第七章

人工授精

第一節(jié)概述第二節(jié)采精第三節(jié)精液品質(zhì)檢查第四節(jié)精液的稀釋第五節(jié)精液的保存第六節(jié)輸精第一節(jié)概述

一、人工授精的概念及在家畜生產(chǎn)中的意義

（一）概念

人工授精（AI）：使用器械采集公畜的精液，再用器械把經(jīng)過檢查和處理后的精液輸入到母畜生殖道內(nèi)，以代替公母畜自然交配而繁殖后代的一種繁殖技術(shù)。（二）意義1、提高優(yōu)秀公畜的配種效能；2、充分利用優(yōu)秀的遺傳物質(zhì)，加速遺傳進展。3、便于繁殖管理。4、降低成本提高經(jīng)濟效益；5、有效地控制疾病的傳播；6、克服公、母畜體格懸殊造成的交配困難。7、促進良種公畜的地區(qū)和國際交流。8、是推廣繁殖新技術(shù)的一項基本措施。（三）應注意的問題

使用人工授精技術(shù)必須嚴格遵守操作規(guī)程，對種公畜進行嚴格的健康檢查和遺傳性能鑒定，防止遺傳缺陷和某些通過精液傳播疾病的擴散和蔓延，以及受胎率下降等問題的發(fā)生。

二、人工授精的發(fā)展概況

（一）試驗階段

1780年意大利的生理學家L.Spallanzani用處于體溫溫度的公狗精液給一只母狗進行人工授精，62d生了3只小狗。1782年他的試驗被P.Rossi和Branchi教授成功地重復出來。他后來證實通過過慮可使精液和精清分開。1803年他又報告用雪把精子冷卻后精子并未死亡，但停止了運動，加熱后又恢復了運動，且能持續(xù)數(shù)小時，這可能是最早的冷凍研究。

1899年俄國學者開始研究家畜的人工授精，并于20世紀初在馬的人工授精獲得成功，隨后成功地進行了牛和綿羊的人工授精。丹麥于1936年成立了世界第一個人工授精協(xié)會。在政府的支持下丹麥的育種者們一直在牛的人工授精的受胎率上處于領(lǐng)先地位。美國也比較早地開展了這項研究。（二）應用階段20世紀40～60年代，人工授精進入全面推廣階段，成為家畜改良重要手段。許多國家，尤其是歐洲、北美、大洋洲、前蘇聯(lián)、日本等畜牧業(yè)發(fā)達的國家和地區(qū)，各家畜的人工授精在當時已相當普及，其中以奶牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術(shù)水平最高，效果最好。（三）冷凍精液階段1951年產(chǎn)下世界上第一頭冷凍精液牛犢，使人工授精進入了一個嶄新的發(fā)展階段。（四）促進人工授精發(fā)展的幾項關(guān)鍵技術(shù)1、假陰道的發(fā)明2、稀釋液的開發(fā)：卵黃-磷酸鹽卵黃-檸檬酸鹽3、抗生素的應用4、輸精方法的改進5、冷凍精液的發(fā)明與甘油的使用6、液氮的使用及液氮容器的開發(fā)7、塑料細管用于分裝精液（五）國內(nèi)人工授精的發(fā)展歷史和現(xiàn)狀我國家畜人工授精始于1935年的句容種馬場，到20世紀40年代初期以后推廣于綿羊和奶牛，1951年以后主要在東北大力推廣于馬匹。此后，人工授精的重點又轉(zhuǎn)向奶牛和豬。奶牛人工授精于20世紀50年代中期開始，到70年代已普及，對中國黑白花奶牛的培育起到極其重要的作用。

目前，奶牛應用冷凍精液的普及率已在90％以上，重點奶源區(qū)已達100％。豬的人工授精自20世紀50年代起，相繼在廣西、江蘇、北京、黑龍江、廣東等地推廣，主要應用于規(guī)?；B(yǎng)豬場。雞的人工授精由于籠養(yǎng)雞的發(fā)展得到普及應用?？傊?，目前應用最廣的還是牛的人工授精。馬的很有限了，綿羊、山羊也局限于大的養(yǎng)殖場。三、人工授精的基本技術(shù)環(huán)節(jié)

采精;精液品質(zhì)檢查;精液的稀釋;精液的保存（液態(tài)保存、冷凍保存）;精液的運輸;冷凍精液的解凍與檢查;輸精等。

第二節(jié)采精一、采精前的準備1、采精場的準備2、臺畜的選擇和利用3、采精公畜的準備4、采精器械的準備（一）采精場地采精應有專用的場地，以便使公畜建立穩(wěn)固的條件反射。

