實(shí)驗(yàn)三硅膠粘合薄層的活度測(cè)定

指導(dǎo)老師：黃紅霞色譜法用途與分類薄層色譜法薄層色譜基本原理薄層色譜基本特點(diǎn)薄層色譜法的主要類型和吸附色譜原理吸附薄層色譜的吸附劑和展開劑展開劑的選擇比移值(Rf值)的求取實(shí)驗(yàn)二硅膠粘合薄層的活度測(cè)定

色譜法是分離純化和鑒定有機(jī)物的重要方法之一。色譜法可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜及高效液相色譜等類型。

薄層色譜法

(thinlayerchromatography；TLC)固定相（吸附劑或載體）涂布成一均勻薄層，點(diǎn)樣，（密閉的容器中）展開，斑點(diǎn)顯色，（與對(duì)照物質(zhì)）比較進(jìn)行定性定量。依靠毛細(xì)作用力或重力，使流動(dòng)相通過固定相的一種色譜。

特點(diǎn)：快，需十至幾十分鐘，同時(shí)展開多個(gè)試樣。試樣預(yù)處理簡單，對(duì)試樣限制少。載樣量比較大，適用于制備。儀器簡單，操作方便。分離能力較強(qiáng)。靈敏度較高。薄層色譜法的主要類型和吸附色譜原理

吸附薄層色譜法原理：組分在薄層板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的過程。 吸附系數(shù)不等實(shí)現(xiàn)分離。一般極性強(qiáng)的組分K大，Rf值??；極性弱的組分K小，Rf值大。分配薄層色譜法

吸附薄層色譜的吸附劑吸附劑硅膠：多孔性微粒，表面帶有硅醇基，呈弱酸性。

原理：硅醇基(吸附中心)與極性基團(tuán)形成氫鍵（吸附性）。 組分與硅醇基形成氫鍵（被吸附）的能力不同而分離。

應(yīng)用：酸性和中性物質(zhì)的分離，如有機(jī)酸酚類、醛類等

硅膠活度與含水量的關(guān)系：含水量高，活性級(jí)高，活度低?；罨杭訜嶂?05℃左右，除去吸附水提高活度。（注意溫度不可過高）吸附薄層色譜的展開劑

先用單一溶劑展開，若Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，（如乙醇、丙酮等），如果Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑(如環(huán)己烷、石油醚等)，以降低極性。展開劑選擇原則：根據(jù)被分離物質(zhì)的極性Stahl簡圖：極性物質(zhì)—活度低（活性級(jí)大）的吸附劑--極性展開劑

定性參數(shù)1比移值(Rf值)溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比。

Rf=L/L0L為原點(diǎn)（origin）至斑點(diǎn)中心的距離，L0為原點(diǎn)至溶劑前沿的距離與組分及色譜條件有關(guān)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握粘合薄層的制備方法。

2．了解粘合薄層活度測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

硅膠粘合薄層活度的測(cè)定方法，目前一般都采用Stahl活度測(cè)定法，以二甲黃、蘇丹紅G、靛酚藍(lán)各40mg，溶于100ml揮發(fā)性溶劑中，滴加于薄層上，用石油醚展開10cm，應(yīng)不移動(dòng)，如改用苯展開則應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0.19（？），靛酚藍(lán)0.08，展開時(shí)間約為30—40分鐘，經(jīng)本法測(cè)定合格的硅膠薄層其活度與柱色譜法所定活度的Ⅱ一Ⅲ級(jí)相當(dāng)。

三、儀器及試劑1．色譜缸2．二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)3．硅膠(色譜用)、羧甲基纖維素鈉。

四、操作步驟

1．粘合薄層板的鋪制：

稱取羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.75g，加入100ml水中加熱使溶解，放冷，放置后取13ml,再分次加入硅膠5g，調(diào)成糊狀后倒在清潔的玻璃板上，可幌動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)玻板，使其均勻流布于整塊玻板上，而獲得均勻的液層。將玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分鐘，置干燥器中貯存?zhèn)溆谩?．點(diǎn)樣：

取羧甲基維纖素硅膠板一塊(7.5×15cm)在距板一端lcm處，用鉛筆輕輕劃一直線作為起始線，在起始線中點(diǎn)用鉛筆作一標(biāo)記(o)，用內(nèi)徑約lmm的平口毛細(xì)管點(diǎn)加混合溶液，其直徑應(yīng)為2-3mm。點(diǎn)樣間隔為1～1.5CM

3.展開

將點(diǎn)好的樣晾干或吹干后將板置于盛有展開劑石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)的色譜缸中，（展開劑高度0.55cm）浸入深度為0.5cm，待展開劑前沿離起始線約10cm處，混合物應(yīng)不移動(dòng)，取出硅膠板，待石油醚揮發(fā)后，再按同法以苯為展開劑，展開時(shí)間約為30-40分鐘，取出薄層板立即劃出前沿線，待苯揮散，觀察斑點(diǎn)的位置

4計(jì)算比移值（Rf）：

干燥后記錄原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心，和原點(diǎn)至展開劑前沿的距離。測(cè)量Rf值，判斷其活度。

斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離Rf＝溶劑前沿至原點(diǎn)的距離注意：因?yàn)橥晃镔|(zhì)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下才具有相同的Rf值，所以在測(cè)定時(shí)，采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)照。

五、注意事項(xiàng)1．活化后薄層板應(yīng)貯于干燥器中，以免吸收濕氣而降低活性;2．點(diǎn)樣量不宜太多，否則會(huì)拖尾分離不;3．展開劑苯中含水量的多少會(huì)影響Rf值，故須用于燥的苯和器皿;4．展開劑