低溫微生物在污水處理領(lǐng)域中的運用,微生物論文在自然界中，有些環(huán)境是普通生物不能生存的，如高溫、低溫、高酸、高堿、高鹽、高壓、高輻射等。然而，即使是在這些通常被以為是生命禁區(qū)的極端環(huán)境中，仍然有些微生物在頑強的生活著，這些微生物叫做極端環(huán)境微生物或簡稱為極端微生物。低溫微生物是重要的極端微生物之一，直到20世紀70年代才被系統(tǒng)地研究與分類。Morita將低溫微生物分為兩類：一類是生活在低溫下且其最高生長溫度不超過20℃，最適溫度在15℃，在0℃可生長繁衍的微生物稱嗜冷菌；另一類為最高生長溫度高于20℃，最適溫度高于15℃，在0~5℃可生長繁衍的微生物稱耐冷菌[1].由于耐冷菌比嗜冷菌更能忍耐溫度波動，因而其在低溫環(huán)境中占據(jù)著獨特的生態(tài)位。近年來，低溫微生物在污水處理領(lǐng)域中的應(yīng)用逐步遭到重視[2].1低溫微生物的菌種資源低溫微生物在地球上分布廣泛，主要分布于海洋、極地環(huán)境、冰川、高山凍土等常冷環(huán)境中。除此之外，還存在于常溫土壤、人工濕地、河流底泥、低溫生物膜、池塘等一般生境。20世紀70年代以來，極端環(huán)境微生物已成為微生物學(xué)發(fā)展的新領(lǐng)域和新的資源庫。低溫微生物具有廣泛的微生物區(qū)系，已發(fā)現(xiàn)的低溫微生物既有真細菌、藍細菌，又有酵母菌、真菌和藻類，華而不實以真細菌居多。近年已報道的部分低溫微生物的門、屬種、革蘭氏類型、最適生長溫度及其所在生境見表1.低溫細菌主要牽涉6門、30余屬種。華而不實，以變形菌門中-變形菌居多。詳細情況如下：藍藻門〔1種〕、鞘脂桿菌門〔1種〕、黃桿菌門〔1種〕、放線菌門〔4種〕、厚壁菌門〔3種〕和變形菌門〔24種〕。另外，酵母也是較常見的低溫微生物[21].2低溫微生物的耐冷機制2.1細胞膜的適應(yīng)低溫主要影響細胞膜中脂質(zhì)雙分子層對溶質(zhì)的浸透功能，減弱細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。耐冷菌在低溫條件下生存，主要依靠于細胞內(nèi)膜流動性的調(diào)節(jié)能力，最常見的適應(yīng)是改變細胞膜中脂肪酸的組成[15,40].飽和脂肪酸在去飽和酶的低溫誘導(dǎo)下會轉(zhuǎn)化為不飽和脂肪酸，而它的增加會引起脂類熔點的降低，使細胞膜保持良好的流動性，利于耐冷菌生存[41].Russell等[15]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)溫度由37℃降至8℃時，厭氧細菌Clostridiumbotulinum體內(nèi)不飽和度由27%增長至40%,這是通過增加支鏈脂肪酸、不飽和直鏈脂肪酸的數(shù)量，減少環(huán)狀脂肪酸的濃度實現(xiàn)的。除此之外，低溫菌還可通過改變極性頭組的大小和電荷[30]、膜中的蛋白質(zhì)含量、類胡蘿卜素的構(gòu)成[4,42]、短鏈和長鏈脂肪酸的比例[43]、順反式脂肪酸的比例[30],加強膜的流動性。但上述所有的策略并不均具有效性，例如極性頭組的變化對于修改膜流動性的效果不太明顯[44].Denich等[45]也研究發(fā)現(xiàn)通過改變脂肪酸鏈的長度來加強膜的流動性只可能發(fā)生在生長細胞中。除此之外，低溫菌適應(yīng)低溫環(huán)境也主要取決于由雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路組成的膜傳感器和胞質(zhì)反響調(diào)節(jié)器介入低溫信號的感悟和轉(zhuǎn)導(dǎo)能力，到達激活冷調(diào)節(jié)基因的目的[46].2.2冷適應(yīng)酶在低溫環(huán)境下，菌體細胞內(nèi)的化學(xué)反響速率會降低，此時低溫菌體內(nèi)會合成具有較高催化效率的冷適應(yīng)酶，以維持足夠的代謝通量[47].