基本要求

一、熟悉定量分析樣品的前處理方法二、定量分析方法特點(diǎn)三、掌握定量分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容。第1頁/共119頁第一頁，共120頁。

為什么要對定量分析的樣品進(jìn)行前處理？滿足所選分析方法對試樣的要求。第一節(jié)定量分析樣品的前處理方法第2頁/共119頁第二頁，共120頁。

1、一般情況下，原料藥選擇適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂?，即可以選擇相應(yīng)的分析方法進(jìn)行分析。

2、制劑，需要進(jìn)行的前處理主要是要除去制劑敷料以及共存的其他組分；或者使藥物溶解出來（如軟膏制劑）

3、含金屬、含鹵素藥物的分析時(shí)，如果利用金屬和鹵素的特征進(jìn)行分析，必須使該元素以無機(jī)結(jié)合狀態(tài)存在，需要在測定前進(jìn)行處理。本章的測定前處理僅涉及此部分內(nèi)容。

第3頁/共119頁第三頁，共120頁。

一、概述（一）含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：C—X第4頁/共119頁第四頁，共120頁。（二）含金屬有機(jī)藥物1、金屬原子不與碳原子直接相連，結(jié)合弱，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物。M-O2、金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固。M-C第5頁/共119頁第五頁，共120頁。以上的結(jié)合形式，有的結(jié)合力弱，不需要有機(jī)破壞既可以轉(zhuǎn)化為適合于分析的形式，有的結(jié)合力強(qiáng)，需要有機(jī)破壞才可以轉(zhuǎn)化為適合于分析的形式。第6頁/共119頁第六頁，共120頁。含金屬或鹵素的有機(jī)藥物

定量分析前的處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法第7頁/共119頁第七頁，共120頁。二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測定法;經(jīng)水解后測定法;經(jīng)還原分解后測定法第8頁/共119頁第八頁，共120頁。

（一）直接測定法適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬有機(jī)藥物或某些C—M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。

第9頁/共119頁第九頁，共120頁。1配位滴定法本法利用金屬離子可與EDTA形成配合物，用EDTA滴定。如明礬（KAl(SO4)2·12H2O

）含量的測定的含量測定第10頁/共119頁第十頁，共120頁。2氧化還原滴定法本法利用不同價(jià)態(tài)的金屬離子的氧化還原性，利用適當(dāng)?shù)牡味▌y定含量利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量例1富馬酸亞鐵的含量測定溶于熱的稀硫酸后釋放出亞鐵離子，用鈰量法測定第11頁/共119頁第十一頁，共120頁。富馬酸亞鐵

第12頁/共119頁第十二頁，共120頁。富馬酸亞鐵的含量測定取本品約0.3g，精密稱定，加稀硫酸15ml，加熱溶解后，放冷，加新沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液2滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于16.99mg。第13頁/共119頁第十三頁，共120頁。例2葡萄糖酸銻鈉的含量測定

在酸性條件下加入碘化鉀，用硫代硫酸鈉滴定，碘量法測定

第14頁/共119頁第十四頁，共120頁。

Sb5++2KISb3++2K+

++I2

I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

H+例2葡萄糖酸銻鈉的含量測定第15頁/共119頁第十五頁，共120頁。（二）經(jīng)水解后測定1、堿水解后測定法將含鹵素有機(jī)藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Volhard法）測定。用于含有機(jī)鹵化物中鹵素結(jié)合不牢固的藥物第16頁/共119頁第十六頁，共120頁。三氯叔丁醇的含量測定CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3△第17頁/共119頁第十七頁，共120頁。

用酸水解后測定法

某些含金屬的有機(jī)藥物，用適當(dāng)?shù)乃嵝运芤喝芙獠⑥D(zhuǎn)化為可溶性鹽，適合于分析。第18頁/共119頁第十八頁，共120頁。例1

硬脂酸鎂的測定

ChP（2005）取本品約0.1g，精密稱定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml，煮沸至油滴澄清，繼續(xù)加熱10min，放冷至室溫，加甲基橙指示液1~2滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于2.016mg的MgO。第19頁/共119頁第十九頁，共120頁。例2十一烯酸鋅的測定用適當(dāng)濃度的鹽酸溶解樣品，使樣品轉(zhuǎn)化為十一烯酸和氯化鋅，用EDTA直接滴定鋅離子。第20頁/共119頁第二十頁，共120頁。1、堿性條件下或酸性條件下還原后測定（三）經(jīng)還原分解后測定第21頁/共119頁第二十一頁，共120頁。本法是將含鹵素有機(jī)藥物在堿性條件下或酸性條件下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Fajans法）測定。第22頁/共119頁第二十二頁，共120頁。

