大一組胚課程緒論第1頁/共51頁組織學(xué)研究內(nèi)容和意義組織學(xué)研究方法和技術(shù)組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法

第一章

組織學(xué)緒論

(Introduction)第2頁/共51頁一、概述1.組織學(xué)與胚胎學(xué)的研究內(nèi)容組織學(xué)：研究正常機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的一門學(xué)科。細(xì)胞：是人體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理功能、和生長發(fā)育的基本單位。組織：細(xì)胞群＋細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)

四大基本組織(basictissue)

上皮組織(epithelialtissue)結(jié)締組織(connectivetissue)肌組織(musculartissue)神經(jīng)組織(nervetissue)

第3頁/共51頁OrganPrimarytissueBasictissueOrganhistology器官:各種基本組織按一定的規(guī)律有機(jī)地結(jié)合在一起System:功能相關(guān)的器官組成系統(tǒng),完成連續(xù)的生理過程.epithelialtissueconnectivetissuemuscletissuenervoustissueTissueCellintercellularsubstance第4頁/共51頁P(yáng)rimarytissueEpithelialtissueConnectivetissueMuscletissueNervoustissue第5頁/共51頁胚胎學(xué)：研究人體發(fā)生、發(fā)育過程及相關(guān)規(guī)律的科學(xué)2.組織胚胎學(xué)與其他學(xué)科間的關(guān)系生理學(xué)病理學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)外科學(xué)第6頁/共51頁顯微鏡的發(fā)明于16世紀(jì)末的荷蘭。1665年Hooke提出“細(xì)胞”，開創(chuàng)了用顯微鏡研究生物構(gòu)造的先河。二、組織學(xué)的研究方法和技術(shù)第7頁/共51頁第8頁/共51頁

透射電子顯微鏡(ElectronMicroscopeEM)

最大分辯率為0.2nm.

超微結(jié)構(gòu)顯微鏡觀察常用的長度計(jì)量單位

1微米(micrometer

μm)=1/1000毫米(mm)1納米(nanometer

nm)=1/1000微米(μm)

光學(xué)顯微鏡(LightMicroscope)最大分辨率為0.2μm.(LightMicroscope,LM)光鏡結(jié)構(gòu)第9頁/共51頁(一)普通光鏡組織標(biāo)本的制備方法1.

石蠟切片術(shù)(paraffinsectioning)

取材、固定→脫水、包埋→切片、染色→封片

甲醛酒精復(fù)合固定劑酒精石蠟5-10μmHE特殊染色第10頁/共51頁

目的:使組織切片著色,便于觀察.

常用HE染色蘇木精(hematoxylin):堿性染料染細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)核糖體成紫蘭色。伊紅(eosin):酸性染料染細(xì)胞質(zhì)及膠原纖維成粉紅色染色第11頁/共51頁染色第12頁/共51頁嗜堿性(basophilia):易被堿性染料著色嗜酸性(asidophilia):易被酸性染料著色中性(neutrophilia):與兩種染料的親和力都不強(qiáng)。親銀性，嗜銀性：銀染Silverstaining

異染性：甲苯氨藍(lán)染色第13頁/共51頁2、其他組織切片的制作方法冰凍切片：:可保存蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)取材→速凍→冰凍切片→染色→封固鋪片：疏松CT或腸系膜等涂片：體液標(biāo)本：如血液、精液、腦脊液等磨片：如牙、骨等堅(jiān)硬組織可磨成薄片第14頁/共51頁骨磨片bonegroundsectionsilverstain血涂片bloodsmearWrightstaining

鋪片Stretchedpreparation第15頁/共51頁(二)光學(xué)顯微鏡術(shù)1.普通光學(xué)顯微鏡第16頁/共51頁2.特殊顯微鏡（1）熒光顯微鏡:(fluorescencemicroscope)

紫外光激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)產(chǎn)生各種顏色的熒光第17頁/共51頁（2）相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)觀察體外培養(yǎng)的活細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)光→細(xì)胞內(nèi)不同折射率結(jié)構(gòu)時(shí),速度和方向發(fā)生變化→特殊物鏡轉(zhuǎn)化為光密度差異.普通光鏡圖像相差顯微鏡圖像第18頁/共51頁（3）激光共聚焦顯微鏡:(Confocallaserscanningmicroscope)組成:激光光源共聚焦掃描系統(tǒng)電子光學(xué)系統(tǒng)計(jì)算機(jī)圖象分析系統(tǒng).對(duì)細(xì)胞非侵入式光學(xué)斷層掃描成像(二維或三維分析).Practicalarrangementofaconfocalmicroscope.Lightfromalasersourcehitsthespecimenandisreflected.Abeamsplitterdirectsthereflectedlighttoapinholeandadetector.第19頁/共51頁1932年Ruska;Knoll發(fā)明了電子顯微鏡（electronmicroscope)，使觀察工具的分辨率由0.2μm提高到0.2nm.1.透射電鏡-transmissionelectronmicroscope

TEM

分辯率為0.2nm固定——→包埋——→切片——→染色戊二醛、樹脂包埋超薄切片醋酸鈾鋨酸雙重固定（50—80nm厚）檸檬酸鉛2.掃描電鏡(scanningelectronmicroscopeSEM)(三)電子顯微鏡術(shù)第20頁/共51頁圖第21頁/共51頁電鏡圖透射電鏡圖，漿細(xì)胞第22頁/共51頁電鏡掃描圖掃描電鏡圖，血細(xì)胞第23頁/共51頁(四)組織化學(xué)(histochemistry)