迄今為止，獲得的冷適應(yīng)酶主要有核糖核酸酶[24],RNA聚合酶[29],鐵超氧化物歧化酶[35],堿性磷酸酶[48],酪氨酸磷酸酶[49],-淀粉酶、-半乳糖苷酶[50],氨肽酶[51],琥珀酸脫氫酶[52],谷氨酸脫氫酶、葡萄糖脫氫酶、木聚糖酶、胰蛋白酶[53]等。Zheng等[35]研究發(fā)現(xiàn)耐冷菌Marinomonassp.NJ522能產(chǎn)生耐冷型鐵超氧化物歧化酶〔Fe-SOD〕，分子量約48kDa,該酶在pH8~10、40℃時活性最大，在0℃時能保持最大活性的35%.辛明秀等[52]分離到一種具有催化活性的琥珀酸脫氫酶，該酶的最適反響溫度為20℃，但在0℃仍可保持酶活性的20%.2.3冷應(yīng)激蛋白質(zhì)。當(dāng)溫度忽然降低時，低溫菌會相應(yīng)誘導(dǎo)表示出多種蛋白，最主要的一類稱為冷休克蛋白〔CSPs〕[54].低溫時，CSPs可優(yōu)先結(jié)合單鏈RNA和DNA,并作為轉(zhuǎn)錄催化劑或mRNA分子伴侶介入細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄、翻譯、蛋白折疊以及調(diào)控膜的流動性[55].CSPs的基因同系物也已經(jīng)在幾種南極細菌中發(fā)現(xiàn)[56],華而不實最主要的一類冷休克蛋白為CspA.Jiang等[57]研究發(fā)現(xiàn)CspA在低溫時可作為RNA的分子伴侶并介入hrs和gyrA兩種冷休克基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。低溫菌在低溫環(huán)境連續(xù)生長期間產(chǎn)生第二類永久性蛋白，稱為冷適應(yīng)蛋白〔CAPs〕，它的存在確保了低溫時細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的正常合成[58],保衛(wèi)細胞周期及菌體的生長。Kawahara等[32]在一株冰核菌PantoeaananasKUIN-3體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種冷適應(yīng)蛋白Hsc25,該酶在分別經(jīng)過熱、冷和鹽酸胍處理使其變性后均能夠重折疊酶構(gòu)造。2.4抗凍蛋白抗凍蛋白〔AFPs〕是一個構(gòu)造多元化的蛋白質(zhì)集團，具有修改冰晶體構(gòu)造的能力[59],抑制細胞外冰晶體的重結(jié)晶[60].AFPs普遍存在于長期生活在冷水里的魚體內(nèi)，防止魚體內(nèi)血液的凝固。Yamashita等[39]于2002年發(fā)現(xiàn)了第一例產(chǎn)AFP的南極菌株MoraxellaspGilbert等[36]在從南極冰湖中分離獲得的11株細菌體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)含有AFPs,華而不實Marinomonasprimoryensis產(chǎn)生一種Ca2+依靠型AFPs[61],一般的AFPs具有較差的冰點下降活性，而Ca2+依靠型AFPs具有較好的冰點下降活性，可使冰點下降超過2℃，在熱滯后經(jīng)過中不會產(chǎn)生明顯的冰晶。因而，AFPs對于長期生活在極端嚴寒環(huán)境中的微生物具有不可替代的重要性。2.5冷凍保衛(wèi)劑冷凍保衛(wèi)劑是一類化學(xué)物質(zhì)，而低溫菌先天具備合成各種不同冷凍保衛(wèi)劑的能力，如糖類、氨基酸、甜菜堿等，它們的存在一方面能夠阻止蛋白質(zhì)的低溫誘導(dǎo)聚合。另一方面冷凍保衛(wèi)劑能夠維護膜的最佳流動性[62].海藻糖是對抗熱沖擊和浸透脅迫的一種重要保衛(wèi)劑[63],通過更換細胞中的水分保持細胞膜和蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，同時保衛(wèi)細胞內(nèi)的水構(gòu)造[64].