血糖含量的測(cè)定第一頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握無(wú)蛋白血濾液2、血糖測(cè)定的原理和方法第二頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日二實(shí)驗(yàn)原理1.無(wú)蛋白血濾液的制備

血液中所含的蛋白質(zhì)常影響其他成分的測(cè)定，可以采用鎢酸法除去蛋白質(zhì)，制備無(wú)蛋白血濾液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等測(cè)定使用。

鎢酸鈉與硫酸混合生成鎢酸。在pH值小于等電點(diǎn)的溶液中，鎢酸與血液中的蛋白質(zhì)分子的陽(yáng)離子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀過(guò)濾或離心，上清液即為無(wú)色、透明、pH值約為6的無(wú)蛋白濾液。第三頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日

2.血糖測(cè)定

葡萄糖是一種多羥基的醛類化合物，具有還原性，與堿性銅試劑混合加熱，

葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧[suō]基，而銅試劑中的二價(jià)銅被還原成磚紅色的氧化亞銅沉淀。氧化亞銅可以使磷鉬[mù]酸還原成鉬藍(lán)，使溶液成藍(lán)色。其生成藍(lán)色的深度與血濾液中葡萄糖濃度成正比。通過(guò)分光光度計(jì)比色，即可求出血糖的含量。第四頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日三實(shí)驗(yàn)器材儀器：錐形瓶；試管及試管架；離心機(jī)；電爐；血糖管；奧氏吸管；分光光度計(jì)。試劑：動(dòng)物全血；1／3mol·Ｌ硫酸溶液；堿性銅試劑；磷鉬酸試劑；0.25％苯甲酸溶液；葡萄糖應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mg·mL－１－１第五頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日四實(shí)驗(yàn)步驟1.無(wú)蛋白血濾液的制備

吸取充分均勻的抗凝血1mL，擦凈管外血液，緩慢放入錐形瓶或試管中。加入蒸餾水7mL，混勻，使完全溶血。加入0.33mol·L硫酸溶液1mL，充分混勻。此時(shí)血液由鮮紅色變?yōu)樽厣?，靜置5~10min，使其酸化完全。加入10%鎢酸鈉溶液1mL，邊加邊搖。當(dāng)搖到不再產(chǎn)生泡沫時(shí)為止。說(shuō)明蛋白質(zhì)已經(jīng)完全變性沉淀。放置5~10min，過(guò)濾或離心出去沉淀，既得無(wú)蛋白濾液（每毫升相當(dāng)于1/10全血）－１第六頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日2.血糖測(cè)定取3支血糖管按下表操作：

血糖管空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管無(wú)蛋白血濾液蒸餾水葡萄糖應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)溶液堿性銅試劑—2.0—2.0—1.01.02.01.01.0—2.0混勻，同時(shí)放入100℃沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷卻3min（切勿搖動(dòng)血糖管）磷鉬酸試劑2.02.02.0混勻后放置2min（使二氧化碳?xì)怏w逸出）蒸餾水加至252525試劑/mg第七頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日用蒸餾水加至25刻度處后，混勻，空白管調(diào)零，在波長(zhǎng)420nm處比色，記錄各管光密度。計(jì)算求出每100mL血液中葡萄糖的質(zhì)量（mg）計(jì)算公式：

樣品中的血糖（mg/100mL）=（測(cè)定管光密度/標(biāo)

準(zhǔn)管光密度）*0.1*100/0.1=（測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度）*100

第八頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日五注意事項(xiàng)一定要等水沸后，再放血糖管。準(zhǔn)確加熱8min，時(shí)間過(guò)久則呈色較深，反之則淺，均影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。為避免還原生成的亞銅被空氣中的氧再氧化，冷卻時(shí)切勿搖動(dòng)血糖管。第