本法適用于有機(jī)藥物分子結(jié)構(gòu)中的碘與苯環(huán)或者雜環(huán)直接相連，結(jié)合較為牢固?？梢杂么朔▽⒂袡C(jī)結(jié)合狀態(tài)的鹵素轉(zhuǎn)化為無機(jī)狀態(tài)，適合于分析。

第23頁/共119頁第二十三頁，共120頁。

例如泛影酸的測定取本品約0.4g，精密稱定，加氫氧化鈉溶液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.46mg的C11H9I3N2O4。第24頁/共119頁第二十四頁，共120頁。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH+Zn回流△COONaNH2

H2N+3NaI+2CH3COONa+2Na2ZnO2+H2O第25頁/共119頁第二十五頁，共120頁。三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法適用于金屬原子與碳原子結(jié)合牢固的有機(jī)金屬藥物及鹵素與碳原子結(jié)合牢固的有機(jī)鹵素藥物。第26頁/共119頁第二十六頁，共120頁。

藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有：

濕法破壞干法破壞第27頁/共119頁第二十七頁，共120頁。HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸鹽法H2SO4-HClO4法H2SO4-KMnO4分解劑和氧化劑破壞共價(jià)鍵(一)濕法破壞第28頁/共119頁第二十八頁，共120頁。應(yīng)用實(shí)例：凱氏定氮法

用于蛋白質(zhì)、氨基酸、含有氨基的藥物、含有酰胺結(jié)構(gòu)的藥物的含量測定

常量法和半微量法第29頁/共119頁第二十九頁，共120頁。1、消化：

藥物置凱氏燒瓶中，加入硫酸、硫酸鉀，有時(shí)還可以加入合適的催化劑如硫酸銅，加熱，是藥物中的有機(jī)結(jié)構(gòu)氧化分解為二氧化碳和水，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氨，并與過量的硫酸結(jié)合為硫酸銨或硫酸氫銨。操作過程：第30頁/共119頁第三十頁，共120頁。本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。采用了濕法破壞中的硫酸-硫酸鹽法：第31頁/共119頁第三十一頁，共120頁。2、測定法將消化后的溶液轉(zhuǎn)入C瓶中，加入過量的40%氫氧化鈉溶液，前面連接水蒸氣裝置，后邊連接冷凝管，接受瓶中加入硼酸，接受液用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液進(jìn)行酸堿中和滴定。計(jì)算含量。第32頁/共119頁第三十二頁，共120頁。凱氏定氮蒸餾裝置第33頁/共119頁第三十三頁，共120頁。撲米酮的含量測定：

含有兩個(gè)N原子第34頁/共119頁第三十四頁，共120頁。1、高溫?zé)胱品?/p>

將藥物高溫灰化，無機(jī)物轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或無機(jī)鹽的形式，可供分析。(二)干法破壞第35頁/共119頁第三十五頁，共120頁。

適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)藥物的破壞第36頁/共119頁第三十六頁，共120頁。注意事項(xiàng)：（1）加熱或灼燒時(shí)，應(yīng)控制溫度在７００℃以下（2）一定要灰化完全第37頁/共119頁第三十七頁，共120頁。2、氧瓶燃燒法（1）原理將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定第38頁/共119頁第三十八頁，共120頁。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析第39頁/共119頁第三十九頁，共120頁。

本法特點(diǎn)是簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析第40頁/共119頁第四十頁，共120頁。（2）儀器與材料

①儀器裝置燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀第41頁/共119頁第四十一頁，共120頁。第42頁/共119頁第四十二頁，共120頁。②稱樣用材料及稱樣

A.固體樣品無灰濾紙

B.液體樣品紙袋

第43頁/共119頁第四十三頁，共120頁。第44頁/共119頁第四十四頁，共120頁。④吸收液

A.作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價(jià)態(tài)③氧氣第45頁/共119頁第四十五頁，共120頁。B.吸收液的選擇85頁氟水

