適用于評價受試物對哺乳動物組織細胞的損傷作用

DNA。

2術語和定義

21彗星

.

受損片段受到電場作用后產生的拖尾現象在顯微圖像下形似彗星彗星頭是核

DNA,“”。DNA,

彗星尾由在電場中遷移出核的受損片段組成

DNA。

22可評分細胞

.

有清晰輪廓的彗星頭尾且未受鄰近細胞干擾的細胞

、,。

23刺猬狀細胞

.“”

顯微圖像下由小或模糊不清的頭以及大的彌漫性尾組成的細胞

。

24尾部DNA百分比

.

彗星尾部含量相對于總含量頭尾之和的比值它反映了損傷的相對程度

DNADNA(、)。DNA,

以百分比表示

。

25關鍵變量

.

小的改變會對試驗結果產生較大影響的試驗參數包括取材時間裂解條件電泳時間等關鍵變

,、、。

量可以是組織特異性的

。

3試驗目的和原理

哺乳動物體內堿性彗星試驗可用于檢測強堿性條件下單鏈和雙鏈的斷裂包括受

(pH≥13)DNA,

試物直接作用引起的鏈斷裂堿性不穩(wěn)定性位點引起的鏈斷裂和切割修復所引起的

DNA、DNADNA

瞬時鏈斷裂動物通過適當的途徑給予受試物在實驗終點解剖分離靶組織制備單細胞細

DNA。。,,/

胞核懸浮液嵌入軟瓊脂并固定在載玻片上除去細胞膜和或核膜后暴露在強堿性條件下使

,/(pH≥13),

解旋并釋放游離的環(huán)和片段核進行瓊脂糖凝膠電泳未損傷的保留在瓊脂

DNADNA。DNA。DNA

糖凝膠的原位置形成彗星頭部彗頭由鏈斷裂造成的損傷片段和游離的環(huán)向陽極

(),DNADNA

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