第7章

細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法LaboratoryDiagnosisofBacterialandViralInfectionsInstructorinMicrobiologyDept.ofHMUNov.6,2009病原學(xué)檢查程序標(biāo)本分離培養(yǎng)鑒定怎么辦培養(yǎng)基制備細(xì)菌培養(yǎng)法三段劃線、純培養(yǎng)無(wú)菌技術(shù)油鏡使用、細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察革蘭染色法生化反應(yīng)觀察藥敏試驗(yàn)血清學(xué)診斷核酸檢測(cè)標(biāo)本染色鏡檢血平板觀察可疑菌落染色鏡檢純培養(yǎng)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)?zāi)蜔岷怂崦冈囼?yàn)動(dòng)物試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)化膿性球菌的分離鑒定程序MicrobiologyLab標(biāo)本的采集與送檢原則無(wú)菌操作感染部位、病變部位采集標(biāo)本不同時(shí)間采集不同標(biāo)本盡量在使用抗生素前采集檢查特異性抗體，采急性期和恢復(fù)期雙份血清及時(shí)送檢第一節(jié)細(xì)菌感染的微生物血檢查法形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌染色檢查法暗視野檢查形態(tài)和染色性有明顯特征的病原菌革蘭染色結(jié)果比較抗酸染色革蘭染色陽(yáng)性菌革蘭染色陰性菌（葡萄球菌）（大腸埃希菌）結(jié)核分枝桿菌

M．Tuberculosis確定細(xì)菌性感染最可靠的方法培養(yǎng)特征形態(tài)特征

病原菌的分離和鑒定：Flamesterilizewireloop,metalforceps,etcbeforeandafteruseinahoodedBunsenburner糖發(fā)酵試驗(yàn)H2S試驗(yàn)枸櫞鹽利用試驗(yàn)細(xì)菌代謝產(chǎn)物的檢測(cè)得到細(xì)菌純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)等對(duì)細(xì)菌的酶系統(tǒng)和其代謝產(chǎn)物的檢查，是鑒別細(xì)菌的重要方法之一。特別是有些細(xì)菌特征基本相同，因此有必要經(jīng)分離培養(yǎng)后用生化試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。但步驟繁雜耗時(shí)。隨著現(xiàn)代化技術(shù)的發(fā)展，細(xì)菌檢測(cè)的技術(shù)水平也不斷地提高，正在逐步實(shí)現(xiàn)快速化、微量化、自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化。生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對(duì)細(xì)菌（志賀菌屬、沙門(mén)菌屬）進(jìn)行群和型的鑒別常用方法是玻片凝集試驗(yàn)毒力檢測(cè)半數(shù)致死量LD50

半數(shù)感染量ID50Elek平板

紙碟法試管法小杯法凹孔法

最低抑菌濃度（MIC）是能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度；最低殺菌濃度（MBC）是指能夠殺滅細(xì)菌最低藥物濃度；MIC和MBC的值越低，表示細(xì)菌對(duì)該藥越敏感藥物敏感試驗(yàn)二、病原菌成分檢測(cè)抗原的檢測(cè)用已知的特異性抗體檢測(cè)未知的細(xì)菌抗原成分核酸的檢測(cè)核酸雜交PCR細(xì)菌核酸的檢測(cè)基因探針DNA印跡雜交(southernblot)質(zhì)粒指紋圖譜分析PCRPCRMachine聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）PCR產(chǎn)物的檢測(cè)三、抗體的檢測(cè)輔助診斷抗體存在于血清或其他體液中

Immunologyevaluatesapatientimmunesystembydetectingthebodiesresponse(anantibody)toaforeignagent(orantigen).Thepresenceofantigenscanbedetectedtoo細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷血清學(xué)試驗(yàn)舉例凝集試驗(yàn)肥達(dá)反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)鉤體病中和試驗(yàn)抗O試驗(yàn)HANAAinHand

Aboutthesizeofabrick,theHANAAbiodetectionsystemcanbeheldinonehandandweighslessthanakilogram.Thesystemwasdesignedforemergencyresponsegroups,suchasfirefightersandpolice,whoareoftenfirstonthesceneatsiteswherebioterrorismmayhaveoccurred.Eachhandheldsystemcantestfoursamplesatonce—eitherthesametestonfourdifferentsamplesorfourdifferenttestsonthesamesample.HANAAcanprovideresultsinlessthan30minutes,comparedwiththehourstodaysthatregularlaboratoryteststypicallytake.

BioSensorsThistechniqueisessentiallyanELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)method,howeverwithanextremelysensitiveall-electronicdetectionsystem.Tinycomputerchipcandetecttoxins

The"labonachip,"itsdeveloperssay,couldhavepotentialapplicationsinlawenforcement,environmentalpollutiondetection,militarymedicalcare,orforanyonewhoneedsacheapandportablemethodofidentifyingthepresenceofspecifictoxinsorDNAwithoutthebenefitofalaboratory.

"Thisdevicecouldbedevelopedintosomethingmedicsuseinthefieldtogetanswersinamatterofminutesratherthanhours."Researchonthefluorescencemicroscopydetectionsystem,whichprovidesacheapandportablemethodforidentifyingspecifictoxinsorDNA,wasfundedbytheNationalScienceFoundation.

UCBERKELEYPHOTO第二節(jié)

病毒感染的微生物學(xué)檢測(cè)法

一、形態(tài)學(xué)檢查電子顯微鏡光學(xué)顯微鏡

內(nèi)基小體（Negribody），可輔助診斷狂犬病掃描電鏡透射電鏡狂犬病病毒天花病毒

冠狀病毒

SARS冠狀病毒二、病毒分離培養(yǎng)的方法采集標(biāo)本抑制雜菌（青、鏈霉素）病毒分離易感動(dòng)物----出現(xiàn)病狀雞胚------病變或死亡細(xì)胞培養(yǎng)---細(xì)胞病變病毒鑒定（血清學(xué)方法）動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞二倍體細(xì)胞傳代細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)三、病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的鑒定指標(biāo)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect，CPE）

紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）紅細(xì)胞凝集（hemagglutination）病毒干擾作用（viralinterference）中和試驗(yàn)（neutralizationtest，NT）正常細(xì)胞病變細(xì)胞病毒的定量TCID50病毒感染性和毒力的指標(biāo)是50%組織細(xì)胞感染量（50%tissuecultureinfectiousdose）PFU空斑形成試驗(yàn)（plaqueformation）用于病毒濃度的精確定量空斑形成試驗(yàn)紅細(xì)胞吸附hemadsorption

病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖，病毒或其血凝素會(huì)出現(xiàn)于感染細(xì)胞膜上，使感染細(xì)胞能與紅細(xì)胞結(jié)合。檢測(cè)正粘病毒和副粘病毒的間接指標(biāo)Hemadsorptionofmonkeyredbloodcells紅細(xì)胞凝集hemagglutination

一種檢測(cè)含血凝素病毒的方法四、病毒成分的檢測(cè)病毒核酸的檢測(cè)

核酸雜交技術(shù)核酸擴(kuò)增技術(shù)基因芯片（genechip）病毒抗原的檢測(cè)熒光標(biāo)記技術(shù)、ELISA或放射免疫標(biāo)記技術(shù)將已知的抗病毒血清先與病毒懸液混合在一起，在一定溫度條件下作用一定時(shí)間后，接種于敏感細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，觀察病毒致細(xì)胞病變作用或