氯NaOH溶液溴H2O2-NaOHNaOH-硫酸肼飽和溶液碘NaOH－硫酸肼飽和溶液硫NaOH或H2O2

硒硝酸溶液第46頁/共119頁第四十六頁，共120頁。（3）操作方法①燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min。第47頁/共119頁第四十七頁，共120頁。②樣品的準(zhǔn)備

取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。第48頁/共119頁第四十八頁，共120頁。③樣品的燃燒點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。然后按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定。第49頁/共119頁第四十九頁，共120頁。①根據(jù)被燃燒分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。（4）注意事項(xiàng)

ChP（2005）規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析第50頁/共119頁第五十頁，共120頁。待分解樣品量燃燒瓶的體積3~5mg（微量分析）150~250ml20~30mg（半微量分析）300~500ml50~60mg1000ml0.6~0.7g或更多2000ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶第51頁/共119頁第五十一頁，共120頁。正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。第52頁/共119頁第五十二頁，共120頁。例碘苯酯的含量測定原理

碘苯酯系有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。第53頁/共119頁第五十三頁，共120頁。此時(shí)，碘全部以碘酸鹽的形式存在。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，淀粉為指示液，滴定到藍(lán)色消失即為終點(diǎn)。求滴定度?并寫出含量計(jì)算的公式？第54頁/共119頁第五十四頁，共120頁。第二節(jié)定量分析方法的特點(diǎn)容量分析法光譜法色譜法第55頁/共119頁第五十五頁，共120頁。

一、容量分析法（一）容量分析法的特點(diǎn)

容量分析法是將已知濃度的滴定液由滴定管滴加到待測藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，就可以計(jì)算出被測藥物的含量。第56頁/共119頁第五十六頁，共120頁。

通常用于測定高含量和中含量組分，即被測組分的含量在1％以上。容量分析法比較準(zhǔn)確，一般相對誤差可達(dá)0.2％以下。

簡便、快速、準(zhǔn)確第57頁/共119頁第五十七頁，共120頁。滴定度（T）的概念

2.滴定度的計(jì)算

（二）容量分析法的計(jì)算問題第58頁/共119頁第五十八頁，共120頁。3.百分含量的計(jì)算

（1）直接滴定法含量%=V×F×T/W×100%

F=實(shí)際標(biāo)定的濃度/理論規(guī)定的濃度

（2）間接滴定法第59頁/共119頁第五十九頁，共120頁。

Sb5++2KISb3++2K+

++I2

I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

H+①生成物滴定法例如葡萄糖酸銻鈉的含量測定H+第60頁/共119頁第六十頁，共120頁。②剩余滴定法

含量%=［（

TVF)加入–(TVF)剩余］/W×100%

兩個(gè)溶液的滴定度相同

這種情況下常需要做空白試驗(yàn)進(jìn)行校正：

含量%=（V空白–

V剩余)×T×F/W×100%

第61頁/共119頁第六十一頁，共120頁。例如：司可巴比妥鈉的含量測定間接碘量法做空白試驗(yàn)90頁求滴定度？寫出含量計(jì)算式？第62頁/共119頁第六十二頁，共120頁。

二、光譜分析法

（一）紫外-可見分光光度法（200nm～760nm)靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～10-7g/ml1.特點(diǎn)準(zhǔn)確度高，SRD（%）為2%～5%儀器價(jià)格低廉，操作簡單，易普及，應(yīng)用范圍廣。2.朗伯-比耳定律（Lambert—Beer定律）：

A=ECL第63頁/共119頁第六十三頁，共120頁。A=ECLE：吸收系數(shù)C:濃度（g/100ml）L:液層厚度要求供試品溶液的A應(yīng)在0.3～0.7第64頁/共119頁第六十四頁，共120頁。3、應(yīng)用情況①定性鑒別：λmax或EAλmax/Aλmin

與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸收光譜比較

第65頁/共119頁第六十五頁，共120頁。

②純度檢查：在某波長，藥物無吸收，而在某波長，藥物無吸收，而所含雜質(zhì)有吸收，可檢查某雜質(zhì)的限度。

第66頁/共119頁第六十六頁，共120頁。

如：腎上腺素中腎上腺銅的檢查腎上腺素2mg/mL的0.05mol/LHCl液,310nm處測得的A≯0.05,腎上腺銅的E=435,求其限量第67頁/共119頁第六十七頁，共120頁。對照品比較法：Cx=(Ax/Ar)Cr;