（二）臺畜的準備臺畜的選擇要盡量滿足種公畜的要求，可利用活臺畜或假臺畜。

假臺畜？（三）公畜的準備--種公畜的準備和調(diào)教1、在假臺畜旁牽一發(fā)情母畜，誘使其爬跨數(shù)次，但不使其交配，當公畜性興奮達高峰時即牽向假臺畜使其爬跨。2、在假臺畜后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道分泌物或尿液，刺激公畜的性欲并引誘其爬跨假臺畜，經(jīng)過幾次采精后即可調(diào)教成功。3、將待調(diào)教的公畜栓系在假臺畜附近，讓其觀看另一頭已調(diào)教好的公畜爬跨假臺畜采精，然后再誘導其爬跨假臺畜。公畜調(diào)教時應注意的事項1.調(diào)教過程中，要反復進行訓練，耐心誘導，切勿施用強迫、恐嚇、抽打等不良剌激；2.調(diào)教時應注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生；3.最好選擇在早上調(diào)教，早上精力充沛，性欲盛；4.調(diào)教時間、地點要固定，每次調(diào)教時間不宜過長；

（四）采精器械的準備二、采精方法假陰道法；手握法；電刺激法；按摩法等。（一）假陰道法假陰道：模仿母畜陰道的生理解剖特點而設(shè)計的采精器具。主要包括外筒、內(nèi)胎、集精杯、附件等。假陰道法適用于各種家畜。該方法是模擬母畜陰道環(huán)境條件，并誘導公畜在其中射精，從而獲取精液的方法。假陰道法采精要滿足三個條件：假陰道的溫度、壓力和潤滑度。牛的假陰道（美式）牛的假陰道（蘇式）（外殼、內(nèi)胎、集精杯、附件）1、假陰道的安裝步驟：（1）洗滌（2）安裝內(nèi)胎（3）消毒

（4）沖洗（5）注水（6）涂潤滑劑（7）調(diào)壓（8）測溫2、采精操作假陰道法對不同的動物采精的注意事項：（1）公牛和公羊?qū)囟缺葔毫γ舾?，對假陰道溫度要求較高，應用手握包皮將陰莖導入假陰道；牛、羊交配時間短，向前一沖即行射精，操作要迅速準確。（2）公馬、公驢對假陰道內(nèi)壓力比溫度更為敏感，可以直接用手握住陰莖導入假陰道；采精時要牢固地將假陰道固定于臺畜尻部，陰莖基部、尾根部呈有節(jié)奏收縮和搏動即為射精。（3）公豬對壓力要求高，陰莖龜頭被固定才能射精。為此，要通過雙聯(lián)球有節(jié)奏地施加壓力。公豬射精時間長達5～7min，且精液量大，注意防止精液倒流。常用手握法。（二）手握法

手握法采精一般適用于公豬及犬的采精，具有設(shè)備簡單、操作方便，能選擇采集精子濃厚部分的精液。但也存在精液容易污染和精子易受低溫打擊等缺點，應加以注意。

公豬手握法采精誘導公豬爬跨假臺畜擠出包皮液并擦干包皮用三個手指鎖定龜頭接取含精子多的精液（三）電刺激法（四）按摩法主要用無爬跨能力的公牛和禽類。三、采精頻率

采精頻率是指每周內(nèi)對公畜的采精次數(shù)。為維持種公畜正常的性生理機能，保持健康的體況和最大限度的提高射精量及精液品質(zhì)，合理安排利用種公畜的采精頻率是十分重要的。

成年公牛一般每周2次，羊因附睪貯存量大而射精量少，因此在配種季節(jié)可每天采精。公豬、公馬射精量大，可適當減少采精次數(shù)。

正常成年公羊的采精頻率及其精液特性

品種每周采精次數(shù)平均每次射精量(ml)平均每次射出精子總數(shù)（億個）平均每周射出精子總數(shù)（億個）精子活率（%）正常精子量（%）綿羊7～250.8～1.216～36200～40060～8080～95山羊7～200.5～1.515～60250～35060～8080～95第三節(jié)精液品質(zhì)檢查

