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趙紫來(lái)(Ohaozilai@gmail.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!HPLC

故障診斷技術(shù)

Troubleshooting南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!I.I.流動(dòng)相的相關(guān)問(wèn)題檢測(cè)器背景過(guò)高,有時(shí)引起基線溢出.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!溶劑的級(jí)別及處理方法由于除去了有機(jī)或無(wú)機(jī)污染物，所以使用純水對(duì)系統(tǒng)是非常理想的.現(xiàn)在的純水系統(tǒng)都可以給出水中總有機(jī)碳的值.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法如果水的質(zhì)量很差，在梯度洗脫時(shí)，有可能出現(xiàn)鬼峰!南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法注意HPLC級(jí)別的溶劑只允許有低UV吸收的雜質(zhì)存在.使用前，所有流動(dòng)相都應(yīng)該經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾.如果溶劑有背景吸收,-線性范圍會(huì)下降-噪音會(huì)增加-基線的穩(wěn)定性會(huì)受影響。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法2.氯仿Chloroform分析級(jí)的氯仿包含3%乙醇，以防止產(chǎn)生碳酰氯這樣的有毒氣體.然而，像乙醇，水在正相分離中可以使硅膠去活，從而導(dǎo)致保留時(shí)間不穩(wěn)定。HPLC級(jí)的氯仿不包含作為穩(wěn)定劑的乙醇.因此，一旦打開蓋子，就應(yīng)放到冷暗的地方保存，以避免產(chǎn)生有毒氣體.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法使用緩沖溶液

使用前必先過(guò)濾溶液.為了避免結(jié)晶，系統(tǒng)中不能有殘留溶液::對(duì)泵的影響–破壞推桿及密封墊:對(duì)色譜柱的影響–導(dǎo)致柱塌陷:對(duì)流路的影響–腐蝕不銹鋼流路

注意可能長(zhǎng)菌:特別是磷酸緩沖液-是細(xì)菌，菌類物質(zhì)生長(zhǎng)很好的介質(zhì).

理想狀態(tài)，應(yīng)該每天配置新鮮的緩沖液（尤其夏天）.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!流動(dòng)相可能引出的問(wèn)題

當(dāng)流動(dòng)相由有機(jī)溶劑換成緩沖溶液時(shí)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)沉淀等問(wèn)題.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法緩沖溶液有機(jī)溶劑南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!流動(dòng)相可能引出的問(wèn)題不同的操作者配置的流動(dòng)相，可能保留時(shí)間會(huì)不同.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!流動(dòng)相可能引出的問(wèn)題

溶劑瓶的問(wèn)題1.容器一般使用玻璃，因?yàn)樗芰显鏊軇┯锌赡軙?huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)或是污染柱子。當(dāng)分析高靈敏度無(wú)機(jī)離子時(shí)，應(yīng)避免使用玻璃容器。2.容器開口處應(yīng)盡量小。這樣可以避免由于溶劑的快速揮發(fā)導(dǎo)致的濃度不穩(wěn)定，這樣也可以降低房間中的揮發(fā)物濃度。注意不要將容器完全密封，這樣會(huì)導(dǎo)致局部真空，泵不上液體。

南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!溶劑瓶的問(wèn)題6.通常使用溶劑過(guò)濾器，這是一個(gè)粗濾，可以保證溶劑中的顆粒不會(huì)進(jìn)入泵頭。要保證這個(gè)濾頭清潔，無(wú)菌。如果臟了，可以用異丙醇或是1N的硝酸超聲清洗。7.實(shí)驗(yàn)室中好的習(xí)慣是在溶劑瓶上貼上標(biāo)簽，表明內(nèi)部溶劑的名稱，組成甚至制備的日期。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!樣品處理問(wèn)題1.通常都是將樣品溶解在流動(dòng)相中，流動(dòng)相中樣品的溶解度是最好的.-減小溶劑峰，尤其是感興趣的樣品洗脫出來(lái)離溶劑峰很近的情況。-保證樣品在流動(dòng)相中的溶解度，保證在系統(tǒng)，特別是柱子中不出現(xiàn)沉淀凝結(jié)的現(xiàn)象。-保證樣品溶液與流動(dòng)相之間的可混合性。2.

