UPLC儀器操作指南ACQUITYUPLCTM儀器簡介二元高壓梯度系統(tǒng)(BSM)

4種溶劑可選(實(shí)際運(yùn)行中只用兩種)

每臺泵均為Alliance專利設(shè)計(jì)每臺泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)自動進(jìn)樣器(針內(nèi)針設(shè)計(jì))(SM)

常規(guī)2×48位樣品盤使用2ml進(jìn)樣瓶高采樣速率的TUV或PDA及ELSD檢測器

采樣速率最高可達(dá)80點(diǎn)／秒儀器須在軟件控制下運(yùn)行(Empower或Masslynx)開機(jī)程序制備新鮮流動相打開計(jì)算機(jī)及網(wǎng)絡(luò)集線器電源,進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)打開泵和進(jìn)樣器電源,待通過自檢后打開MassLynx軟件打開控制臺界面(在InletMethod界面AcquityAdditionalStatus右側(cè))進(jìn)行儀器的Startup功能(若是與以前相同的流動相且儀器停用時(shí)間并不長,只需做refresh功能)設(shè)定0.1ml/min流速平衡色譜柱及系統(tǒng)(有液體流出)打開TUV(PDA)檢測器電源ACQUITY

UPLCTM開機(jī)操作打開計(jì)算機(jī)電源,進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)打開Hub(網(wǎng)絡(luò)集線器)電源打開ACQUITYUPLCBSM和SM電源先不要開TUV或PDA電源光學(xué)檢測器的電源需待流動池內(nèi)充滿液體后再打開待各儀器設(shè)備通過自檢后(綠燈長亮),打開MassLynx軟件打開液相狀態(tài)/控制/方法編輯畫面點(diǎn)擊ACQUITYUPLC控制按鈕點(diǎn)擊此按鈕SM樣品管理器控制面板實(shí)際柱溫柱溫設(shè)定樣品管理器實(shí)際溫度樣品管理器溫度設(shè)定控制臺圖標(biāo)TUV檢測器控制面板紫外吸光度紫外吸收波長檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈PDA檢測器控制面板檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈ACQUITY控制臺窗口ACQUITY

Console

二元溶劑管理器ACQUITY

Console

樣品管理器ACQUITY

Console

色譜柱診斷–eCord?ACQUITY

Console

TUV檢測器ACQUITY

Console

PDA檢測器ACQUITY

Console

診斷–圖型顯示ACQUITY

Console

診斷–維修計(jì)數(shù)器ACQUITY

Console

診斷–維修計(jì)數(shù)器

PrimeSealwash的步驟將Sealwash出口端從廢液盤上摘下,連接到注射器上選擇

Control>PrimeSealwash,點(diǎn)擊之PrimeSealwash的步驟點(diǎn)擊后,可以聽到Sealwash閥的開關(guān)聲.此時(shí):慢慢抽注射器,直到有液體流出,然后將出口管再接回到廢液盤上或者取下吸濾頭,用吸滿清洗液的注射器,從入口端注入清洗液,直至出口管有液體流出點(diǎn)擊可停止Prime過程選擇A1(或A2)、B1(或B2)，時(shí)間設(shè)定為3分鐘，按start按鈕BSM濕灌注的步驟SM樣品管理器的準(zhǔn)備做過BSM的wetprime之后，要準(zhǔn)備樣品管理器，準(zhǔn)備樣品管理器包括如下步驟(新安裝儀器時(shí))：灌注(PrimingSyringe)注射器檢查確認(rèn)密封

(Characterizingtheseal)檢查確認(rèn)進(jìn)樣針和定量環(huán)體積

(Characterizingtheneedleandsampleloopvolumes)加載(Loading)樣品盤SM樣品管理器的準(zhǔn)備灌注SM注射器和進(jìn)樣針灌注進(jìn)樣針和樣品注射器的目的是:準(zhǔn)備樣品管理器沖洗里面的進(jìn)樣針、外部的刺穿針，和進(jìn)樣口部分排除管路中的氣泡注：在灌注過程中，用溶劑充滿進(jìn)樣針，在改變?nèi)軇?，或者排除管路中的氣泡時(shí)，需進(jìn)行灌注進(jìn)樣針和樣品注射器提示:確保用于灌注的溶劑有合適的組成,它應(yīng)該是高純的,并且?guī)追N溶劑是互溶的所有的試劑瓶都要使用濾頭,并確保溶劑體積足夠用于做灌注,例如,作5次灌注,每種溶劑要用去大約20mL要求:在檢定密封之前必須先完成對樣品管理器的灌注

灌注SM注射器和進(jìn)樣針操作從左邊的目錄中，選擇SampleManager,單擊

Control>Primesyringes

出現(xiàn)PrimeSyringes對話框選擇“Samplesyringeandwashsyringes”

在Numberofcycles中輸入要作灌注的次數(shù)

(默認(rèn)值為

1)(建議:如果更換溶劑，建議做5－7次灌注)單擊

OK.當(dāng)系統(tǒng)狀態(tài)是“Idle(待機(jī)),”