目的：1、鑒別精液品質(zhì)的優(yōu)劣，決定精液樣品的取舍，以此作為新鮮精液稀釋、保存的依據(jù)。2、能確定種公畜的配種負擔能力，反應種公畜的飼養(yǎng)管理水平、生殖器官的機能狀態(tài)和采精技術(shù)的高低。3、衡量精液在稀釋、保存、冷凍和運輸過程中的品質(zhì)變化及處理效果。一、外觀檢查：（一）感觀正常未經(jīng)稀釋的牛、羊精液因精子密度大而混濁不透明，肉眼觀察時，可見精液呈現(xiàn)旋渦云霧狀。馬、豬的精子濃度低，云霧狀不明顯或不能觀察到。色澤：正常牛、羊精液呈乳白或乳黃色，水牛為乳白或灰白色，豬、馬、兔的精液為淡乳白或淺灰白色。色澤異常表明公畜生殖器官有疾患。例如淺綠色是混有濃液；淡紅色是混有血液；黃色是混有尿液。但有的公牛持續(xù)地產(chǎn)生黃色精液，是由于其中含有核黃素的結(jié)果，對精液品質(zhì)沒有影響。和混有尿液的區(qū)別是有無尿味。二、射精量:射精量可以從刻度集精杯上讀出。品種和個體間有差異。評定是多次的平均值為依據(jù)，不包括膠狀物。一般青年公畜和較小的個體產(chǎn)生的精液量少。頻繁采精導致平均射精量少，連續(xù)二次時第二次的少。射精量少并非有害，但同時伴隨有精子濃度降低，則獲得的總精子數(shù)就會減少。射精量的異常減少可能是公畜的健康因素所導致，也可能是采精程序有問題。正常成年公畜的采精頻率及其精液特性

項目每周采精適宜次數(shù)（次）每次射精量（ml）每次射出精子總數(shù)（億）每周射出精子總數(shù)（億）精子活率（%）正常精子率（%）奶牛2-65-1050-150150-40050-7570-95肉牛2-64-850-150100-35040-7565-90水牛2-63-636-8980-30060-8080-95馬2-630-10050-150150-40040-7560-90驢2-620-8030-100100-3008090豬2-5150-300300-6001000-150050-8070-90綿羊7-250.8-1.516-36200-40060-8080-95山羊7-200.5-1.515-60250-35060-8080-95兔2-40.5-2.03.0-7.040-80二、顯微鏡檢查精子活率；精子密度；精子形態(tài)精子畸形率精子頂體完整率（一）精子活率也叫活力，是指精液中前進運動精子所占有的百分率。作前進運動的精子是指精子近似直線地從一點移動或前進到另一點。精子活率是精液品質(zhì)評定的一個重要指標，因為它與受精率高度相關(guān)。

精子活率是一個經(jīng)常評定的指標，一般在采精后、精液稀釋后、降溫平衡后、冷凍后、解凍后、輸精前都要評定。稀釋液中的卵黃、甘油和乳汁等會使精子的運動速度減慢，但并不影響精子活率。

精子活率評定常采用目測法，主觀性強是其主要缺點。評定時借助光學顯微鏡放大200～400倍，在37～40℃的環(huán)境下（保溫箱、電熱恒溫板），對精液樣品中前進運動精子所占百分率進行估測。采用0～1.0的10級評分標準。100％直線前進運動者為1.0分，90％直線前進運動者為0.9分，以此類推。

各種家畜鮮精活率一般在0.7～0.8左右，輸精用的液體保存精液一般應在0.5以上，冷凍精液活率應在0.3以上。為看清單個的精子的運動情況，在評定精子活率時應對精液樣品用等滲的稀釋液進行稀釋，牛、羊通常稀釋100倍，豬、馬需稀釋10倍?？捎蒙镫娨曪@微鏡多人評價。（二）精子密度1、目測法

與檢查活率的方法相同，往往與觀察活率同時進行，只是精液不作稀釋，按照精子密度的大小粗略分為密、中、稀三個等級。密：整個視野內(nèi)充滿精子，很難見到單個精子，幾乎看不到空隙。牛,10-20億/ml;羊,25億/ml以上;豬、馬,2億/ml以上.中：視野內(nèi)精子之間有相當于一個精子長度的空隙，可見到單個精子活動。牛，8-10億/ml；羊，20-25億/ml;豬、馬,1-2億/ml。?。阂曇皟?nèi)精子之間空隙很大，超過一個精子長度的空隙，可查數(shù)到精子的個數(shù)。牛，8億/ml以下；羊，20億/ml以下；豬、馬,1億/ml以下.2、計數(shù)法