通常進(jìn)樣前，我們用0.45um的過(guò)濾膜過(guò)濾樣品。

如果預(yù)先知道樣品很臟，可以在進(jìn)樣前用0.2um的過(guò)濾膜過(guò)濾南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!Rheodyne手動(dòng)進(jìn)樣器1.部分充滿定量環(huán)進(jìn)樣方法。-進(jìn)樣量要小于定量環(huán)體積的一半。2.全充滿定量環(huán)進(jìn)樣方法。-進(jìn)樣量要大于定量環(huán)體積的3倍。(Laminarfloweffect)南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!正確的進(jìn)樣方法(手動(dòng))樣品進(jìn)樣方法:-先插入進(jìn)樣針在INJECT

孔處-旋到LOAD位置.上樣

-推入樣品.

-旋轉(zhuǎn)到INJECT位置,進(jìn)樣

-移走進(jìn)樣針.

-清洗進(jìn)樣口.

南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!進(jìn)樣污染產(chǎn)生交叉污染!當(dāng)樣品濃度很大，檢測(cè)器又在一個(gè)靈敏的使用范圍時(shí)，交叉污染很容易出現(xiàn)。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!進(jìn)樣器漏液南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!檢查新柱子1.柱效檢查

柱效的檢查可以在色譜柱使用前，根據(jù)廠家提供的色譜柱報(bào)告上的方法及混合樣品來(lái)測(cè)定。2.壓力檢查

正常分析條件下，初始色譜柱操作壓力應(yīng)該記錄下來(lái)，作為今后實(shí)驗(yàn)的參考。3.

保護(hù)柱

應(yīng)盡量使用保護(hù)柱，但應(yīng)注意不要給系統(tǒng)增加過(guò)大的壓力。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!操作中的注意事項(xiàng)使用前，最好過(guò)濾流動(dòng)相及樣品，避免顆粒物產(chǎn)生堵塞。5.樣品最好溶解在流動(dòng)相中，如果不是，最好也要接近流動(dòng)相的組成。這樣會(huì)減少樣品在流動(dòng)相中的不溶物沉淀在柱子中。6.日常使用后，可用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。例如：ODS柱每天使用完后，可用乙腈沖洗色譜柱，以除去柱子中強(qiáng)吸收的樣品。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!色譜柱的問(wèn)題及解決辦法篩板或色譜柱填料預(yù)先要用0.45um的濾膜過(guò)濾樣品和流動(dòng)相，如果樣品很臟的話，需要用0.25um的濾膜過(guò)濾。盡管如此，有時(shí)候由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間有限，流動(dòng)相或是樣品處理不徹底，還會(huì)有臟東西進(jìn)入系統(tǒng)，造成堵塞。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!吸附樣品&溶劑雜質(zhì)色譜柱的問(wèn)題及解決辦法雜質(zhì)將會(huì)導(dǎo)致峰托尾.可以用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!填料干枯色譜柱的問(wèn)題及解決辦法一般來(lái)講，特別對(duì)于聚合物色譜柱，填料膨脹的特性依賴于溶劑。因此，當(dāng)色譜柱干了的時(shí)候，填料有可能發(fā)生變形。特別是GPC色譜柱，溶劑的選擇非常特殊。不僅要避免干枯，而且不能使用錯(cuò)誤的溶劑，否則整個(gè)聚合物色譜柱的特性（形狀及粒徑）都有可能發(fā)生變化。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!廢液瓶務(wù)必保證廢液管沒有深入到廢液中，否則的話，檢測(cè)池的壓力很容易升高。檢測(cè)器帶來(lái)的問(wèn)題南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!1.系統(tǒng)中大的壓力波動(dòng).可能的原因:系統(tǒng)漏液?jiǎn)蜗蜷y被污染在線過(guò)濾器被污染柱塞密封圈壞/漏解決辦法:1.

檢查連接處或是檢測(cè)池是否有漏液。特別是任何新出現(xiàn)的連接處（如：新柱子/檢測(cè)器之間）。有時(shí)，特別是用PEEK材質(zhì)的管線連接時(shí)，如果加過(guò)高壓后，連接部分可能會(huì)松，也容易漏。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!2.系統(tǒng)壓力增高可能的原因:1.堵塞A.檢測(cè)池B.柱壓力慢慢變大C.泵D.混和氣E.管線南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!2.系統(tǒng)壓力增高情況2:系統(tǒng)壓力突然增加-系統(tǒng)突然堵塞;可能在系統(tǒng)的某部分突然堵塞.檢查方法:1.檢查系統(tǒng)堵塞的方法