外源海藻糖有助于保衛(wèi)有機體，使其免遭凍結(jié)，當(dāng)海藻糖恰好處于細胞膜兩側(cè)時，對細胞會產(chǎn)生最大程度的保衛(wèi)功能[65].Ko等[66]證實了低溫時三甲基甘氨酸對Listeriamonocytogenes具有促生長的作用。Angelidis等[13]在生存于低溫環(huán)境下的食物病原體Listeriamonocytogenes中發(fā)現(xiàn)了甜菜堿這種冷凍保衛(wèi)劑，但尚未弄清甜菜堿的作用機理，可能是作為化學(xué)伴侶蛋白，防止細胞蛋白質(zhì)在壓力條件下的聚合。2.6RNA的降解降解體是多種核糖核酸蛋白絡(luò)合物，是保持細胞RNA穩(wěn)定性的決定要素。南極細菌Pseudomonassyringae的降解體中包含核糖核酸內(nèi)切酶RNAseE、核糖核酸外切酶RNAseR及RNA解旋酶，華而不實RNAseR能夠降解大量的RNA二級構(gòu)造，減少了ATP的消耗，進而在低溫時幫助細胞保存能量，而RNAseE與RNAseR之間的作用相關(guān)性尚未明確[67].3低溫微生物在污水處理中的應(yīng)用一般以為，利用生物法處理污水時占主導(dǎo)地位的是中溫菌，其最適生長溫度為25~37℃，但在污水溫度一般為5~10℃的嚴寒地區(qū)，中溫菌的活性大大降低，使得污水處理效果差，出水無法達標(biāo)排放[68],然而由于耐冷菌具有特殊的生理特征、低溫催化活性，利用其對嚴寒地區(qū)污水進行治理，已引起研究者們的興趣，近年來相關(guān)的實驗研究報道也較多[14,69-71].3.1對COD、氮磷廢水的降解常見污染物一般指污水中含有的COD、氮和磷。污水中一般含有較多的氮和磷。這三類污染物一般均采用生物法處理。Chevalier等[3]分離到4株耐冷絲狀藍細菌，該類菌在低溫環(huán)境時對氮和磷均有較高的去除率。李荷等[22]挑選到耐冷有機磷農(nóng)藥降解菌Plesiomonassp.SA-8,利用其降解甲基對硫磷，在最適溫度20℃時降解率高達93%,當(dāng)溫度位于10℃時，降解率可以到達66.2%.李明堂等[38]研究了土著反硝化菌AcinetobacterjohnsoniiDBP-3對低溫富營養(yǎng)化水體中典型營養(yǎng)鹽的去除特征，結(jié)果表示清楚，在避光、10℃和靜置條件下培養(yǎng)，菌株對模擬系統(tǒng)中的氮磷和溶解性有機碳具有明顯的去除作用。徐巧等[72]挑選出1株耐冷菌，在5℃曝氣8h條件下，對接種廢水的COD、氨氮去除率均在90%以上。李慧峰等[73]研究了2株耐冷細菌對污水CODCr的降解效果，去除率分別達23%和53%.孫靜等[74]挑選出1株耐冷菌，在8℃條件下，該菌株對模擬污水中的COD、總磷和氨氮的降解率分別達62.92%、56.42%和50.63%.3.2對石油烴類廢水的降解石油烴類污染物中含有大量不溶于水的物質(zhì)，在低溫下時常呈固態(tài)存在，加大了降解難度。中溫微生物無法在低溫環(huán)境下發(fā)揮作用，而從各種土壤、淡水和海洋系統(tǒng)中分離的低溫微生物能高效利用自然環(huán)境中存在的各種石油烴類污染物，并將其作為唯一的能源和碳源[75,76].Whyte等[20]分離到菌株Rhodococcussp.Q15,該菌在5℃條件下能高效降解多種短鏈烷烴及十六烷、二十八烷以及環(huán)己烷衍生物等。Lin等[31]分離到石油烴降解細菌Pseudoalteromonassp.P29,該菌在5℃條件下具有對混合油和真空油作為唯一碳源和能源的能力，并對混合油顯示出更高層次的利用率。3.3對芳香烴類廢水的降解芳香烴類化合物是苯及其衍生物，如苯酚、甲苯、萘、菲等，一般難以被微生物降解，但仍有研究表示清楚能夠分離到具有較高降解該類污染物效率的耐冷菌。Churchill等[8]分離到耐冷分支桿菌Mycobacterium,該菌可降解三環(huán)、四環(huán)芳香脂肪烴類化合物。