本文格式為Word版，下載可任意編輯——維生素C一步發(fā)酵維生素C在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，通過利用自身的酶系來將L-山梨糖轉(zhuǎn)換成維生素C的前體即2-酮基-L-古龍酸。通過操縱溫度、pH的值以及溶養(yǎng)的濃度，從而能夠為發(fā)酵創(chuàng)造一個良好的環(huán)境條件，最終能夠促使它們的健康進展。本文主要對維生素C發(fā)酵養(yǎng)分與環(huán)境條件的優(yōu)化舉行了研究，從而能夠領(lǐng)會的了解到維生素C發(fā)酵養(yǎng)分與環(huán)境條件的關(guān)系。

維生素C；發(fā)酵養(yǎng)分；環(huán)境條件的優(yōu)化

1發(fā)酵生產(chǎn)維生素C相關(guān)的材料與方法

1.1發(fā)酵生產(chǎn)維生素C的微生物

發(fā)酵生產(chǎn)維生素C中相關(guān)的微生物主要包括了小菌和大菌這兩個片面。

1.2發(fā)酵生產(chǎn)維生素C中相關(guān)的培養(yǎng)基

在發(fā)酵過程中，主要的培養(yǎng)基包括了種子培養(yǎng)基以及發(fā)酵培養(yǎng)基。在種子培養(yǎng)基中，有2%的L-山梨糖、有0.2%的葡萄糖、有0.5%的玉米漿、有0.2%的碳酸鈣、有0.1%的尿素，并且在種子培養(yǎng)基中，pH值是6.7。然而在發(fā)酵培養(yǎng)基中，有8.0%的L-山梨糖、有1.0%的玉米漿、有1.0%的尿素、有0.5%碳酸鈣、有0.1%磷酸二氫鉀，有0.01%硫酸鎂，并且在發(fā)酵培養(yǎng)基中，pH值是7.2。

1.3發(fā)酵生產(chǎn)維生素C相關(guān)的培養(yǎng)方法

在維生素C發(fā)酵生產(chǎn)中，主要的培養(yǎng)方法包括了種子培養(yǎng)、搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)以及發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)這三個步驟。種子培養(yǎng)的方法，主要是指在裝有250mL種子培養(yǎng)基的750mL的三角瓶中滴入5mL菌懸液，在此方法中要轉(zhuǎn)速保持在每一分鐘200轉(zhuǎn)，然而溫度要保持在30攝氏度，并且培養(yǎng)的時間一般都是24小時。在搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)的方法中，在裝有20mL種子培養(yǎng)基的500mL的三角瓶中舉行接種，此時的培養(yǎng)的溫度是30攝氏度，并且搖床的轉(zhuǎn)速要保持在每一分鐘200轉(zhuǎn)，培養(yǎng)的時間一般都是72小時。在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的方法中，在3L全自動發(fā)酵灌裝要裝1.5L的液體，在舉行培養(yǎng)的過程中要保持30攝氏度的溫度，并且對于pH值以及相關(guān)的溶氧水平要根據(jù)測驗過程中的要求來分別舉行操縱。

1.4概括的分析方法

（1）對于2-KLG濃度舉行測定的時候，要采用碘量法

在10mL的比色管中要滴入發(fā)酵上的清液3mL，并且要參與5mL的硫酸和2mL的蒸餾水，在溫度達成100攝氏度下，舉行長達25分鐘的下水浴，與此同時在500mL的三角瓶中，要通過參與4至5滴0.1mol/L的淀粉溶液來作為指示劑，并且要將終點定為0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)碘液一向滴定到藍色才終止。

（2）對于L-山梨糖濃度舉行測定的時候，要采用蒽酮硫酸法

在10mL的比色管中，將適當(dāng)?shù)臐舛鹊陌l(fā)酵上清液的0.2mL中滴入其中，然后使得冰浴能夠?qū)?mL0.2%蒽酮硫酸溶液吸入，在吸入的過程中要保持混合度的平勻。在舉行混合的時候要將溫度保持在25攝氏度以下，并且在此溫度下要保持10分鐘的靜置回響，然后再通過使用70%硫酸舉行稀釋，一向稀釋到刻度的位置。與此同時，要在波長620納米的位置舉行吸光度的測定，并且要通過使用蒸餾水來作為空白對照，從而能夠查清標(biāo)準(zhǔn)曲線的換算濃度。