(從尾到頭)a.從檢測(cè)器端斷開色譜柱，壓力如果正常，說(shuō)明檢測(cè)池或從管線到檢測(cè)池堵塞。b.如果壓力仍然很高，斷開色譜柱（分析柱）。（1ml/min的流速下）帶保護(hù)柱的正常壓力應(yīng)該是不高于5kgfcm-2。如果壓力正常，清洗或是更換色譜柱（分析柱）。c.如果壓力仍然高，除去保護(hù)柱。壓力正常，更換保護(hù)柱。d.如果壓力仍高，就可能使混和氣或是泵的問(wèn)題了。如果管線堵了，可以使用IPA或硝酸高流速?zèng)_洗，但此時(shí)不要連接色譜柱或是檢測(cè)器。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!峰形變化--A.不對(duì)稱(前伸/拖尾)情況1:方法開發(fā)可能的原因:1.不適當(dāng)?shù)娜軇┻x擇南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!峰形變化--A.不對(duì)稱(前伸/拖尾)情況2:在已存在的方法中，峰形突然扭曲1.色譜柱(Guard/Main)出現(xiàn)問(wèn)題.–清洗或更換色譜柱.2.高PH(>7)使用硅膠柱時(shí)，柱子出現(xiàn)溶解.3.可能是二級(jí)封端不完全造成的影響.

4.特殊情況下,死體積增大,引起譜帶加寬.

南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!流動(dòng)相可能引出的問(wèn)題梯度洗脫時(shí)出現(xiàn)鬼峰!南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法不同的分析及HPLC流動(dòng)相級(jí)別南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法在配置，處理HPLC級(jí)別溶劑的注意事項(xiàng):1.THF分析級(jí)的THF包含butylatedhydroxytoluene(BHT)作為抗氧化抑制劑.因?yàn)锽HT有很強(qiáng)的紫外吸收,所以在HPLC級(jí)別的THF中沒有BHT.因此,HPLC級(jí)別的THF必須儲(chǔ)藏在冷暗的地方，盡量避免氧化.積累了大量的有機(jī)氧化物可能會(huì)引起爆炸.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!流動(dòng)相可能引出的問(wèn)題當(dāng)流動(dòng)相中使用了緩沖溶液，那么泵壓將會(huì)明顯增加.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法溶劑過(guò)濾裝置南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法流動(dòng)相的改變步驟南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法在系統(tǒng)更換全部有機(jī)流動(dòng)相之前，應(yīng)注意以下幾點(diǎn),系統(tǒng)應(yīng)用水/有機(jī)相（1：1）比例混合，來(lái)去除曾經(jīng)用過(guò)的緩沖溶液。否則，當(dāng)有機(jī)相遇到殘留的緩沖液時(shí)，系統(tǒng)會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶的現(xiàn)象。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!溶劑級(jí)別及處理方法溶劑的預(yù)混合對(duì)于單元系統(tǒng),分析前我們經(jīng)常要預(yù)先配好混合溶劑.例如：要配置

