實驗九

放線菌形態(tài)的觀察1實驗的目的要求學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法初步了解放線菌的形態(tài)特征2放線菌是一類具有絲狀分枝的單細胞，主要以外生孢子的形式繁殖，革蘭氏陽性，與細菌同屬原核微生物。放線菌菌菌落中的菌絲常從一個中心向四周輻射狀呈放射狀生長，并因此而得名。放線菌有特殊的土霉味。A：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌；F：生磺酸鏈霉菌A：諾爾斯氏鏈霉菌；B：皮疽諾卡氏菌；C：酒紅脂孢囊菌；D：游動放線菌；E：小單胞菌；F：皺雙孢馬杜拉放線菌3分布：含水量較低、有機物豐富、呈微堿性的土壤中。估計每克土壤中約含放線菌孢子107個。應(yīng)用：放線菌對人類最突出的貢獻就是它能產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素(70%)。放線菌還是酶類、維生素的生產(chǎn)菌；有的放線菌有固氮能力；放線菌在自然界物質(zhì)循環(huán)中也起著重要作用，由于它們具有較強的分解復(fù)雜有機物的能力，對于土壤肥力的提高也有重要作用。4危害：有極少數(shù)放線菌對人類構(gòu)成危害，某些放線菌屬菌種引起動物放線菌?。ㄆつw、腦、肺和足部感染），某些諾卡氏菌屬菌種引起人和動物的諾卡氏菌??；還有少數(shù)放線菌能引起植物病害。5營養(yǎng)菌絲氣生菌絲孢子絲6營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲形態(tài)比較

營養(yǎng)菌絲氣生菌絲位置顏色直徑在培養(yǎng)基內(nèi)和表面位于下層淺細

在培養(yǎng)基上方位于上層深粗7實驗材料菌種：細黃鏈霉菌和青色鏈霉菌培養(yǎng)基：高氏I號瓊脂儀器和用具載玻片蓋玻片濾紙平皿玻璃紙玻璃涂棒顯微鏡鏡頭紙接種環(huán)接種鏟鑷子8方法插片法玻璃紙法印片法9插片法原理將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。10插片法倒平板接種插片無菌操作用鑷子將滅菌蓋玻片以大約45角在接種線上插入瓊脂內(nèi)。培養(yǎng)將插片平板倒置，28C

培養(yǎng)3-5天。鏡檢

用鑷子小心拔出插片，用紙擦去背面培養(yǎng)物，將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接顯微鏡觀察。宜用略暗光線；先低倍再高倍觀察；染色后效果更好（0.1%呂氏堿性美藍）11玻璃紙法原理玻璃紙是一種透明的半透膜，具有半透膜特性，其透光性與載玻片的基本相同，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長狀態(tài)，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。12玻璃紙法倒平板鋪玻璃紙

無菌操作用鑷子將滅菌的玻璃紙鋪在高氏I號瓊脂表面，用無菌玻璃涂布棒將玻璃紙壓平。接種用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物（孢子）在玻璃紙上劃線接種。培養(yǎng)將平板倒置，28C培養(yǎng)3-5天。鏡檢

在潔凈載玻片上滴一滴水，用鑷子小心取出玻璃紙，菌面朝上平貼在載玻片上，顯微鏡觀察。勿碰動玻璃紙菌面的培養(yǎng)物；玻璃紙與玻片間勿留氣泡；先低倍再高倍觀察13印片法原理將要觀察的放線菌的菌落或菌苔，先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)，孢子的排列及其形狀等。方法簡便，但形態(tài)特征可能有所改變。14印片法印片接種培養(yǎng)倒平板染色

用接種鏟或解剖刀將菌苔連同培養(yǎng)基切下一小塊，菌面朝上放在一載玻片上，取另一塊載玻片在酒精燈上略微加熱后，蓋在菌苔上，輕輕按壓，使培養(yǎng)物（氣絲、孢子絲或孢子）黏附在微熱的載玻片上，印跡朝上，通過酒精燈火焰2-3次固定。用石炭酸復(fù)紅覆蓋印跡，染色約1分鐘后水洗。鏡檢干后用油鏡觀察。不要用力太大壓碎瓊脂，也不要錯動，以免改變放線菌自然形態(tài)15營養(yǎng)菌絲又稱為基內(nèi)菌絲、基質(zhì)菌絲或一級菌絲；是孢子發(fā)芽后不斷伸長、分枝并放射狀在培養(yǎng)基內(nèi)部和表面形成的大量色淺、較細的具有吸收營養(yǎng)和排泄代謝廢物功能的絲狀結(jié)構(gòu)。空間位置位于下層。16氣生菌絲又稱為二級菌絲；是由基內(nèi)菌絲向上向空間方向分化形成的顏色較深、直徑較