用血細胞計數(shù)法可準確的測定每毫升精液中的精子數(shù)量。

3、光電比色計測定法根據(jù)精子數(shù)越多，精子濃度越高，其透光性越低的特性，利用光電比色計通過反射光和透光度來估測精子密度。

（三）精子形態(tài)1、精子畸形率畸形精子是指精液中形態(tài)不正常的精子，精子畸形率是精液中畸形精子數(shù)占精子總數(shù)的百分率。a.正常精子b.游離原生質(zhì)滴c.各類畸形精子d.頭部脫離e.附有原生質(zhì)滴f.附有遠端原生質(zhì)滴g.尾部扭曲h.頂體脫落

大多數(shù)公畜的精液都有一定比例的畸形精子，正常精液的精子畸形率一般不超過20％，優(yōu)秀精液的畸形率必須在一定數(shù)量之下：牛18％，水牛15％，羊14％，豬18％，馬12％。精子畸形率檢測方法：取一小滴被測精液，在載玻片上制成抹片，用0.5%龍膽紫酒精或藍墨水染色3min，自然干燥、酒精固定、水洗后在400倍顯微鏡下觀察，檢查不同視野的精子數(shù)（不少于200個），計算出畸形精子百分率。也可和血細胞計數(shù)計算精子數(shù)同時進行。精子抹片示意圖人工授精中心的常規(guī)檢查中，畸形精子的分類：頭部畸形或頭尾分離;

精子尾部中段的前段、中部或末端附著

有原生質(zhì)小滴;

尾部卷圈或彎曲和其他形式畸形。2、精子頂體異常率精子頂體異常率是指精液中頂體異常的精子數(shù)占精子總數(shù)的百分率。應特別注意頂體異常情況，因為頂體在受精過程中起重要作用。出現(xiàn)異常的原因:可能和精子生產(chǎn)過程和副性腺分泌物異常有關(guān)。精液在體外保存時間過長，遭受低溫打擊，特別是冷凍方法不當?shù)仍蛟斐傻摹?/p>

在正常情況下牛的頂體異常率為5.9%，豬為2.3%，牛超過14％，豬超過4.3%會直接影響其受精率。精子頂體異常有：膨大、缺陷、部分脫落、全部脫落等數(shù)種。

檢查方法：抹片，自然干燥，用1～2ml福爾馬林磷酸緩沖液固定。對含有卵黃、甘油的精液樣品需用含2%甲醛的檸檬酸鈉液固定。靜置15min，水洗后用吉姆薩染液染色90min或用蘇木精染液染色15min，水洗、干燥后再用0.5%伊紅染液復染2～3min。水洗、干燥后置于1000倍顯微鏡下用油鏡檢查，或用相差顯微鏡觀察。每張抹片需觀察300個精子，統(tǒng)計出精子頂體異常率。三、精液的細菌學檢查目前國內(nèi)外都十分重視精液的微生物檢查，精液中含有的病原微生物及菌落數(shù)已列入精液品質(zhì)評定的重要指標，并作為海關(guān)進口精液的重要檢驗項目。方法：將一支細管精液用37℃水浴解凍后，注入滅菌平皿，然后將涼至50℃左右的普通瓊脂以無菌操作倒入平皿內(nèi)，每皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使精液混合均勻，同時作空白對照平皿，待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)36h取出，計數(shù)平皿內(nèi)菌落數(shù)。每頭公牛樣品取二支做兩個平皿，取平均值。我國牛冷凍精液國家標準規(guī)定，解凍后的精液應無病原微生物，每劑量精液經(jīng)培養(yǎng)后觀察到的細菌菌落數(shù)≤800個。隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，PCR技術(shù)也已應用到精液病原微生物的檢測中。第四節(jié)精液的稀釋目的：1、