Chauret等[25]挑選出反硝化耐冷細菌Pseudomonasfluorescens,該菌可在低于10℃的條件下降解鄰苯二甲酸；Robert等[77]分離到1株能夠降解高分子多環(huán)芳香烴的耐冷菌。Margesin等[21]從遭到烴類污染物污染的高山土壤中分離到4株低溫微生物，2株Rhodococcussp.,2株Basidiomycetousyeasts,均可降解高含量苯酚。華而不實，1株酵母屬附屬于銹菌綱，它可能代表著一個新物種，在溫度高于20℃時不能生長，在1℃時降解含量為5mM的苯酚，速率高于兩種耐冷細菌在10℃時的。3.4對氯酚類廢水的降解氯酚類物質(zhì)是重要化工原料，具有抗菌和消毒功能，被廣泛用于農(nóng)藥、防腐和造紙工業(yè)中，屬于較難降解的有機物且水溶性較高，導(dǎo)致了很多河流、土壤等自然生態(tài)系統(tǒng)遭到污染。大量研究表示清楚，耐冷菌中的一些菌種能夠降解存在于低溫土壤、沉積物和水體中各種構(gòu)型的氯酚類物質(zhì)。Zilouti等[78]從遭到五氯苯酚污染和農(nóng)藥污染的土壤中分離到幾株耐冷高效氯酚降解菌并接種到流化床和生物反響器中，凈化地下水中的氯酚污染，結(jié)果表示清楚：這2種反響器分別在14℃和〔231〕℃下，氯酚負荷為11mg/Lh時，氯酚去除率均能到達99%以上。3.5對外表活性劑廢水的降解外表活性劑廢水中含有的首要污染物L(fēng)AS屬于生物難降解物質(zhì)，我們國家環(huán)境標(biāo)準中把它列為第二類污染物質(zhì)，若不經(jīng)處理直接排入水體，將造成湖泊、河流等水體的富營養(yǎng)化問題[79].胡浩等[16]分離到蒼白桿菌Ochrobactrumsp.T-1和伯克霍爾德菌BurkholderiaB-2,并利用這2株菌進行對TritonX-100和Brij-35的降解實驗，結(jié)果表示清楚：T-1的最適生長和降解溫度為25℃，但低溫對菌株的影響較小，其降解率在15℃時可到達80%;B-2的最適生長和降解溫度為30℃，低溫會抑制菌株生長，但對降解率的影響很小。4固定化微生物處理廢水由于低溫環(huán)境使得大部分微生物的新陳代謝處于抑制狀態(tài)，利用懸浮態(tài)耐冷菌群降解水中的污染物質(zhì)，效果不是很明顯[80],并且在實際應(yīng)用中抗沖擊性較差，達不到理想效果。固定化技術(shù)能使生物量在處理裝置內(nèi)維持高濃度，提高處理負荷，并且抗毒物毒性強，對水質(zhì)及pH的變化有較好的抗沖擊性[81].關(guān)于固定化微生物的應(yīng)用研究，國內(nèi)外已有報道基本集中在工業(yè)廢水和城市污水的處理研究領(lǐng)域，并且國內(nèi)對這方面的實驗研究較多[82-85].Jae-Koan[86]等的研究結(jié)果表示清楚，固定化微生物在30~40d的操作經(jīng)過中，對NH3-N的去除到達了100%.賁岳等[87]為確保嚴寒地區(qū)污水生物處理系統(tǒng)的有效運行，接種耐冷微生物在6~10℃時處理生活污水，COD的去除率到達86.7%.葉姜瑜等[88]分離到可低溫降解植物油的菌株，使用泥炭和木屑作為固定化載體，在5℃條件下對模擬含油廢水進行處理，結(jié)果表示清楚3d后降解率到達77.34%,5d后到達85.22%.褚可成[89]利用聚氨酯泡沫作為固定化載體并投加到原污水中處理10d,污水中COD、SS和BOD的去除率分別到達了75.7%、87.1%、55.6%.徐成斌等[90]研究了顆?；钚蕴抗潭U氏不動桿菌對硝基苯的降解情況，結(jié)果表示清楚固定化生物活性炭可在84h基本完全降解濃度為400mg/L的硝基苯。耿振香等[91]采用聚乙烯醇-硼酸包埋固定硝化菌和反硝化菌，對生活污水進行硝化反硝化工藝處理，最終氨氮去除率高達96%.魏小娜等[92]將固定化微生物顆粒按20%的填充率裝填到自制反響器中處理模擬污染地表水，最終COD去除率到達62.3%,氨氮去除率高于90.6%.5結(jié)束語近年來有關(guān)低溫微生物的研究日趨增加，基礎(chǔ)研究工作主要集中在低溫菌的分布和降解機制方面。低溫微生物的研究不僅拓寬了