100ml的50:50甲醇和水的混合溶劑,我們可以:1.各稱量50ml的水和50ml甲醇，再把它們混合到一起.2.稱量50ml水，再用甲醇定容到100ml容器中。3.稱量50ml甲醇，用水定容到100ml容器中.所有這三種方法都將獲得不同的結(jié)果。無(wú)論選用哪種，都應(yīng)一直使用這種方法，以獲得較好的重復(fù)性。推薦使用種方法。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!溶劑瓶的問(wèn)題3.當(dāng)使用不太穩(wěn)定的溶劑時(shí),或者每天制備新的溶劑，或者在溶劑瓶中充入惰性氣體，例如氦氣。4.不要將溶劑直接放在通風(fēng)口，窗口或是門口；不要直接放在陽(yáng)光下。這樣會(huì)導(dǎo)致溫度的變化，增加揮發(fā)。通常情況下，對(duì)RI檢測(cè)器影響最大，有時(shí)候也會(huì)影響到UV檢測(cè)器。5.一般情況下，要將溶劑瓶放置在高于溶劑傳輸系統(tǒng)（泵）的位置，這樣可以保證泵有好的虹吸效果，同時(shí)避免泵空走。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁(yè)!II.樣品可能引出的問(wèn)題進(jìn)樣后，系統(tǒng)壓力都會(huì)迅速增加。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁(yè)!III.進(jìn)樣可能引出的問(wèn)題手動(dòng)進(jìn)樣，重現(xiàn)性不好。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁(yè)!Rheodyne手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣體積和檢測(cè)器反映值之間的關(guān)系(峰面積)南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁(yè)!正確的進(jìn)樣方式(自動(dòng)進(jìn)樣器)1.至少每天都要清洗流路.2.至少每周都要改變清洗液.3.不可以用鹽溶液作為清洗液.4.使用廠家推薦的自動(dòng)進(jìn)樣瓶瓶墊.5.瓶墊不可以重復(fù)使用.6.不要把瓶子充滿.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁(yè)!進(jìn)樣器清洗-使用標(biāo)準(zhǔn)的針清洗接頭清洗–使用后最好清洗南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁(yè)!IV.色譜柱可能引起的問(wèn)題當(dāng)我們擁有了一根新的色譜柱，我們?nèi)绾螜z測(cè)它的初始柱效能?南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁(yè)!操作中的注意事項(xiàng).作為新色譜柱，最好在使用前，低于分析流速下（0.2-0.3ml/min）過(guò)大約30分鐘。色譜柱如果長(zhǎng)時(shí)間沒有使用，再次投入使用前，也要做相似的工作。2.關(guān)機(jī)時(shí)，最好逐步降低流速，不要突然降低壓力，這樣對(duì)色譜柱以及系統(tǒng)都會(huì)有影響。3.當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，切記要先用水沖洗系統(tǒng)，再改用有機(jī)溶劑，這樣可以避免結(jié)晶現(xiàn)象出現(xiàn)，堵塞柱子。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁(yè)!色譜柱的問(wèn)題及解決辦法柱篩板或柱吸附了樣品或溶劑的雜質(zhì)形成化學(xué)結(jié)晶,或者保存包裝不當(dāng),使柱子填充材料干燥,會(huì)引起下列問(wèn)題系統(tǒng)壓力增高,峰型不好(拖尾,前伸,分叉),保留時(shí)間改變.

南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁(yè)!色譜柱的問(wèn)題及解決辦法正常情況下，用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，可以除去這些顆粒。但有時(shí)不溶的顆粒用這種方法很難除去，這時(shí)，可以考慮反沖色譜柱。注意：這時(shí)不要連接檢測(cè)器。最終，如果沖洗不能解決問(wèn)題的話，可以更換過(guò)濾篩板。但是更換時(shí)要很小心，不要破壞柱床，否則柱效會(huì)降低。不銹鋼篩板是固定在色譜柱上的，所以盡量不要更換。南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁(yè)!填料的化學(xué)腐蝕色譜柱的問(wèn)題及解決辦法注意：對(duì)于基于聚合物的色譜柱，必須要檢查每一項(xiàng)的值南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁(yè)!V.檢測(cè)器有可能引發(fā)的問(wèn)題基線漂移.南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁(yè)!VI.其他類型的問(wèn)題1.系統(tǒng)大的壓力波動(dòng).2.系統(tǒng)高壓.3.基線不穩(wěn)

A.漂移B.噪音4.峰形變化A.不對(duì)稱(前伸/拖尾)B.分叉南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁(yè)!2.如果沒有發(fā)現(xiàn)漏液，接下來(lái)要檢查泵頭的后面。在泵頭后面，管線連接著洗滌瓶。如果密封墊漏液，液體有時(shí)可以流出。如果洗滌瓶的水面看起來(lái)上升了，說(shuō)明泵頭漏液。如果漏液可以觀察到，那么說(shuō)明柱塞桿受到破壞。需要更換柱塞桿密封墊。

注意：(A)更換泵密封墊時(shí)，需要半小時(shí)老化新墊，在這個(gè)期間，可能會(huì)出現(xiàn)壓力波動(dòng)，這是正常的。

（B）更換柱塞密封墊時(shí)，一定要注意觀察柱塞桿，如果出現(xiàn)劃痕，應(yīng)更換柱塞桿，否則密封墊也很容易被損壞。3.如果,沒有發(fā)現(xiàn)泵頭泄露,,就要檢查單向閥或在線過(guò)濾器.它們可以移下來(lái)先用IPA(異丙醇)后用水超聲波清洗(各15分鐘),對(duì)于頑固的污點(diǎn),可以使用1N的硝酸,如果還不行,更換單向閥.1.系統(tǒng)中大的壓力波動(dòng)南京科捷液相知識(shí)講座共55頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁(yè)!維護(hù)方法:情況1:

壓力逐漸升高(每天或每月)-最大的可能是色譜柱堵了.-色譜柱中積累了顆?；蚴俏搅穗s質(zhì)解決辦法:1.使用在色譜柱介紹說(shuō)明中提到的方法清洗