擴大精液量，增加與配母畜頭數(shù)；2、供給精子代謝的營養(yǎng)，防止精子遭受冷打擊；3、緩沖不良環(huán)境的危害，抑制細菌的繁衍，延長精子的存活時間；4、便于精液的保存和運輸，提高優(yōu)良種公畜的利用率。一、稀釋液的主要成分及其作用（一）能量物質(zhì)果糖、葡萄糖等單糖，以及卵黃和奶類（鮮全奶、脫脂乳或純奶粉）等。（二）保護性物質(zhì)1.緩沖物質(zhì)檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，三羥甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）等。2.抗凍物質(zhì)抗凍物質(zhì)有甘油、乙二醇、DMSO等，還有卵黃、奶類等作為防冷保護物質(zhì)。3.抗菌物質(zhì)青、鏈霉素以及氨苯磺胺等。（三）其他添加劑1.酶類如過氧化氫酶能分解精子代謝過程中產(chǎn)生的過氧化氫，消除其危害，維持精子活率；β淀粉酶促進精子獲能，提高受胎率。2.激素類催產(chǎn)素、前列腺素等。3.維生素類如VB1、VB2、VB3、VC等，能提高精子或率。

二、精液稀釋液的種類、配制方法及注意事項（一）精液稀釋的種類

1、現(xiàn)用稀釋液

適用于鮮精配種。常用具有等滲透壓的糖類和奶類，也可用生理鹽水。在生產(chǎn)第一線常用這種稀釋液。2、常溫保存稀釋液

適用于室內(nèi)的短期常溫保存，以糖類和弱酸鹽為主體，具有pH值較低的特點。3、低溫保存稀釋液

適用于精液的低溫保存，以卵黃和奶類為主要成分，具有抗冷休克的作用。4、冷凍保存稀釋液

適用于精液的超低溫冷凍保存，成分復雜，除含有糖類、卵黃外，還要加入甘油、乙二醇或二甲基亞砜等抗凍物質(zhì)。配制復雜，多種稀釋液分步稀釋。（二）稀釋液的配制方法和注意事項稀釋液的種類很多，要根據(jù)實際情況合理選擇，現(xiàn)用現(xiàn)配。1、所用的用具、容器必須洗滌干凈、消毒，用前經(jīng)稀釋液沖洗。2、稀釋液必須保持新鮮?？蓪缇拿芊庀♂屢褐糜诒鋬?nèi)保存數(shù)日。但卵黃、奶類、活性物質(zhì)及抗生素必須用時加入。3、所用的水必須清潔無毒。蒸餾水或去離子水要求新鮮，使用沸水應在冷卻后用濾紙過慮。4、藥品成分要純凈。一般用化學純或分析純制劑，配制時稱量要準確，溶解要充分，過慮后消毒。5、使用的奶類應在水浴中滅菌（90～95℃）10min，除去奶皮；卵黃要取自新鮮雞蛋，取前要對蛋殼消毒。6、抗生素、酶類、激素、維生素等必須在稀釋液冷卻至室溫時，按用量準確加入。三、精液稀釋和稀釋倍數(shù)（一）精液的稀釋方法及注意事項1、稀釋應在采精后立即進行。未經(jīng)稀釋的精液很難存活較長時間。2、確定稀釋倍數(shù)。3、所有用具在稀釋前必須用稀釋液清洗。4、稀釋液溫度應與精液溫度一致，在稀釋過程中要防止溫度突然升降。5、稀釋時，將稀釋液沿瓶壁緩緩倒入精液中，輕輕轉(zhuǎn)動，混合均勻，忌不可把精液往稀釋液里倒。6、如做高倍稀釋，應分次進行，先低倍稀釋，后稀釋到高倍。7、稀釋后要進行鏡檢，活力不能有明顯下降。（二）精液稀釋倍數(shù)

精液稀釋倍數(shù)應根據(jù)動物種類及其采精量、精子密度、精子活率等來確定。適當倍數(shù)可延長精子的存活時間，過高會使精子存活時間縮短，從而影響受胎率。牛10～40倍，在保證每個輸精劑量（凍精）含有1000萬有效精子的前提下可適當提高稀釋倍數(shù)；羊的精液采精后數(shù)小時用完，習慣上稀釋2～4倍，根據(jù)當天的發(fā)情羊數(shù)調(diào)整；豬一般稀釋2～4倍；馬、驢的精液受精力下降很快，應在采精的當天或次日使用，一般稀釋2～3倍；禽類一般稀釋2～3倍，如用PBSE稀釋液可做高倍稀釋10倍稀釋，受精率仍可達90％以上。第五節(jié)精液的保存常溫保存低溫保存冷凍保存：固態(tài)液態(tài)一、液態(tài)精液的保存（一）精液的常溫保存

是指將精液保存在室溫（15～25℃）下，也稱變溫保存。這種方法保存的精液在3d內(nèi)有正常的受精能力，因設(shè)備簡單，便于普及推廣，特別適宜豬的精液保存。1、原理

