UPLC儀器操作指南ACQUITYUPLCTM儀器簡介二元高壓梯度系統(tǒng)(BSM)

4種溶劑可選(實際運行中只用兩種)

每臺泵均為Alliance專利設(shè)計每臺泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)自動進(jìn)樣器(針內(nèi)針設(shè)計)(SM)

常規(guī)2×48位樣品盤使用2ml進(jìn)樣瓶高采樣速率的TUV或PDA及ELSD檢測器

采樣速率最高可達(dá)80點／秒儀器須在軟件控制下運行(Empower或Masslynx)開機程序制備新鮮流動相打開計算機及網(wǎng)絡(luò)集線器電源,進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)打開泵和進(jìn)樣器電源,待通過自檢后打開MassLynx軟件打開控制臺界面(在InletMethod界面AcquityAdditionalStatus右側(cè))進(jìn)行儀器的Startup功能(若是與以前相同的流動相且儀器停用時間并不長,只需做refresh功能)設(shè)定0.1ml/min流速平衡色譜柱及系統(tǒng)(有液體流出)打開TUV(PDA)檢測器電源ACQUITY

UPLCTM開機操作打開計算機電源,進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)打開Hub(網(wǎng)絡(luò)集線器)電源打開ACQUITYUPLCBSM和SM電源先不要開TUV或PDA電源光學(xué)檢測器的電源需待流動池內(nèi)充滿液體后再打開待各儀器設(shè)備通過自檢后(綠燈長亮),打開MassLynx軟件打開液相狀態(tài)/控制/方法編輯畫面點擊ACQUITYUPLC控制按鈕點擊此按鈕SM樣品管理器控制面板實際柱溫柱溫設(shè)定樣品管理器實際溫度樣品管理器溫度設(shè)定控制臺圖標(biāo)TUV檢測器控制面板紫外吸光度紫外吸收波長檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈PDA檢測器控制面板檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈ACQUITY控制臺窗口ACQUITY

Console

二元溶劑管理器ACQUITY

Console

樣品管理器ACQUITY

Console

色譜柱診斷–eCord?ACQUITY

Console

TUV檢測器ACQUITY

Console

PDA檢測器ACQUITY

Console

診斷–圖型顯示ACQUITY

Console

診斷–維修計數(shù)器ACQUITY

Console

診斷–維修計數(shù)器

PrimeSealwash的步驟將Sealwash出口端從廢液盤上摘下,連接到注射器上選擇

Control>PrimeSealwash,點擊之PrimeSealwash的步驟點擊后,可以聽到Sealwash閥的開關(guān)聲.此時:慢慢抽注射器,直到有液體流出,然后將出口管再接回到廢液盤上或者取下吸濾頭,用吸滿清洗液的注射器,從入口端注入清洗液,直至出口管有液體流出點擊可停止Prime過程選擇A1(或A2)、B1(或B2)，時間設(shè)定為3分鐘，按start按鈕BSM濕灌注的步驟SM樣品管理器的準(zhǔn)備做過BSM的wetprime之后，要準(zhǔn)備樣品管理器，準(zhǔn)備樣品管理器包括如下步驟(新安裝儀器時)：灌注(PrimingSyringe)注射器檢查確認(rèn)密封

(Characterizingtheseal)檢查確認(rèn)進(jìn)樣針和定量環(huán)體積

(Characterizingtheneedleandsampleloopvolumes)加載(Loading)樣品盤SM樣品管理器的準(zhǔn)備灌注SM注射器和進(jìn)樣針灌注進(jìn)樣針和樣品注射器的目的是:準(zhǔn)備樣品管理器沖洗里面的進(jìn)樣針、外部的刺穿針，和進(jìn)樣口部分排除管路中的氣泡注：在灌注過程中，用溶劑充滿進(jìn)樣針，在改變?nèi)軇?，或者排除管路中的氣泡時，需進(jìn)行灌注進(jìn)樣針和樣品注射器提示:確保用于灌注的溶劑有合適的組成,它應(yīng)該是高純的,并且?guī)追N溶劑是互溶的所有的試劑瓶都要使用濾頭,并確保溶劑體積足夠用于做灌注,例如,作5次灌注,每種溶劑要用去大約20mL要求:在檢定密封之前必須先完成對樣品管理器的灌注

灌注SM注射器和進(jìn)樣針操作從左邊的目錄中，選擇SampleManager,單擊

Control>Primesyringes

出現(xiàn)PrimeSyringes對話框選擇“Samplesyringeandwashsyringes”

在Numberofcycles中輸入要作灌注的次數(shù)

(默認(rèn)值為

1)(建議:如果更換溶劑，建議做5－7次灌注)單擊

OK.當(dāng)系統(tǒng)狀態(tài)是“Idle(待機),”

