臨床真菌學(xué)ClinicalMycology

侯玨臨床微免教研室

1、掌握真菌的形態(tài)特征

2、掌握真菌的培養(yǎng)特性

3、掌握淺部真菌感染標(biāo)本的直接檢查法

4、掌握念珠菌、隱球菌的臨床意義及微生物學(xué)檢查

5、了解真菌的分類、致病性

6、了解醫(yī)學(xué)上有關(guān)的真菌性疾病與病原性真菌目的與要求

20章真菌學(xué)概述真菌概述原核細(xì)胞型微生物與真核細(xì)胞型微生物的比較原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物細(xì)胞核結(jié)構(gòu)核膜無(wú)有核仁無(wú)有分裂方式二分裂為主有絲分裂，減數(shù)分裂細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)質(zhì)膜缺乏固醇常有固醇內(nèi)膜較簡(jiǎn)單，有中介體復(fù)雜，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體核糖體70S80S呼吸系統(tǒng)質(zhì)膜或中介體線粒體真菌（Fungus）概念是一類有典型的細(xì)胞核和完整細(xì)胞器，不含葉綠素，不分根、莖、葉的真核細(xì)胞型微生物

第一節(jié)真菌的生物學(xué)地位與分類生物學(xué)地位：真菌界分類：真菌界(KingdomFungi)接合菌門子囊菌門擔(dān)子菌門壺菌門

真菌界壺菌門（Chytridiomycota）無(wú)中隔絲狀或單細(xì)胞，大多數(shù)生于水中，少數(shù)兩棲(土壤)和陸生，無(wú)性繁殖產(chǎn)生有鞭毛的游動(dòng)孢子;有性繁殖產(chǎn)生卵孢子。能寄生于植物。接合菌門（Zygomycota）多數(shù)腐生，少數(shù)為寄生，多為無(wú)隔菌絲。無(wú)性繁殖產(chǎn)生孢子囊孢子;有性繁殖產(chǎn)生接合孢子。極少數(shù)偶致動(dòng)物疾病。子囊菌門（ycota）：腐生或寄生。寄生于植物上可引起多種植物病害，少數(shù)寄生人、動(dòng)物體上。類群較大，多數(shù)為有隔菌絲，少數(shù)為單細(xì)胞。無(wú)性繁殖為出芽或形成分生孢子，有性繁殖形成子囊孢子。擔(dān)子菌門（Basidiomycota）為大型腐生真菌，由有隔菌絲組成各種子實(shí)體，多數(shù)不存在無(wú)性繁殖，有性繁殖產(chǎn)生擔(dān)孢子1、接合菌門

2、擔(dān)子菌門擔(dān)子菌最大特點(diǎn)是形成擔(dān)子（basidium)擔(dān)孢子(basidiospore)3、子囊菌門共同特征：有性生殖的孢子都長(zhǎng)在子囊中稱作子囊孢子

第二節(jié)真菌的基本特性

形態(tài)與結(jié)構(gòu)培養(yǎng)特性一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：比細(xì)菌復(fù)雜主：幾丁質(zhì)(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖組成）其他：葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質(zhì)細(xì)胞壁缺乏肽聚糖細(xì)胞膜含固醇細(xì)胞內(nèi)有較為典型的核結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器

大?。罕燃?xì)菌大幾倍～幾十倍形態(tài)特點(diǎn)

1、單細(xì)胞真菌:圓形或卵圓形酵母型真菌類酵母型（有假菌絲）真菌2、多細(xì)胞真菌:又稱絲狀菌或霉菌組成：菌絲孢子多細(xì)胞真菌形態(tài)

---菌絲、孢子孢子菌絲（1）菌絲（

hypha）由真菌的孢子長(zhǎng)出芽管，逐漸延長(zhǎng)呈絲狀，稱菌絲，菌絲又可長(zhǎng)出許多分支，交結(jié)成團(tuán)稱菌絲體菌絲按結(jié)構(gòu)可分為:無(wú)隔菌絲；有隔菌絲菌絲體按功能可分為營(yíng)養(yǎng)菌絲—伸入到培養(yǎng)基內(nèi)，吸收營(yíng)養(yǎng)氣生菌絲—露出培養(yǎng)基表面，生殖菌絲（可產(chǎn)生孢子)菌絲按結(jié)構(gòu)可分為：有隔菌絲與無(wú)隔菌絲

有隔菌絲：大部分真菌的菌絲在一定間距見有橫隔，稱隔膜。將菌絲分成一連串的細(xì)胞。

無(wú)隔菌絲：

菌絲中無(wú)橫隔將其分段，整條菌絲就是一個(gè)細(xì)胞。在一個(gè)細(xì)胞內(nèi)含有許多核，是一種多核單細(xì)胞真菌菌絲的形態(tài)菌絲形態(tài)：有助于鑒別真菌