利用稀釋液的弱酸環(huán)境或凍膠環(huán)境抑制精子的活動，減少能量消耗，使精子保持在可逆的靜止狀態(tài)下而不失受精能力；另外，補充能量物質(zhì)延長精子存活時間，加抗菌物質(zhì)抑制微生物對精子的有害作用。方法：（1）向稀釋液中沖入CO2；(2)利用精子自身產(chǎn)生的CO2，自行調(diào)節(jié)PH；(3)在稀釋液中配有酸類物質(zhì)和沖以氮氣等。不同的方法有相應的稀釋液。2、稀釋液見書中的表格。雞的精液可用簡單的無緩沖稀釋液，生理鹽水或復方生理鹽水。3、保存方法按輸精劑量分裝，封口后放在室內(nèi)、地窖或自來水中保存。4、注意事項切記要加入抗生素；保存溫度要恒定，不能超過25℃；pH值不能太低，弱酸性即可。（二）、精液的低溫保存

精液的低溫保存是將精液放在0～5℃下保存，效果比常溫保存要好（豬除外），一般可保存7d左右不喪失受精能力。1、原理

利用低溫來抑制精子活動，降低代謝和運動的能量消耗。當溫度回升后，精子又逐漸恢復正常代謝機能而不喪失受精能量。2、稀釋液見書3、保存方法

稀釋液中加入卵黃，緩緩降溫（從30℃至5～0℃時0.2℃/min左右為宜）后，按一個輸精劑量分裝至貯精瓶中，封口。用數(shù)層紗布或棉花包裹，置于0～5℃的低溫下保存。輸精前要升溫，可將貯精瓶直接放到30℃的環(huán)境中。4、注意事項最好加入抗生素；保持溫度恒定；必須加入卵黃，防止冷休克發(fā)生。二、精液的冷凍保存（一）冷凍導致精子死亡的原因冰晶是造成冷凍精子死亡的主要因素。精液冷凍過程中對精子的傷害主要有兩個方面：1、化學傷害冰晶化是水在降溫過程中的一定溫度條件下，水分子重新按幾何圖形排列形成冰晶的過程。冰晶使精子膜內(nèi)的溶質(zhì)濃度和滲透壓增高，水由精子內(nèi)向外滲透，造成精子細胞脫水，從而使精子細胞發(fā)生不可逆的化學毒害而死亡。2、物理傷害精子水分形成冰晶，其體積增大且形狀不規(guī)則，由于冰晶的擴展和移動，造成精子膜和細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的機械損傷，引起精子死亡。精子水分冰晶化、玻璃化圖冰晶化只有當溫度在0～-60℃溫度范圍內(nèi)，緩慢降溫條件下形成，降溫越慢冰晶越大，-15～-25℃時形成冰晶最多，對精子危害最大。在冷凍精液過程中，只有避開0～-60℃這個有害溫度區(qū)，才利于精子長期保存。（二）精液冷凍保存的原理精液經(jīng)過特殊處理后在超低溫下形成玻璃化。玻璃化中的水分子能保持原來的無序狀態(tài)，形成純粹玻璃樣的超微粒結(jié)晶，從而避免了原生質(zhì)脫水和膜結(jié)構(gòu)遭受破壞，使解凍后仍可恢復活力。在稀釋液中添加的抗凍物質(zhì)，如甘油、二甲基亞砜等物質(zhì)能增強精子的抗凍能力，對防止冰晶發(fā)生起重要作用。甘油親水性很強，它可在水結(jié)晶過程中限制和干擾水分子晶格的排列，降低了水形成結(jié)晶的溫度。（三）精液冷凍保存稀釋液1、牛精液冷凍保存稀釋液主要有：卵黃－檸檬酸鈉－甘油液；卵黃－糖類－甘油液；奶類－甘油液。2、豬精液冷凍保存稀釋液一般采用以葡萄糖、乳糖、甘油為主要成分的稀釋液。甘油濃度1～3％為宜。不少配方中加入乙二胺四乙酸（EDTA）有良好作用。3、馬、綿羊精液冷凍保存稀釋液一般采用糖類（葡萄糖、果糖、乳糖、棉籽糖、蔗糖）、乳類、卵黃、甘油為主要成分。（四）精液冷凍技術(shù)（制作過程）1、精液的品質(zhì)檢查2、精液的稀釋3、降溫和平衡4、分裝、凍結(jié)和保存1、精液的品質(zhì)檢查

