ceRNA機制及研究方案介紹1ceRNA的基本特征ceRNA的研究現(xiàn)狀ceRNA的方案設計ceRNA的驗證實驗設計實例解讀分享目錄2miRNA作用方式3RNA和miRNA作用方式4RNA——miRNA：1對多；多對1；多對多ceRNA的邏輯關系5ceRNA假說（competitiveendogenousRNA，競爭性內源RNA）:共享miRNA結合位點的轉錄本會競爭性結合相同的miRNAceRNA機制的生物學功能RNA轉錄本通過與編碼RNA競爭性的結合microRNA，從而稀釋掉細胞內游離microRNA的濃度，降低microRNA對編碼RNA的抑制，進而提高目的基因的表達量6ceRNA的種類7ceRNA部分研究結果8ceRNA的國自然面上項目申請狀況910ceRNA的課題申請狀況ceRNA的方案設計

ceRNA關系對的獲取及基本qPCR分析；

ceRNA關系對中各成分與疾病相關性驗證；

ceRNA關系對中的競爭性關系的驗證；1112ceRNA關系對的獲取13ceRNA的驗證試驗（LncRNA為例）實例分享一：

LncRNApagbc對miRNA的海綿調控作用促進膽囊腫瘤發(fā)生WuX,WangF,LiH,etal.LncRNA‐PAGBCactsasamicroRNAspongeandpromotesgallbladdertumorigenesis[J].EmboReports,2017.（IF8.568）高通量測序+qPCR驗證+LncRNA功能驗證14文獻一技術路線15目的LncRNA的確定

高通量測序LncRNA+miRNA測序：9對膽囊癌與癌旁組織選取5條LncRNA在26對癌與癌旁組織進行qPCR驗證

構建lncRNA-PAGBC-mRNA的基因共表達模型

16目的LncRNA的確定驗證LncRNA-PAGBC在大樣本中的表達在60個癌與癌旁組織中進行l(wèi)ncRNA-PAGBC表達量的統(tǒng)計分析，證明lncRNA-PAGBC與癌癥的相關性17目的LncRNA的確定對77個病例進行關于lncRNA-PAGBC的生存分析對lncRNA-PAGBC進行兩個細胞系中進行亞細胞定位18目的LncRNA的確定在膽囊癌細胞系（GBC、NOZ）中進行l(wèi)ncRNAPAGBC沉默，分析細胞增殖及裸鼠成瘤19目的LncRNA的確定在膽囊癌細胞系中進行l(wèi)ncRNAPAGBC過表達，分析癌細胞的遷移、侵襲和成瘤能力20LncRNA‐PAGBC的與miRNA關系對確定整合LncRNA與miRNA數(shù)據(jù)，預測出PAGBC的6條靶miRNA選用雙熒光素酶報告系統(tǒng)進行關系對驗證（293T細胞、NOZ細胞）

21LncRNA‐PAGBC的靶基因確定結合miR-133b、miR-511靶基因預測以及篇首的高通量數(shù)據(jù)，推測出靶基因SOX4和PIK3R3癌細胞中分別轉入LncRNA‐PAGBC的突變體（分別針對miR-133b、miR-511結合位點）后，進行靶基因表達檢測

22LncRNA‐PAGBC的目的基因確定癌細胞中分別轉入LncRNA‐PAGBC的突變體、過表達+miRNAinhibitor、miRNAmimic，進行靶基因表達檢測23結論通過高通量測序發(fā)現(xiàn)與膽囊癌相關的特定LncRNA，經過在病例中的檢測初步篩選出目的LncRNA；沉默、過表達LncRNA在體內及體外的功能試驗，驗證出LncRNA‐PAGBC與膽囊癌細胞的增殖有關系；通過生信分析從LncRNA‐PAGBC預測出6個靶miRNA中，通過體內、體外試驗確定出其靶標miR-133b、miR-511；LncRNA‐PAGBC通過競爭性的與miR-133b、miR-511結合，促進SOX4和PIK3R3表達升高，進而活化了AKT/mTOR通路；24lncRNAHOTAIR在腎癌細胞中通過miR-217調節(jié)HIF-1α/Axl信號途徑高通量測序+qPCR驗證+LncRNA功能驗證QuanH,OuL,WeiZ,etal.LncRNAHOTAIRregulatesHIF-1α/AXLsignalingthroughinhibitionofmiR-217inrenalcellcarcinoma[J].CellDeath&Disease,2017,8(5):e2772.（IF5.965）25實例分享二：研究路線26皮膚黑色素瘤中的競爭性內源RNA調控分子機制高通量測序+qPCR驗證+circRNA功能驗證XuS,JingS,ShengY,etal.IntegrativeanalysisofcompetingendogenousRNAnetworkfocusingonlongnoncodingRNAassociatedwithprogressionofcutaneousmelanoma[J].CancerMedicine,2018(8Suppl).（IF3.362）27實例分享三：方案設計測序+qPCR：15W；IF：4分左右；功能試驗：15-25W；IF：3-5分左右；測序+qPCR+功能試驗：35-40W；IF：6-8分28SalmenaL,PolisenoL,TayY,etal.ceRNAhypothesis:TheRosettaStoneofahiddenRNAlanguage?[J].Cell,2011,146(3):353-8.ThomsonDW