（2）孢子（spore）真菌的繁殖器官，一條菌絲上可長(zhǎng)出多個(gè)孢子，孢子又可發(fā)芽伸出芽管，發(fā)育成菌絲體。

孢子種類:

根據(jù)形態(tài)分生孢子:大分生孢子；小分生孢子;葉狀孢子:芽生孢子；厚膜孢子；關(guān)節(jié)孢子;孢子囊孢子孢子形態(tài)可作為真菌鑒定的依據(jù)

①分生孢子（condium）由生殖菌絲末端細(xì)胞分裂或收縮形成，也可在菌絲側(cè)面出芽形成，有兩種：大分生孢子（macrocondium）：多細(xì)胞組成，梭狀、棍棒狀小分生孢子（microcondium）：?jiǎn)渭?xì)胞組成真菌無(wú)性孢子形態(tài)芽生孢子厚膜孢子關(guān)節(jié)孢子小分生孢子大分生孢子1葉狀孢子2分生孢子②葉狀孢子（thallospore）由菌絲細(xì)胞直接形成：芽生孢子——出芽形成；厚膜孢子——胞漿濃縮，胞壁增厚而成；關(guān)節(jié)孢子——由菌絲分化成長(zhǎng)方形的幾個(gè)節(jié)段，胞壁稍厚芽生孢子關(guān)節(jié)孢子厚膜孢子③孢子囊孢子（sporangiospore）：菌絲末端膨大成囊狀，內(nèi)含許多孢子。有性孢子和無(wú)性孢子：

有性孢子——由同一菌體或不同菌體上的兩個(gè)細(xì)胞融合而成。

無(wú)性孢子——由菌絲上的細(xì)胞分化生成，并不發(fā)生細(xì)胞融合，包括：分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。真菌的有性孢子（根霉菌的接合孢子）是由兩個(gè)同型但性別不同的配子囊相結(jié)合,經(jīng)過質(zhì)配和核配后形成(2N).

真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60℃-70℃短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽胞作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形

幾個(gè)概念假菌絲Pseudohyphae:酵母菌芽殖時(shí)長(zhǎng)大的子細(xì)胞與母細(xì)胞不立即分離，期間僅以狹小的面積相連，這種藕節(jié)狀的細(xì)胞串稱假菌絲。真菌絲hyphae

：真菌的孢子長(zhǎng)出芽管，逐漸延長(zhǎng)，細(xì)胞相連，其間隔面積與細(xì)胞直徑一致，則這種竹節(jié)狀的細(xì)胞串稱真菌絲。二相性真菌（dimorphicfungi

）：有些真菌在體內(nèi)或含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)時(shí)呈酵母菌，在普通培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)時(shí)呈絲狀菌，這種因環(huán)境條件的改變，而發(fā)生兩種形態(tài)互變，稱為真菌的二相性。霉菌：凡是生長(zhǎng)在固體培養(yǎng)基上而長(zhǎng)成絨毛狀或棉絮狀的菌絲體的真菌，統(tǒng)稱為霉菌。是絲狀真菌的俗稱37℃室溫二相性真菌1.培養(yǎng)特性：

營(yíng)養(yǎng)要求不高沙氏培養(yǎng)基(Sabourand

，SDA）：應(yīng)用最廣泛的真菌基礎(chǔ)分離培養(yǎng)基

4％葡萄糖，1％蛋白胨，pH4.0～6.0

生長(zhǎng)速度:較慢溫度：淺部病原菌：22～28℃，1～4W

深部病原菌：37℃，3～4DpH：4.0～6.0

需要一定濕度

二、真菌的培養(yǎng)2.培養(yǎng)基常用真菌培養(yǎng)基及用途培養(yǎng)基用途沙保培養(yǎng)基真菌的常規(guī)培養(yǎng)

放線菌酮－氯霉素瓊脂同上

玉米粉瓊脂觀察白假絲酵母菌的厚膜孢子馬鈴薯葡萄糖瓊脂觀察真菌菌落色素，用于鑒別尿素瓊脂用生化反應(yīng)鑒別真菌（紅色癬菌和石膏樣癬菌）心腦浸液葡萄糖血瓊脂深部真菌培養(yǎng)（二相性真菌）使用培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)標(biāo)本來(lái)源培養(yǎng)目的作選擇

3.培養(yǎng)方法

（1）平皿培養(yǎng)

（2）試管培養(yǎng)：多用于菌種傳代接種與保存

（3）玻片培養(yǎng)(小培養(yǎng)

)

真實(shí)了解真菌的菌絲與孢子的生長(zhǎng)關(guān)系，可直接在玻片上培養(yǎng)后觀察，此稱真菌的小培養(yǎng)

