ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27540—2011

豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionof

classicalswinefevervirus

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T27540—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人王琴王泰健徐璐范學(xué)政劉俊蔣春燕趙啟祖寧宜寶鄒興啟

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27540—2011

豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

(Classicalswinefevervirus,CSFV)RT-PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬瘟的診斷和監(jiān)測(cè)適用于豬活體及其臟器血液排泄物和細(xì)胞培養(yǎng)物中核

,、、CSFV

酸的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第號(hào)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范

302

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

豬瘟病毒

CSFV:(Classicalswinefevervirus)

值達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù)

Ct:(cyclethreshold)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

酶熱啟動(dòng)聚合酶

HSTaq:TaqDNA(HSTaqDNApolymerase)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

熒光熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:(realtimefluorescentquantitativereverse

transcriptionpolymerasechainreaction)

4試劑和材料

除另有說明所用試劑均為分析純所有試劑均用無酶的容器分裝

,;RNA。

41抽提試劑外觀為粉紅色分裝至棕色瓶中于保存

.Trizol:RNA,,,4℃~8℃。

42氯仿預(yù)冷

.:4℃。

43異丙醇預(yù)冷

.:4℃。

44乙醇用新開啟的無水乙醇和水配制預(yù)冷

.75%:DEPC,-20℃。

45水去離子水中加入作用高壓滅菌

.DEPC:0.1%DEPC,37℃1h,(121±2)℃,15min。

46酶抑制劑

.RNA(30U/μL)。

47

.10×PCRbuffer(10mmol/LpH8.3Tris-HCl,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2)。

48

.dNTP(2.5mmol/L)。

49用于反應(yīng)的引物濃度為探針濃度為其序列如下

.RT-PCR