含量%=Cx×D/W×100%

常用方法吸收系數(shù)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法：如比色法計(jì)算分光光度法：數(shù)學(xué)分離法

③含量測定第68頁/共119頁第六十八頁，共120頁。（二）熒光分析法1、原理：物質(zhì)在受到激發(fā)光（λex）照射后產(chǎn)生了較長波長的熒光（λem）當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長或所用溶劑溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系。第69頁/共119頁第六十九頁，共120頁。

靈敏度高，可達(dá)10-10g/ml～10-12g/ml；

在低濃度進(jìn)行測定，防止F與C不成正比及自熄滅作用；用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減；靈敏2、特點(diǎn)度高，但干擾因素多。

制備熒光衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。用樣品量少，操作簡單，方法快速，應(yīng)用范圍較廣。

第70頁/共119頁第七十頁，共120頁。3、含量測定常用的方法對照品比較法:Cx=(Rx-Rxb)/(Rs-Rsb)×Cs

Ch.P收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。第71頁/共119頁第七十一頁，共120頁。4、應(yīng)用①鑒別：λex和λem

熒光激發(fā)光譜,發(fā)射光譜第72頁/共119頁第七十二頁，共120頁。②含量測定：a.標(biāo)準(zhǔn)曲線法b.比例法（對照法）第73頁/共119頁第七十三頁，共120頁。

按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜

按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；GC；HPLC三、色譜分析法

方法分類第74頁/共119頁第七十四頁，共120頁。

（一）HPLC法色譜柱的理論板數(shù)：

n=5.54(tR/Wh/2)2

2、系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：R=2（tR1–

tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1應(yīng)在0.9～1.05

重復(fù)性：連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD不大于2.0%

1、一般要求：色譜柱、流動(dòng)相第75頁/共119頁第七十五頁，共120頁。重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對照溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,除另有規(guī)定外,其峰面積測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)≯2.0%第76頁/共119頁第七十六頁，共120頁。內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量3.測定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

外標(biāo)法測定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法應(yīng)用示例：RP-HPLC法測定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法如頭孢拉??；頭孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法第77頁/共119頁第七十七頁，共120頁。常用反相HPLC色譜法流動(dòng)相：水、甲醇-水、乙腈-水固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS或C8）第78頁/共119頁第七十八頁，共120頁。4、應(yīng)用

①定性：根據(jù)tR②含量測定：a、內(nèi)標(biāo)法

b、外標(biāo)法

第79頁/共119頁第七十九頁，共120頁。③雜質(zhì)檢查1.峰面積歸一化法2.不加校正因子的主成分自身對照法（高低濃度對照法）3.加校正因子的內(nèi)標(biāo)法4.外標(biāo)法：測定雜質(zhì)的濃度第80頁/共119頁第八十頁，共120頁。

（二）GC法

第81頁/共119頁第八十一頁，共120頁。1、一般要求（ChP2005）①載氣：N2②色譜柱：填充柱毛細(xì)管柱③進(jìn)樣口溫度：高于柱溫30-50℃④進(jìn)樣量：不大于數(shù)微升⑤檢測器：常用氫焰離子化檢測器（FID）檢測溫度一般高于柱溫,不得低于100℃,以免水氣凝結(jié),常用250-350℃.第82頁/共119頁第八十二頁，共120頁。①內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量

2.測定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法②外標(biāo)法測定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法

③標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：供試品兩等份，其中一份加入對照品一定量，測定得兩張圖譜。

Ax加/Ax=（Cx+△Cx）/Cx

在相同背景下測定，誤差小第83頁/共119頁第八十三頁，共120頁。3、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（ChP2005）①色譜柱的理論板數(shù)（n）第84頁/共119頁第八十四頁，共120頁。②分離度（R）③拖尾因子第85頁/共119頁第八十五頁，共120頁。④重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對照溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,除另有規(guī)定外,其峰面積測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)≯2.0%第86頁/共119頁第八十六頁，共120頁。4、應(yīng)用

①定性：根據(jù)tR②含量測定：a內(nèi)標(biāo)法

b外標(biāo)法

c標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法第87頁/共119頁第八十七頁，共120頁。③雜質(zhì)檢查1.峰面積歸一化法2.內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定法3.外標(biāo)法：測定雜質(zhì)的濃度

