實(shí)驗(yàn)四常用的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼J(rèn)識(shí)染色方法鑒別細(xì)菌的局限性掌握幾種常用生化反應(yīng)的原理、方法和結(jié)果判斷實(shí)驗(yàn)菌種產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacterarogenes）大腸埃希菌（Escherichiacoli）普通變形桿菌（Proteusvulgaris）銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）O-F試驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)菌種接種到2支O-F管中在其中1支管中加入無(wú)菌液體石蠟，厚度0.5cm左右。35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。結(jié)果開口管加石蠟管結(jié)果黃色黃色發(fā)酵型（F）黃色綠色氧化型（O）綠色藍(lán)色產(chǎn)堿型VP試驗(yàn)

產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在堿性溶液中）生成二乙酰，后者可與含胍基的化合物反應(yīng)生成紅色化合物，稱VP試驗(yàn)陽(yáng)性。大腸埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VP陰性。

VP甲液：5%α－萘酚

VP乙液：40%KOH甲基紅試驗(yàn)

產(chǎn)氣腸桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液pH＞5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性，大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液呈酸性pH＜5.4，指示劑甲基紅呈紅色，稱甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性。枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)

能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)（BTB）由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)，此為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽(yáng)性。吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)）

含有色氨酸酶的細(xì)菌（如大腸埃希菌、變形桿菌等）可分解色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），若加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛，與吲哚結(jié)合形成玫瑰吲哚，呈紅色，稱吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。硫化氫試驗(yàn)

變形桿菌、乙型副傷寒沙門菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞鐵存在時(shí)，則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵，可借以鑒別細(xì)菌。尿素分解試驗(yàn)

變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，以酚紅為指示劑檢測(cè)呈紅色。

陽(yáng)性陰性

尿素酶試驗(yàn)

吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸櫞酸鹽利用（C）四種試驗(yàn)，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為IMViC試驗(yàn)。大腸埃希菌呈“++--”，產(chǎn)氣腸桿菌為“--++”。硝酸鹽還原的過(guò)程因細(xì)菌不同而異:有的細(xì)菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌；有的細(xì)菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細(xì)菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞菌等。硝酸鹽還原試驗(yàn)系測(cè)定還原過(guò)程中所產(chǎn)生的亞硝酸。試劑：甲液對(duì)氨基苯磺酸乙液α-奈胺結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。若加入試劑后無(wú)顏色反應(yīng)，可能是：①硝酸鹽沒(méi)有被還原，試驗(yàn)陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，這時(shí)應(yīng)在試管內(nèi)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗(yàn)為假陰性。若要檢查是否有氮?dú)猱a(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加一小倒管，如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮?dú)馍伞?/p>

過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)(觸酶試驗(yàn))原理：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。試劑：3％過(guò)氧化氫溶液。方法：取待測(cè)菌涂在玻片上，然后加3％過(guò)氧化氫數(shù)滴立即觀察結(jié)果。結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性?？耸想p糖鐵瓊脂（KIA）

葡萄糖∶乳糖＝1∶10鐵：枸櫞酸鐵銨指示劑：酚紅我們?nèi)藶榈陌迅邔哟砥咸烟?，斜面代表乳糖。葡（－）葡（＋）葡（＋）葡（＋）乳（－）乳（＋）乳（－）H2S（＋）乳（－）

克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）高層

高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在24小時(shí)內(nèi)不會(huì)被氧化，因此仍為黃色。結(jié)果高層－黃色斜面－紅色如葡萄糖＋，乳糖＋，則高層與斜面均為黃色（24小時(shí)內(nèi)）。如果延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，高層中的丙酮酸也會(huì)進(jìn)一步氧化，同時(shí)細(xì)菌利用蛋白質(zhì)后產(chǎn)堿性物質(zhì)越來(lái)越多，則高層也會(huì)變?yōu)榧t色。有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫

H2S＋Fe黑色的硫化亞鐵問(wèn)：有無(wú)葡萄糖－，乳糖＋的情況？為什么？MIU試驗(yàn)半固體M代表動(dòng)力I代表吲哚（靛基質(zhì)）U代表尿素結(jié)果觀察時(shí)先觀察有無(wú)動(dòng)力，試驗(yàn)管有無(wú)變紅（三分之二管變紅為尿素陽(yáng)性），然后加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛，觀察吲哚試驗(yàn)結(jié)果。思考題：KIA的試驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、用革蘭染色法觀察四種試驗(yàn)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征2、將四種試驗(yàn)細(xì)菌