就表示灌注做完了提示:每做一次灌注大約需要2－4分鐘灌注SM注射器操作沖洗進(jìn)樣針步驟在控制臺的SampleManager窗口,單擊Control>WashNeedle

出現(xiàn)WashNeedle對話框輸入需要的強(qiáng)洗針液的體積.默認(rèn)為:

0.0μL

提示:同時(shí)使用強(qiáng)洗針液和弱洗針液會增加時(shí)間和溶劑的消耗,因?yàn)橄到y(tǒng)在下一次進(jìn)樣之前必須將強(qiáng)洗針液完全除去在弱洗針框中輸入弱洗針液的體積,

默認(rèn)值:200.0μL

建議值:200到500μL

單擊OK.開始洗針過程當(dāng)洗針過程完成時(shí),回到“Idle”狀態(tài)洗針未完成時(shí)中斷,可以點(diǎn)擊Control中的ResetSM沖洗進(jìn)樣針(WashNeedle)沖洗進(jìn)樣針是一項(xiàng)可選程序，它是讓強(qiáng)洗針液和/或弱洗針液通過進(jìn)樣針和進(jìn)樣口部分清洗進(jìn)樣針可以去掉進(jìn)樣針、刺穿針和進(jìn)樣口的外部和內(nèi)部的殘留可以通過進(jìn)行沖洗針的操作來探知通過廢液管的流路是否通暢,以及確證洗針系統(tǒng)是否被灌注并運(yùn)行正常

要求:不要使用緩沖鹽作為洗針液.

提示:灌注系統(tǒng)已包含沖洗進(jìn)樣針,所以只要做了灌注系統(tǒng),就可以省略此步操作

沖洗進(jìn)樣針(WashNeedle)特別提示:

不能讓強(qiáng)洗針液接觸樣品弱洗針液要與流動相一致,或與初始梯度相同如果稀釋樣品，弱洗針液應(yīng)與稀釋樣品的溶劑相同用于洗針的有機(jī)溶劑種類應(yīng)與色譜使用的有機(jī)溶劑一致

經(jīng)驗(yàn)規(guī)則:

在洗針過程中應(yīng)確保強(qiáng)洗針液完全被弱洗針液所取代洗針程序會先用強(qiáng)洗針液洗針,再用一定體積弱洗針液去洗針(其默認(rèn)體積是200μL),可以增加弱洗針液的體積,但不能減少.一般需要3倍于強(qiáng)洗針液體積選擇清洗進(jìn)樣針的溶劑弱洗針液和強(qiáng)洗針液的選擇取決于樣品和所使用的流動相,

確保流動相和緩沖液是互溶的要想得到好的柱效，弱洗針液必須等同于初始梯度的流動相等度時(shí)和流動相比例相同不推薦緩沖鹽作為弱洗針液

推薦的弱洗針液和強(qiáng)洗針液如下表:色譜條件弱洗針溶劑強(qiáng)洗針溶劑反相/緩沖鹽溶液100%H2O或

0到

25%甲醇或乙腈50%到100%甲醇或乙腈柱溫箱(加熱器)柱加熱器(ColumnHeater,C/H)置于S/M的頂部同時(shí)也是SampleManager的頂蓋當(dāng)使用MassSpec時(shí),柱加熱器可以從原來的位置外轉(zhuǎn)180度這種設(shè)計(jì)是為了使S/M和C/H以及C/H和檢測器(或質(zhì)譜)之間的連接管路更短,以盡量地減小擴(kuò)散體積色譜柱前預(yù)熱穩(wěn)定器預(yù)熱穩(wěn)定器會減小對環(huán)境溫度波動的敏感度,并減小/最小化譜帶展寬新的襯墊(和淺盤)使之較易于安裝/移動預(yù)熱穩(wěn)定器P/N–205000291柱預(yù)熱穩(wěn)定器組件包色譜柱前在線過濾器用于ACQUITYUPLC?色譜柱的In-LineFilter(在線過濾器)部件號P/N–205000343色譜柱出口管整體式配件,手指擰緊即可截取0.0025〃長的一段PEEK管盡可能短的管路以盡量減小擴(kuò)散它在啟動包(startupkit)中,不是普通部件啟動TUV(PDA)檢測器確保檢測池中充滿溶劑并且沒有氣泡.如果檢測池中有氣泡,檢測器就不能很好的初始化,并有可能損壞檢測池打開檢測器電源.檢測器會發(fā)出嘀嘀嘀三聲響，并進(jìn)行一系列自檢.電源和氘燈的指示燈都會不停地閃爍。初始化大概需要2分鐘。燈預(yù)熱大概需要3分鐘當(dāng)指示燈常綠不閃爍時(shí),通過監(jiān)測控制臺來測量和觀察信號。要得到好的數(shù)據(jù)，需要30分鐘的時(shí)間平衡檢測器和穩(wěn)定基線預(yù)設(shè)維護(hù)提示快速選擇系統(tǒng)維護(hù)限制,可以從System中選擇MaintenanceCounter.預(yù)設(shè)維護(hù)提示設(shè)置樣