ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T32945—2016

牛結(jié)核病診斷體外檢測γ干擾素法

Bovinetuberculosisdiagnosis—AssayonIFN-γinvitro

2016-08-29發(fā)布2017-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T32945—2016

目次

前言

…………………………Ⅰ

引言

…………………………Ⅱ

范圍

1………………………1

縮略語

2……………………1

原理

3………………………1

體外檢測法

4IFN-γ………………………1

儀器與耗材

4.1…………………………1

試劑

4.2…………………2

操作步驟

4.3……………2

附錄規(guī)范性附錄試劑配制

A()…………4

附錄資料性附錄采樣與樣品處理注意事項

B()………6

GB/T32945—2016

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任

。。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位華中農(nóng)業(yè)大學武漢科前動物生物制品有限責任公司北京出入境檢驗檢疫局廣

:、、、

西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心

。

本標準起草人郭愛珍陳穎鈺涂玲玲胡長敏晁金馬貴平胡巧云陳煥春

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T32945—2016

引言

牛結(jié)核病是主要由牛分枝桿菌MycobacteriumbovisMb.ovis引起的一種人獸共患慢性傳染病

(,),

呈世界性分布世界動物衛(wèi)生組織將其列為必須通報疫病與國際貿(mào)易必檢對象我國將其列為

。(OIE),

二類動物疫病是國家中長期動物疫病防治規(guī)劃年種優(yōu)先防治的國內(nèi)重大動物疫病

,“(2012~2020)”16

之一臨床上牛結(jié)核病以肺結(jié)核最為常見但也可發(fā)生乳腺結(jié)核和腸結(jié)核等健康?？赏ㄟ^被污染的

。,。

空氣飼料和飲水等經(jīng)呼吸道和消化道感染此外牛結(jié)核病是人結(jié)核的重要傳染源之一由于牛分枝

、;,。

桿菌感染譜廣持續(xù)感染普遍牛結(jié)核病程緩慢臨床癥狀不典型等原因牛結(jié)核病凈化相對困難隨著

、、、,。

近年來我國現(xiàn)代奶牛業(yè)和肉牛業(yè)的蓬勃發(fā)展以及國內(nèi)牛群交易日益頻繁我國牛結(jié)核病呈上升趨勢

,。

國內(nèi)外通用的牛結(jié)核病控制策略是檢疫撲殺因此準確檢測是控制和凈化牛結(jié)核病的前提

“—”,,。

目前法定的檢疫方法為牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應該方法的優(yōu)點是靈敏度高缺點是操作費時繁瑣結(jié)

,,:,

果判斷主觀性強可與環(huán)境分枝桿菌感染出現(xiàn)交叉反應免疫抑制者或結(jié)核病后期對結(jié)核菌素的反應性

,,

降低牛結(jié)核病診斷體外檢測法是用牛結(jié)核菌素與禽結(jié)核菌素分別刺激外周血淋巴細胞釋放

。IFN-γ

通過檢測濃度判斷牛結(jié)核病感染狀態(tài)的一種方法是一種敏感性與特異性均高的方法

IFN-γ、IFN-γ,,

且能實現(xiàn)高通量檢測發(fā)達國家已成功利用該方法輔助診斷與監(jiān)測牛結(jié)核病建立我國牛結(jié)核病診斷

。。

體外檢測法國家標準能為牛結(jié)核病的早期診斷檢疫監(jiān)測和流行病學調(diào)查等提供技術支撐促

IFN-γ,、、,

進我國牛結(jié)核病的控制和凈化保障我國養(yǎng)牛業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展

,。

Ⅱ

GB/T32945—2016

牛結(jié)核病診斷體外檢測γ干擾素法

1范圍

本標準規(guī)定了牛結(jié)核病診斷體外檢測干擾素法的縮略語原理試劑采樣和操作步驟

γ、、、。

本標準適用于牛結(jié)核病的早期診斷檢疫監(jiān)測與流行病學調(diào)查

、、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

禽結(jié)核菌素

A-PPD:(avianpurifiedproteinderivative)

牛結(jié)核菌素

B-PPD:(bovinepurifiedproteinderivative)

酶聯(lián)免疫吸附試驗

ELISA:(enzymelinkedimmunosorbentassay)

辣根過氧化物酶

HRP:(horseradishperoxidase)

干擾素

IFN-γ:γ-(interferongamma)

免疫球蛋白

IgG:G(immunoglobullinG)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebuffersolution)

光密度值

OD:(opticaldensity)

3原理

感染牛分枝桿菌的結(jié)核陽性牛其外周血淋巴細胞已被牛分枝桿菌致敏并產(chǎn)生免疫記憶當體外

,。

遇到牛分枝桿菌特異性抗原牛結(jié)核菌素刺激時淋巴細胞將被激活發(fā)生再次細胞免疫反應大量釋

(),,,

放通過夾心檢測濃度水平即可診斷牛分枝桿菌感染禽分枝桿菌屬于非結(jié)核

IFN-