將采集的新鮮精液置于37～40℃下，迅速檢測精液品質(zhì)，精液活率不得低于0.7，精子密度要大，畸形率要低，以上三個指標必須達到畜種的優(yōu)質(zhì)精液要求。馬、驢、豬和山羊的精液要做過慮或離心處理，豬的精液要取濃份成分。2、精液的稀釋1）.一次稀釋法快捷但甘油毒害大2）.二次稀釋法

稀釋一半（無甘油）1小時緩慢降溫（30℃→5℃）等溫稀釋（甘油）3、降溫和平衡⑴降溫1-2h緩慢降溫（30℃→5℃）⑵平衡5℃的精液在冰箱中（5℃）放置1-2h4、分裝、凍結(jié)和保存分裝方法：顆粒、細管、安瓶和袋裝凍結(jié)：⑴干冰法⑵液氮熏蒸法⑶儀器冷凍法下降4℃/min(5—-60℃)，投入液氮（-196℃）保存：干冰、液氮

312為上海金暉家畜遺傳開發(fā)有限公司代號，ND為南德文公牛的品種代號，010325為2001年3月25日的生產(chǎn)日期代號，98002為該公牛身份證號碼ND31298002的后五位數(shù)。

冷凍精液生產(chǎn)過程：5、解凍與輸精（1）解凍冷凍精液解凍的溫度有三種：低溫冰水解凍（0～5℃）、溫水解凍（35～40℃）、高溫水解凍（50～70℃）。生產(chǎn)中常用的效果較好的是溫水解凍。將細管直接投入35～40℃溫水中。顆粒的將1ml解凍液裝入滅菌細管內(nèi)，置于30～40℃溫水中預熱，然后投入1粒凍精，搖動至融化。（2）輸精用于輸精的冷凍精液，解凍后鏡檢活率不得低于0.3，解凍后要及時輸精。第六節(jié)輸精一、輸精前的準備（一）輸精器械的準備（二）精液的準備（三）母畜的準備（四）輸精員的準備二、輸精要求（一）輸精量及其所含有效精子數(shù)

輸精量及其所含有效精子數(shù)應根據(jù)母畜、禽的年齡和生理狀況及精液類型而定?？傇瓌t：對體型大、經(jīng)產(chǎn)、產(chǎn)后配種和子宮松弛的母畜，適當增加輸精量；與正常配種母畜相比，經(jīng)超數(shù)排卵處理的母畜應增加輸精次數(shù)和輸精量；液態(tài)保存的輸精量一般要大于冷凍精液的輸精量，顆粒的要大于細管的。有效精子數(shù)的問題。（二）適宜輸精時間

是根據(jù)排卵時間和進入母畜生殖道內(nèi)精子獲能并保持受精能力的時間來決定。通常以發(fā)情鑒定的結(jié)果來確定適宜的輸精時間，應以接近排卵時刻為宜。

奶牛是在發(fā)情后的10～20h，生產(chǎn)上是早發(fā)完配，晚發(fā)第二天早配，有經(jīng)驗的配種員一是根據(jù)發(fā)情時間，另一根據(jù)直檢的結(jié)果判定輸精時間。

母馬的發(fā)情持續(xù)期較長5～7d，發(fā)情開始后的2～3d才排卵，所以一般是發(fā)情第2～3d配種，隔日再輸精一次；母豬是在接受“壓背”試驗，或接受公豬爬跨時輸精，隔日再輸精一次。母羊根據(jù)試情來確定。（三）輸精次數(shù)和間隔時間一般是8～10小時。豬12～18h;雞4～5d；鴨5～7d；鵝5～6d。（四）輸精部位

輸精部位也和動物種類不同而異。牛采用子宮頸深部或子宮體輸精；馬、驢采用子宮內(nèi)輸精；山羊、綿羊采用子宮頸淺部輸精；禽類一般采用插入陰道輸精。各種家畜的輸精要求

項目牛、水牛馬、驢豬綿、山羊兔液態(tài)冷凍液態(tài)冷凍液態(tài)冷凍液態(tài)冷凍液態(tài)冷凍輸精劑量(ml)1-20.2-1.015-3030-4030-4020-300.05-0.10.1-0.20.2-0.50.2-0.5輸入有效精子數(shù)（億）0.3-0.50.1-0.22.5-5.01.5-3.0