真菌培養(yǎng)是目前鑒定真菌的唯一方法培養(yǎng)真菌的溫度為28℃，深部真菌為37℃4.菌落特征沙保弱培養(yǎng)基上，3種類型的菌落：酵母型菌落

(yeasttypecolony)：菌落柔軟、光滑、濕潤(rùn)。鏡下可見單細(xì)胞性的芽生孢子，無(wú)菌絲。新生隱球菌菌落類酵母型菌落（酵母樣菌落）(yeast-liketypecolony)：和酵母型菌落相似，鏡下可見假菌絲。白色念珠菌菌落絲狀型菌落(filamentoustypecolony)：由多細(xì)胞菌絲體組成的絮狀菌落，絲狀真菌或霉菌菌落。(菌落較大)絲狀菌落：多細(xì)胞真菌菌絲體,菌落呈棉絮狀、絨毛狀，并產(chǎn)生不同的色素菌落的正背兩面可顯不同的顏色絲狀菌落假絲酵母菌菌落假菌絲伸入培養(yǎng)基，形成表面似酵母型菌落培養(yǎng)基內(nèi)有假菌絲的類酵母型菌落三、真菌的致病性（一）病原性真菌感染（二）條件致病性真菌感染（三）真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病（四）真菌性中毒（五）真菌與腫瘤

1.病原性真菌感染：主要是外源性感染淺部真菌：有親嗜表皮角質(zhì)特性，侵犯皮膚、指甲及須發(fā)等組織深部真菌：可侵犯皮下，內(nèi)臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。球孢子菌、皮炎芽生菌、組織胞漿菌

2.條件致病性真菌感染

主要是內(nèi)源性感染（如白色念珠菌），與機(jī)體抵抗力，免疫力降低及菌落失調(diào)有關(guān)

3．真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病

由真菌性過敏原（如孢子抗原）引起過敏癥，如哮喘，變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎和癬菌疹等。4．真菌毒素中毒癥：

侵犯害肝、腎、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素素5、真菌毒素與腫瘤

如：黃曲霉素誘發(fā)肝癌第21章引起皮膚和軟組織感染的真菌淺部感染真菌表面感染真菌皮膚癬感染真菌皮下組織感染真菌淺部真菌：引起皮膚和軟組織感染的真菌共同特點(diǎn)：親角質(zhì)蛋白侵犯人和動(dòng)物的皮膚、毛發(fā)、甲板皮膚癬真菌（Dermatophyte

）一、微生物學(xué)特性及致病性

又稱皮膚絲狀菌

侵犯人和動(dòng)物的皮膚、毛發(fā)、指（趾）甲，引起的感染統(tǒng)稱為皮膚癬菌?。╠ermatophytosis），簡(jiǎn)稱癬（tinea）人類最多見的真菌病皮膚癬菌分為3個(gè)屬：皮膚絲狀菌毛癬菌屬小孢子菌屬表皮癬菌屬

體癬

股癬

黑點(diǎn)癬白癬皮膚癬菌的特征屬名種數(shù)（致?。?/p>

侵犯部位形態(tài)特征皮膚指甲毛發(fā)大分生孢子小分生孢子菌絲毛癬菌屬14+++細(xì)長(zhǎng)、棒形、壁薄，少見或無(wú)梨形、棒形，較多見螺旋狀、鹿角狀、結(jié)節(jié)狀、球拍狀、破梳狀，單純細(xì)菌絲小孢子癬菌屬8+-+紡錘形，壁較厚，較多見棒形，卵圓形，較少見球拍狀及破梳狀菌絲表皮癬菌屬1++－梨形、壁較薄，多見無(wú)單純菌絲毛癬菌屬小孢子菌屬表皮癬菌屬

二、微生物學(xué)檢查：

(一)臨床標(biāo)本的收集

1．皮損的活動(dòng)邊緣

2．感染甲的甲下厚而脆的角化物盡可能接近健甲與病甲交界處的活動(dòng)損害部位取材

3．變色處或皮面上斷裂處的毛發(fā)

體癬皮屑可見關(guān)節(jié)孢子(二)直接鏡檢：KOH濕片檢查取標(biāo)本置于玻片上加一滴10%KOH溶液，蓋上蓋玻片（使角質(zhì)軟化）在火焰上方微加熱，然后稍加按壓鏡檢，先低倍，后高倍（找菌絲、孢子）病發(fā)鏡檢可見發(fā)內(nèi)菌絲