就表示灌注做完了提示:每做一次灌注大約需要2－4分鐘灌注SM注射器操作沖洗進(jìn)樣針步驟在控制臺的SampleManager窗口,單擊Control>WashNeedle

出現(xiàn)WashNeedle對話框輸入需要的強洗針液的體積.默認(rèn)為:

0.0μL

提示:同時使用強洗針液和弱洗針液會增加時間和溶劑的消耗,因為系統(tǒng)在下一次進(jìn)樣之前必須將強洗針液完全除去在弱洗針框中輸入弱洗針液的體積,

默認(rèn)值:200.0μL

建議值:200到500μL

單擊OK.開始洗針過程當(dāng)洗針過程完成時,回到“Idle”狀態(tài)洗針未完成時中斷,可以點擊Control中的ResetSM沖洗進(jìn)樣針(WashNeedle)沖洗進(jìn)樣針是一項可選程序，它是讓強洗針液和/或弱洗針液通過進(jìn)樣針和進(jìn)樣口部分清洗進(jìn)樣針可以去掉進(jìn)樣針、刺穿針和進(jìn)樣口的外部和內(nèi)部的殘留可以通過進(jìn)行沖洗針的操作來探知通過廢液管的流路是否通暢,以及確證洗針系統(tǒng)是否被灌注并運行正常

要求:不要使用緩沖鹽作為洗針液.

提示:灌注系統(tǒng)已包含沖洗進(jìn)樣針,所以只要做了灌注系統(tǒng),就可以省略此步操作

沖洗進(jìn)樣針(WashNeedle)特別提示:

不能讓強洗針液接觸樣品弱洗針液要與流動相一致,或與初始梯度相同如果稀釋樣品，弱洗針液應(yīng)與稀釋樣品的溶劑相同用于洗針的有機溶劑種類應(yīng)與色譜使用的有機溶劑一致

經(jīng)驗規(guī)則:

在洗針過程中應(yīng)確保強洗針液完全被弱洗針液所取代洗針程序會先用強洗針液洗針,再用一定體積弱洗針液去洗針(其默認(rèn)體積是200μL),可以增加弱洗針液的體積,但不能減少.一般需要3倍于強洗針液體積選擇清洗進(jìn)樣針的溶劑弱洗針液和強洗針液的選擇取決于樣品和所使用的流動相,

確保流動相和緩沖液是互溶的要想得到好的柱效，弱洗針液必須等同于初始梯度的流動相等度時和流動相比例相同不推薦緩沖鹽作為弱洗針液

推薦的弱洗針液和強洗針液如下表:色譜條件弱洗針溶劑強洗針溶劑反相/緩沖鹽溶液100%H2O或

0到

25%甲醇或乙腈50%到100%甲醇或乙腈柱溫箱(加熱器)柱加熱器(ColumnHeater,C/H)置于S/M的頂部同時也是SampleManager的頂蓋當(dāng)使用MassSpec時,柱加熱器可以從原來的位置外轉(zhuǎn)180度這種設(shè)計是為了使S/M和C/H以及C/H和檢測器(或質(zhì)譜)之間的連接管路更短,以盡量地減小擴散體積色譜柱前預(yù)熱穩(wěn)定器預(yù)熱穩(wěn)定器會減小對環(huán)境溫度波動的敏感度,并減小/最小化譜帶展寬新的襯墊(和淺盤)使之較易于安裝/移動預(yù)熱穩(wěn)定器P/N–205000291柱預(yù)熱穩(wěn)定器組件包色譜柱前在線過濾器用于ACQUITYUPLC?色譜柱的In-LineFilter(在線過濾器)部件號P/N–205000343色譜柱出口管整體式配件,手指擰緊即可截取0.0025〃長的一段PEEK管盡可能短的管路以盡量減小擴散它在啟動包(startupkit)中,不是普通部件啟動TUV(PDA)檢測器確保檢測池中充滿溶劑并且沒有氣泡.如果檢測池中有氣泡,檢測器就不能很好的初始化,并有可能損壞檢測池打開檢測器電源.檢測器會發(fā)出嘀嘀嘀三聲響，并進(jìn)行一系列自檢.電源和氘燈的指示燈都會不停地閃爍。初始化大概需要2分鐘。燈預(yù)熱大概需要3分鐘當(dāng)指示燈常綠不閃爍時,通過監(jiān)測控制臺來測量和觀察信號。要得到好的數(shù)據(jù)，需要30分鐘的時間平衡檢測器和穩(wěn)定基線預(yù)設(shè)維護(hù)提示快速選擇系統(tǒng)維護(hù)限制,可以從System中選擇MaintenanceCounter.預(yù)設(shè)維護(hù)提示設(shè)置樣