實(shí)驗(yàn)三

植物誘變育種與有絲分裂過程的觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.掌握根尖染色體壓片技術(shù)；2.觀察有絲分裂中期染色體形態(tài)。3.了解人工誘發(fā)多倍體的原理、方法及其在育種上的意義，并初步掌握用秋水仙素誘導(dǎo)多倍體的方法.4.觀察多倍體植物染色體數(shù)目的變化及多倍體植物外部形態(tài)的變異實(shí)驗(yàn)原理：植物根尖分生細(xì)胞的有絲分裂，每天都有分裂的高峰時(shí)期，此時(shí)把根尖固定，經(jīng)過染色和壓片，再放置在顯微鏡下觀察，可以看到大量處于有絲分裂各時(shí)期的細(xì)胞和染色體。實(shí)驗(yàn)原理

自然界存在許多多倍體物種，除此以外還可以采用物理方法（高溫，低溫，X射線照射，嫁接或切斷）或化學(xué)藥劑處理法（植物堿，麻醉劑，植物生長激素等）進(jìn)行人工誘發(fā)。其中秋水仙素處理是誘發(fā)多倍體植物最有效的方法之一。秋水仙素是從百合科秋水仙的器官和種子中提煉出來的一種植物堿。它的作用在于抑制細(xì)胞分裂時(shí)形成紡錘體，而對染色體的結(jié)構(gòu)和復(fù)制無顯著影響，染色體不被拉向兩極而被阻止在分裂中期，這樣細(xì)胞不能繼續(xù)分裂，從而產(chǎn)生染色體數(shù)目加倍的核。若染色體加倍的細(xì)胞繼續(xù)分裂，就形成多倍性組織，分化產(chǎn)生的配子也是多倍性的，可通過有性繁殖將多倍體繁殖下去。

實(shí)驗(yàn)材料：大蒜,小麥等植物的根尖實(shí)驗(yàn)儀器與藥品：

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、濾紙、刀片、水浴鍋、EP管、45%醋酸、醋酸洋紅、卡寶品紅、0.2%秋水仙素、卡諾固定液.

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：染色體標(biāo)本制片方法染色體的常規(guī)壓片方法，是指與現(xiàn)代發(fā)展起來的染色體分帶和電鏡技術(shù)相區(qū)別的經(jīng)典壓片技術(shù)，操作可按先后順序：取材、預(yù)處理、固定、解離、染色、壓片等步驟進(jìn)行。

1、取材：用沙培或水培養(yǎng)大蒜，根長1.5-3cm時(shí)取材，一般在上午九時(shí)取下根尖。2、預(yù)處理：冰水混合物處理24h。3、固定：卡諾固定液（酒精：醋酸=3：1）16-24h。4、水洗：制片用的根尖用蒸餾水洗10min。5、解離：1NHCl60℃解離8-10min。6、水洗：同上。7、染色：醋酸洋紅染色7天左右，或卡寶品紅染色15分鐘8、壓片和鏡檢。以大蒜根尖為例說明染色體制片的過程：

酒精燈火烤趁熱用拇指壓鏡檢壓片過程有絲分裂有絲分裂（Mitosis）過程包括:

(一)間期(Interphase)

(1)G1—RNA和蛋白質(zhì)合成

(2)S—DNA合成，形成新的染色體

(3)G2

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有絲分裂能量的蓄積

(二)分裂期(M)

(1)前期(prophase)

(2)中期(metaphase)

(3)后期(anaphase)

(4)末期(telophase)間期:看不到染色體結(jié)構(gòu)前期:此期染色質(zhì)濃縮，紡錘體形成，核仁核膜逐漸消失，能看到一定形狀染色體中期:核膜核仁消失，染色體高度濃縮，紡錘絲牽引染色體到赤道板上后期:染色單體分開由紡錘絲通過著絲點(diǎn)牽引向兩極移動(dòng)--子染色體末期:染色體解螺旋，核膜核仁重新出現(xiàn)，紡錘絲消失，核分裂完成，進(jìn)入分裂間期有絲分裂特征大蒜材料染色體加倍處理大蒜沙培生根，室溫下2-3天即長出0.5-1cm長的根取出用水沖洗去掉泥沙，置于含0.2%秋水仙素的培養(yǎng)皿中,暗培養(yǎng)24\48\72小時(shí).從藥液中取出，水洗后清水培養(yǎng)24\48\72小時(shí).分裂高峰期取下根尖固定24小時(shí).染色、制片.

形態(tài)標(biāo)志：根尖有膨脹的部分，即表明染色體加倍實(shí)驗(yàn)說明觀察與鑒定多倍體植株

經(jīng)處理得到的的多倍體植株與正常植株相比，在外部形態(tài)和結(jié)構(gòu)上有區(qū)別。從外部形態(tài)看，多倍體比二倍體高大，葉片肥厚，果實(shí)和種子都比較大，糖類和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的含量豐富。鏡下觀察，多倍體葉面表皮上的氣孔和保衛(wèi)細(xì)胞比二倍體大得多，花粉粒也相對較大。在形態(tài)觀察的基礎(chǔ)上，需進(jìn)一步鏡檢觀察染色體數(shù)目的變化以對多倍體植株作可靠鑒定。黑麥小黑麥小麥作業(yè)