HPLC法測定阿莫西林雙氯西林鈉膠囊含量3600字【摘要】目的：建立阿莫西林雙氯西林鈉膠囊中阿莫西林和雙氯西林鈉的含量測定辦法。辦法：采用ShimadzuVP《ODS色譜柱，流動(dòng)相為0.008mol/L十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)節(jié)至pH4.5)《甲醇(體積比68∶32),檢測波長225nm。結(jié)果：阿莫西林和雙氯西林在該色譜條件下均有適宜的保存,測定可在10min內(nèi)完成。阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL，雙氯西林在0.0025～0.5036mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。阿莫西林和雙氯西林鈉平均回收率(n=9)分別為99.4%(RSD=1.0%)和99.1%(RSD=0.97%)。結(jié)論：該辦法準(zhǔn)確、重復(fù)性好、靈敏度高,可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】阿莫西林雙氯西林鈉膠囊/高效液相色譜法/阿莫西林/雙氯西林

阿莫西林、雙氯西林屬β《內(nèi)酰胺類抗生素，阿莫西林對需氧革蘭氏陽性菌及局部革蘭氏陰性菌具抗菌活性，雙氯西林具耐酸、耐酶等特點(diǎn)，對葡萄球菌和革蘭陽性菌具抗菌活性。研究說明，阿莫西林—雙氯西林對常見的病原菌具良好抗菌作用,對傷寒沙門菌也具有良好抗菌作用,可作為治療呼吸道感染、單純性皮膚軟組織感染和傷寒等的首選藥物之一[1]。該品種目前在中國藥典、美國藥典、日抗基和英國藥典均未收載。文獻(xiàn)[2-4]采用HPLC法同時(shí)測定阿莫西林、雙氯西林的含量，以磷酸鹽緩沖液和乙腈為流動(dòng)相。但是阿莫西林和雙氯西林的極性相差較大，兩者的保存時(shí)間相差較大，在該色譜條件下為了保證雙氯西林有合適的保存時(shí)間，阿莫西林往往在溶劑峰左右出峰，幾乎沒有保存。本文經(jīng)優(yōu)化色譜條件，改用離子對試劑和甲醇為流動(dòng)相的RP《HPLC法，使兩者均具有合適的色譜保存時(shí)間，可用于阿莫西林和雙氯西林制劑的含量測定。

1儀器和試藥

Agilent1100高效液相色譜儀，SartoriusBP211D萬分之一電子天平。

甲醇(色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司出品，批號：051221101);十二烷基硫酸鈉(廣州市醫(yī)藥公司進(jìn)口分裝，批號：980503);阿莫西林對照品(中國藥品生物制品檢定，批號：130409《202208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：86.2%);雙氯西林對照品(BrightFuturePharm.Fty,批號：B4520222，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：91.4%);阿莫西林雙氯西林鈉膠囊(香港澳美制藥廠提供，規(guī)格：0.375g);實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

2辦法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：ShimadzuVP《ODS(250mm×4.6mm);流動(dòng)相：0.008mol/L十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5)《甲醇(體積比68∶32);流速1mL/min;檢測波長225nm;進(jìn)樣量20μL。色譜圖見圖1。

A空白品B對照品C樣品1.雙氯西林2.阿莫西林

圖1雙氯西林和阿莫西林的HPLC色譜圖(略)

Fig.1HPLCchromatogramsofamoxicillinanddicloxacillin

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的配制

取阿莫西林、雙氯西林對照品適量，精密稱定，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液制成每1mL含阿莫西林50μg、含雙氯西林25μg的混合液，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的配制

取供試品20粒，除去囊殼，均勻研細(xì)并混合，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿莫西林200mg,雙氯西林100mg),置200mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1mL，置20mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3專屬性考察

取阿莫西林雙氯西林鈉膠囊內(nèi)容物，分別用藥物光照試驗(yàn)儀強(qiáng)光照射24h和高溫95℃進(jìn)行24h強(qiáng)力破壞，分別取樣品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成含阿莫西林2mg/mL和雙氯西林1mg/mL的溶液,用0.45μm濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液20μL，按“2.1〞項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測定。試驗(yàn)結(jié)果說明，雜質(zhì)峰與兩主峰均有較好的別離，不影響測定。

2.4線性范圍確實(shí)定

分別取阿莫西林、雙氯西林對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成含阿莫西林為0.0050～1.0000mg/mL和雙氯西林為0.0025～0.5036mg/mL的溶液，按“2.1〞項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，得阿莫西林和雙氯西林的線性回歸方程分別為：A=27989ρ-26.88，r=0.9999(n=7);A=46883ρ-48.554，r=0.9999(n=7)。結(jié)果說明，阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL,雙氯西林在0.0025～0.5036mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.52.6溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號供試品溶液于0、2、4、6、8h內(nèi)依法測定，結(jié)果阿莫西林及雙氯西林的峰面積RSD分別為1.0%和1.3%(n=5)，說明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品6份，分別按“2.2.2〞項(xiàng)平行制備溶液，進(jìn)樣測定，外標(biāo)法計(jì)算阿莫西林和雙氯西林的含量RSD分別為0.6%和0.8%(n=6)，說明試驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.8干擾試驗(yàn)

取陰性空白樣品液，依法進(jìn)行測定。結(jié)果說明空白輔料對樣品測定無干擾，色譜圖見圖1。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

取已知濃度的供試品溶液參加不同濃度的對照液，制成含阿莫西林標(biāo)示量的80%、100%、120%的溶液，按含量測定項(xiàng)下的辦法進(jìn)行試驗(yàn)，考察其加樣回收率。阿莫西林的平均回收率為99.4%,RSD為1.0%;雙氯西林的平均回收率為99.1%,RSD為0.970%。見表1。

表1阿莫西林雙氯西林鈉膠囊回收率(略)

Tab.1Recoverytestofamoxicillinanddicloxacillinsodium

2.9樣品測定

取樣品3批，按“2.2.2〞項(xiàng)辦法制備，依法測定，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2阿莫西林和雙氯西林的含量測定(n=3)(略)

Tab.2Contentsofamoxicillinanddicloxacillinsodium

3討論

3.1檢測波長的選擇

取供試品溶液適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，在波長200～600nm之間進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果阿莫西林和雙氯西林在225nm下均有較高的響應(yīng)。參照美國藥典24版中雙氯西林鈉HPLC法測定的檢測波長225nm[5],選擇225nm為本法的檢測波長。

3.2離子對濃度的選擇

實(shí)驗(yàn)中考察了不同離子對濃度(0.005mol/L、0.006mol/L、0.007mol/L、0.008mol/L、0.01mol/L)對別離的影響，發(fā)現(xiàn)濃度低于0.007mol/L時(shí)，離子對不起作用，0.008mol/L時(shí)保存合適，別離效果好，而當(dāng)濃度大于0.01mol/L時(shí)，流動(dòng)相濁度較大，且長鏈離子對濃度過高容易形成膠束，可使溶質(zhì)的k值出現(xiàn)極大值的現(xiàn)象，另外可能對柱效有一定的影響。實(shí)驗(yàn)證明，采用0.008mol/L的濃度可保證柱效、峰型及保存時(shí)間均較好。

3.3流動(dòng)相pH值的選擇

對流動(dòng)相的pH值進(jìn)行考察，流動(dòng)相pH值低于4.0，阿莫西林及雙氯西林的保存均加強(qiáng)，不易洗脫;pH值大于6.0時(shí),峰變形。經(jīng)考察，pH值在4.5時(shí)阿莫西林及雙氯西林的峰型最好，且柱效最正確。