足癬鱗屑鏡檢可見鱗屑細(xì)胞間有菌絲

fungushyphaeonthehair

直接鏡檢：菌鞘(三)分離培養(yǎng)與鑒定

1．標(biāo)本處理：殺死細(xì)菌

2．接種到沙氏瓊脂基上

3．7～l0天生長(zhǎng)菌菌落，2～3周或更長(zhǎng)鑒定菌種

4．必要時(shí)作特殊培養(yǎng)或小培養(yǎng)來(lái)幫助菌種鑒定

5．特異的繁殖結(jié)構(gòu)、如大分生孢子、小分生孢子、螺旋菌絲和鹿角菌絲有助于菌種的鑒定22章引起侵襲性感染的真菌概述

深部感染真菌：侵入人體內(nèi)臟和深部組織以及引起全身感染的真菌深部感染真菌致病性真菌：球孢子菌皮炎芽生菌組織胞漿菌條件致病性真菌念珠菌、新生隱球菌、曲霉菌、毛霉菌白念珠菌熱帶念珠菌克柔念珠菌季也蒙念珠菌都柏林念珠菌類星形念珠菌近平滑念珠菌葡萄牙念珠菌光滑念珠菌克菲念珠菌維斯念珠菌第一節(jié)念珠菌屬（Candida）一、生物學(xué)分類：半知菌亞門，半知菌綱，隱球菌目念珠菌屬150多個(gè)種，11種對(duì)人有致病性：條件致?。浩つw粘膜感染鵝口瘡，陰道炎內(nèi)臟感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、膀胱炎，腎盂腎炎中樞神經(jīng)感染：腦膜（腦）炎、腦膿腫二、致病性正常菌群（體表、口腔、上呼吸道、腸道與陰道粘膜）三、微生物學(xué)檢查

1.取標(biāo)本鏡檢：根據(jù)不同疾病采取不同標(biāo)本

標(biāo)本（痰、膿、腦脊液等）Gram染色

鏡檢（G+）（孢子、假菌絲）

假絲酵母菌PseudohyphaeofCandidaalbicansinbrain.PASstainGram-stainofvaginalsmearshowingCandidaalbicansandepithelialcellsSkinsmear2.分離培養(yǎng)鑒定

標(biāo)本→沙保培養(yǎng)基→觀察菌落形態(tài)、假菌絲普通瓊脂、血瓊脂與沙保培養(yǎng)基需氧，室溫或37℃甚至42℃生長(zhǎng)良好菌落灰白色或奶油色，表面光滑，帶有濃厚的酵母氣味出芽方式繁殖，有大量向下生長(zhǎng)的假菌絲，呈類酵母型菌落CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基白色念珠菌典型特征為藍(lán)綠色熱帶念珠菌顯藍(lán)灰色或鐵藍(lán)色光滑念珠菌顯紫色克柔假絲酵母顯粉色其它念珠菌顯白色細(xì)菌被抑制。

3、鑒定

(1)芽管形成試驗(yàn):

白色念珠菌產(chǎn)生芽管，其他念珠菌不產(chǎn)生芽管人血清或羊血清中，37℃、1.5～4h,芽生孢子及芽管形成

(2)厚膜孢子形成試驗(yàn):

厚膜孢子：菌絲頂端或中間細(xì)胞膨大，細(xì)胞壁變厚，細(xì)胞質(zhì)濃縮，形成的孢子標(biāo)本玉米粉瓊脂培養(yǎng)基25℃，24～48h

（菌絲頂端、側(cè)緣或中間）

觀察厚膜孢子假菌絲和厚膜孢子可幫助診斷

玉米吐溫80(亞甲藍(lán)染色)（3）生化反應(yīng)

1）糖發(fā)酵試驗(yàn)

37℃，觀察糖發(fā)酵情況2）糖同化試驗(yàn)（carbonassimilationtest）

主用于酵母菌的鑒定A.菌液制備：菌懸液(1ml無(wú)菌生理鹽水+一接種環(huán)的新培養(yǎng)菌）B.澆制平板：基礎(chǔ)培養(yǎng)基（45℃）+菌懸液混勻，凝固C.點(diǎn)樣：培養(yǎng)皿底部做上糖名稱標(biāo)記，按標(biāo)記加糖少許(約米粒大)，

24h后無(wú)變化可重復(fù)加糖D.觀察：葡萄糖作對(duì)照

25-28℃，1-2天凡能同化者在所加糖的周圍形成生長(zhǎng)圈酵母菌對(duì)各種糖的利用，因種類不同而異這是酵母菌分類鑒定的一個(gè)重要依據(jù)

3）利用硝酸鉀試驗(yàn)（-）尿素酶（-）

TZC試驗(yàn)：將待測(cè)菌接種于含0.005％氯化三苯四氮唑的葡萄糖蛋白胨瓊脂上，經(jīng)22～25℃，24～48h培養(yǎng)，白色念珠菌不變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈紅色或深紅色

麥葡半乳肌蔗乳糖(醇)同化試驗(yàn)（4）其它核酸檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)動(dòng)物試驗(yàn)協(xié)助診斷：(1,3)-β-D-葡聚糖（BDG）