（3）有關(guān)菌體干重的測量方法

在50mL的離心管中，放入20mL的發(fā)酵液，要將離心轉(zhuǎn)動保持在每分鐘2200轉(zhuǎn)，沉淀大菌以及雜質(zhì)的時候要保持在10分鐘的時間。然后在通過參與1mol/LHCL舉行洗滌和沉淀兩次。在另一個50ml的離心管中要將上清液倒入，要將此時的離心轉(zhuǎn)動保持在每分鐘1000轉(zhuǎn)，在20分鐘之后，將上面的清液倒掉，并且要將溫度升至105攝氏度舉行烘干，然后等到重量保持在平穩(wěn)的狀態(tài)下舉行稱重。

（4）有關(guān)山梨糖脫氫酶酶活測定的方法

在發(fā)酵培養(yǎng)基中，要將混合的菌種接種至其中，在培養(yǎng)24個小時之后，通過取500ml的發(fā)酵液，經(jīng)過離心在每分鐘2000轉(zhuǎn)的運行之后，這樣可以將雜志和大菌去除掉，然后再通過離心每分鐘10000轉(zhuǎn)的運行，從而可以對小菌菌體舉行收集，并且用pH值為7.0的磷酸鉀緩沖液舉行兩次的洗滌之后，然后將其懸浮在一樣的緩沖液中，此時的超聲波破碎的時間是15分鐘，離心的轉(zhuǎn)動是每分鐘12000轉(zhuǎn)，從而可以將上清液收集起來。

（5）2-KLG恢復(fù)酶酶活測定的方法

在溫度保持在30攝氏度，并且保溫效果在30分鐘的水浴中參與0.05mol/LpH值為7.2的磷酸鉀緩沖液中，待測的上清液，0.02mol/L氫化鈉的溶液以及25%的2-KLG。同時要取1.0mL的上清液，在1厘米光程的石英比色皿中注入0.1mL的氫化鈉溶液，然后再通過添加磷酸鉀緩沖液從而可以使得液面達成2.7mL的高度，結(jié)果再將0.3mL的2-KLG的溶液注入其中，此時的總體積達成了4.1mL，并且要在340納米的深度對光吸收值的變化舉行測定，并且在間隔30秒的地方讀一次數(shù)，回響的時間保持在5分鐘。在計算直線斜率的時候，要將每60秒引起的0.001個OD值下降作為一個酶活力的單位，此時的橫坐標(biāo)是指時間，縱坐標(biāo)是指OD值的變化。

2有關(guān)環(huán)境中pH指對2-酮基-L-古龍酸合成的重要影響

為了能夠很好地促進細(xì)胞的生長，這就要更加提防細(xì)胞的生長環(huán)境，并且影響環(huán)境最重要的因素是指pH值。環(huán)境中pH指對2-酮基-L-古龍酸合成的重要影響主要表現(xiàn)在以下幾個方面：第一，在細(xì)胞的質(zhì)膜的電荷中，pH值的變化導(dǎo)致了它的不斷變化，從而能夠變更質(zhì)膜對個別離子滲透性，從而不利于細(xì)胞對培養(yǎng)基中養(yǎng)分物質(zhì)的吸收和利用，并且也不利于代謝產(chǎn)物的排放，最終不利于菌體的生長。其次，pH值對細(xì)胞內(nèi)酶的活性起著一個重要的影響，細(xì)胞中的酶系只有在適合的pH值的范圍內(nèi)才能夠發(fā)揮出足夠大的活性。第三，通過pH值可以使得培養(yǎng)基中的養(yǎng)分物質(zhì)以及中間代謝產(chǎn)物的離解形式得到了變更，從而使得細(xì)胞正常的代謝過程受到了嚴(yán)重的影響，最終影響了代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和產(chǎn)量。

3不同的溶養(yǎng)濃度對2-KLG發(fā)酵過程的影響

不同的溶養(yǎng)濃度對2-KLG具有不同的影響。在高溶養(yǎng)的濃度下，細(xì)胞的生長處境是良好的。在溶養(yǎng)濃度在50%以下，細(xì)胞的數(shù)量在逐步裁減。為了能夠促進細(xì)胞的健康生長，這就要求要操縱好溶養(yǎng)的濃度。

4終止語

在細(xì)胞生長的過程中，由于受到種種因素的影響，這就使得要更加提防細(xì)胞生長的環(huán)境。不同的溶養(yǎng)濃度對2-KLG