4.標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法:是對外標(biāo)法的改進(jìn)加入雜質(zhì)的對照品溶液第88頁/共119頁第八十八頁，共120頁。第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證

一、目的通過驗(yàn)證去證明所建立的分析方法是可信的，能夠真實(shí)地反映藥品內(nèi)在的質(zhì)量。第89頁/共119頁第八十九頁，共120頁。二、用途（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。（二）藥物原分析方法進(jìn)行修訂或變更時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。第90頁/共119頁第九十頁，共120頁。三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。第91頁/共119頁第九十一頁，共120頁。

驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍、耐用性，共八項(xiàng)內(nèi)容。四、驗(yàn)證內(nèi)容第92頁/共119頁第九十二頁，共120頁。

一、準(zhǔn)確度

是指用該方法測定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示

測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。

第93頁/共119頁第九十三頁，共120頁。1、原料藥用對照品做回收率2、制劑要考察輔料對回收率的影響★如何考慮輔料（背景）的影響？第94頁/共119頁第九十四頁，共120頁。

回收試驗(yàn)空白（敷料組成）+已知量A的對照品，測定，測定值的均值為M模擬了被測定物的環(huán)境，從而真實(shí)反映測定方法的準(zhǔn)確程度第95頁/共119頁第九十五頁，共120頁。3、★如果被測定物的背景是不能夠模擬的，該如何考慮背景的影響？前提：具有已知含量的供試品比如中藥的有效成分的測定？第96頁/共119頁第九十六頁，共120頁。

加樣回收試驗(yàn)

已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品，測定值為M回收率%=（測定平均值—空白值）/加入量×100%第97頁/共119頁第九十七頁，共120頁。含量測定方法的回收率測定總結(jié)：①原料藥：用對照品進(jìn)行測定第98頁/共119頁第九十八頁，共120頁。

②制劑：采用在空白輔料中加入對照品的方法。③如不能得到制劑的全部組分，即空白輔料，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，前提是制劑中被測定物的含量是已知的。加樣回收試驗(yàn)第99頁/共119頁第九十九頁，共120頁。

中藥分析的準(zhǔn)確度用加樣回收試驗(yàn)衡量。第100頁/共119頁第一百頁，共120頁。二、精密度

是指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測定結(jié)果之間的接近程度。

（一）精密度表示方法

相對標(biāo)準(zhǔn)差(relativestandarddeviation,RSD)也稱變異系數(shù)(coefficientofvariation,CV)RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%=SD/X×100%第101頁/共119頁第一百零一頁，共120頁。1、重復(fù)性

在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度。在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，即制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。第102頁/共119頁第一百零二頁，共120頁。

2.中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。在實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)沒有變化的情況下考察隨機(jī)變動(dòng)因素的影響，如不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。只是地點(diǎn)沒有變化。第103頁/共119頁第一百零三頁，共120頁。

3.重現(xiàn)性

不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。所有的因素都發(fā)生了變化。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。第104頁/共119頁第一百零四頁，共120頁。

三、專屬性

是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性。

鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。第105頁/共119頁第一百零五頁，共120頁。四、檢測限（limitofdetection,

LOD)

是指試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量。（一）常用的方法1.目視法用已知濃度被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。See圖4-52.儀器分析方法

GC和HPLC法：進(jìn)樣已知低濃度的樣品

LOD=S/N=2或3see圖4-6此時(shí)的溶液濃度即為LOD第106頁/共119頁第一百零六頁，共120頁。

五、定量限（limitofquantitation,

LOQ)

是指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。一般以S/N=10時(shí)的溶液濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確定具有一定準(zhǔn)確度和精密度的最低量。第107頁/共119頁第一百零七頁，共120頁。

六、線性

是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測定結(jié)果（響應(yīng)值）與試樣中被測物濃度呈正比關(guān)系的程度。

UV法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n=5;A=0.3～.0.7。以C對A建立回歸方程：C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n=5～7;以C對A建立回歸方程：C=aA+b;

r＞0.9999。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。第108頁/共119頁第一百零八頁，共120頁。七、范圍

是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的測量濃度的區(qū)間。

原料藥和制劑含量測定：范圍應(yīng)為測試