與細(xì)胞化學(xué)(cytochemistry)

組織化學(xué)術(shù)：應(yīng)用化學(xué)、物理、生物化學(xué)、免疫學(xué)或分子生物學(xué)的原理和技術(shù)與組織學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的技術(shù)，能在組織切片定位、定性、定量地顯示某種物質(zhì)的存在與否、以及分布狀況。

細(xì)胞化學(xué)術(shù)：應(yīng)用于游離細(xì)胞的樣品。第24頁/共51頁1.一般組織化學(xué)

在切片上加某種試劑，與組織中的待檢物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，在原位形成有色沉淀物。例：顯示糖原或蛋白多糖的過碘酸--雪夫氏反應(yīng)(PAS反應(yīng))

（periodicacidSchiffreaction)

多糖+HIO4→多醛+Schiff試劑（乙二醇基)(乙二醛基）

紫紅色沉淀物

PAS第25頁/共51頁貓小腸上皮的PAS染色第26頁/共51頁脂類:冰凍切片---油紅O等染色電鏡制片----鋨酸染色核酸:福爾根（Fuelgen）反應(yīng)---DNA

或甲綠-派若寧—DNA,RNA.酶類:酶作用于底物→初級(jí)反應(yīng)物↑有色沉淀

捕獲劑第27頁/共51頁免疫組織化學(xué)（辣根過氧化物酶標(biāo)記）胰島B細(xì)胞呈胰島素陽性第28頁/共51頁(immunocytochemistry）定義:利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)及膜表面受體、抗原等大分子物質(zhì)的存在和分布。組織切片標(biāo)記了的抗體2.免疫組織化學(xué)抗原抗體復(fù)合物第29頁/共51頁人或動(dòng)物的肽、蛋白質(zhì)（抗原）特異性抗體標(biāo)記物標(biāo)記抗體第30頁/共51頁酶標(biāo)抗體鐵蛋白或膠體金標(biāo)記抗體熒光素標(biāo)記

的抗體抗原第31頁/共51頁二抗一抗抗原+PAP復(fù)合物過氧化物酶--抗過氧化物酶復(fù)合物法

（簡稱PAP法）第32頁/共51頁抗原一抗二抗PAP法PAP復(fù)合物第33頁/共51頁親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(ABC法)生物素(Biotin),能與抗體結(jié)合而不影響抗體活性。親和素(Avidin),可與四個(gè)生物素結(jié)合。ABC法第34頁/共51頁酶酶標(biāo)生物素生物素親和素酶標(biāo)親和素酶酶各標(biāo)記物一抗抗原生物素標(biāo)記的二抗第35頁/共51頁+ABC法抗體酶酶酶酶酶抗原抗原第36頁/共51頁圖11免疫組織化學(xué)（熒光素標(biāo)記）毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈vWF陽性第37頁/共51頁

——核酸分子雜交技術(shù)

是通過檢測細(xì)胞內(nèi)基因(DNA)的有無,及在轉(zhuǎn)錄水平檢測基因的活性(mRNA),原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá).

利用帶有標(biāo)記物的已知鹼基順序的核酸探針與細(xì)胞內(nèi)待測的核酸按鹼基配對(duì)的原則進(jìn)行特異性原位結(jié)合—雜交3.原位雜交（insituhybridization）第38頁/共51頁原位雜交示臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞呈心房鈉尿肽陽性第39頁/共51頁4.凝集素組織化學(xué)利用凝集素可特異性與細(xì)胞表面寡糖和糖鏈識(shí)別和結(jié)合的原理,對(duì)這些糖鏈進(jìn)行定位.(1)熒光標(biāo)記凝集素+標(biāo)本→熒光顯微鏡觀察(2)免疫組織化學(xué)方法:抗凝集素抗體顯示與糖鏈結(jié)合的凝集素.酶酶酶第40頁/共51頁（五）組織和細(xì)胞的定量術(shù)顯微分光光度計(jì)圖象分析術(shù)（形態(tài)計(jì)量術(shù)）：利用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織切片提供的平面圖象進(jìn)行分析，從而獲得立體的組織和細(xì)胞內(nèi)各種有形成分的數(shù)量、體積、表面積等參數(shù)流式細(xì)胞儀：細(xì)胞分類和定量技術(shù)分離細(xì)胞懸液被熒光標(biāo)記后→單個(gè)細(xì)胞快速通過激光照射分析區(qū)→應(yīng)觀信號(hào)轉(zhuǎn)化為電脈沖→計(jì)算機(jī)、屏幕第41頁/共51頁第42頁/共51頁(六)細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)及組織工程細(xì)胞培養(yǎng)（cellcultrue)是把從機(jī)體取的得的細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)（invitro).第43頁/共51頁組織工程（tissueengineering）

利用細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)在體外模擬構(gòu)建機(jī)體組織或器官的技術(shù)。第44頁/共51頁種子細(xì)胞[1]⑶⑷⑸細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建外形⑵細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建外形⑵培養(yǎng)第45頁/共51頁SummaryResearchmethodsformicrostructurelightmicroscopyLM：microstructureparaffinsectionwithHEstainingSpecialmicroscope：confocallaserscanningmicroscopeElectronmicroscopyLM：ultrastructure

TEMSEMHistochemistryandcytochemistryacti