關(guān)于鴨疫里默氏桿菌第一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四主要內(nèi)容鴨疫里默氏桿菌概述防治疫苗病原血清型致病因子第二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四一、概述

鴨疫里默氏桿菌?。唫魅拘詽{膜炎），又名新鴨病，鴨疫綜合征。該病是由鴨疫里默氏桿菌引起的一種慢性或急性敗血癥狀的接觸性傳染病。由于該病的高發(fā)病率與高死亡率，已成為危害各國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)的主要細(xì)菌性傳染病之一。

第三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四流行病學(xué)

易感動(dòng)物：

家鴨、火雞、鵝、番鴨、野鳥(niǎo)，以2-8周齡的鴨最為常見(jiàn)。

傳播途徑：經(jīng)污染的飼料、飲水、飛沫、塵埃等通過(guò)呼吸道和消化道，以及損傷的皮膚等途徑傳播。

流行季節(jié)：一年四季均可發(fā)病，以氣溫低、濕度大的季節(jié)發(fā)病和死亡最高

第四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四臨床癥狀圖1.眼周?chē)碀裥纬伞把廴Α眻D2.綠色下痢

第五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

圖3.關(guān)節(jié)炎所致的站立不穩(wěn)圖4.死時(shí)的角弓反張第六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四病理變化剖檢以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎及腦膜炎為基本特征。圖5.纖維素性心包炎圖6.纖維素性腦膜炎第七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

鴨疫里默氏桿菌(RA)是鴨疫里默氏桿菌病的病原菌。Hendrison和Hilbert于1932年首次分離鑒定。該病菌先后被列入莫拉氏菌屬、巴氏桿菌屬。根據(jù)培養(yǎng)特性、16srRNA序列和表型，明確了其分類(lèi)地位，并由Segers等(1993)建議鴨疫里默氏桿菌獨(dú)立出來(lái)成立鴨疫里默氏桿菌屬。二、病原第八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四形態(tài)

革蘭氏陰性小桿菌,大小為0.2-0.4um,常單個(gè)或者成對(duì)存在,有時(shí)也成長(zhǎng)絲狀,無(wú)鞭毛。瑞氏染色呈兩極濃染；印度墨汁染色可見(jiàn)有莢膜。

圖7.印度墨汁染色第九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

在電鏡下觀察到鴨疫里默氏桿菌有特殊形態(tài)結(jié)構(gòu),即在細(xì)菌的頂端或者側(cè)面有1-2個(gè)與菌體相連的芽狀贅生物,其大小差異懸殊,直徑從30-200nm不等。圖8.頂端與側(cè)面的芽狀贅生物圖9.即將脫落的芽狀贅生物第十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四培養(yǎng)特性

鴨疫里默氏桿菌在巧克力培養(yǎng)基上生長(zhǎng)旺盛，菌落不溶血，呈奶油色半透明狀圓形微突起。在普通瓊脂和麥康凱培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。從病料中分離培養(yǎng)鴨疫里默氏桿菌時(shí)在含CO2環(huán)境中生長(zhǎng)更好。

圖10.RA在巧克力平板上的菌落圖11.RA在鮮血平板上的菌落第十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四三、血清型

依據(jù)鴨疫里默氏桿菌表面多糖抗原成分,可以用凝集試驗(yàn)和沉淀試驗(yàn)進(jìn)行血清型分析。

圖12.凝集試驗(yàn)

圖13.沉淀試驗(yàn)第十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四Harry用平板凝集試驗(yàn)分為16個(gè)血清型,即血清A-P型；Brogden用沉淀試驗(yàn)分為7個(gè)血清型,即血清1-7型；Bisgarrd建議以阿拉伯?dāng)?shù)字表示,己有菌株血清型分別命名為血清1-13型；Sandhu等將血清型擴(kuò)增到17種,即血清1-17型；現(xiàn)被公認(rèn)的鴨疫里默氏桿菌有21個(gè)血清型,即1-21型。第十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

程安春（2003）提出4個(gè)新的血清型存在,命名為22-25型；張大丙（2005）提出血清10型還存在5個(gè)亞型，并鑒定出1個(gè)變異株、2個(gè)可能的新型菌株

Sandhu（1979）認(rèn)為RA各血清型之間不發(fā)生交叉反應(yīng)，但張大丙(2002)發(fā)現(xiàn)2型與17型之間，6型、

12與16型之間存在交叉反應(yīng)。第十四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四四、致病因子

Cam基因

Crasta(2002)從RA基因文庫(kù)中成功篩選出潛在致病因子cam基因，它表達(dá)CAMP（協(xié)同溶血素蛋白）。CAMP的分子量為37kD,與唾液酸蛋白酶有很高的同源性，能協(xié)同其它細(xì)菌產(chǎn)生溶血作用,可能與致病性有關(guān)第十五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四明膠酶

李繼樣（2008）發(fā)現(xiàn)所測(cè)RA菌株中90%菌株能改變鴨胚成纖維細(xì)胞形態(tài)，具有較強(qiáng)致病作用，分析發(fā)現(xiàn)這些菌株具有水解明膠的活性，分離獲得55ku的活性蛋白質(zhì)，證實(shí)其具有水解明膠、改變細(xì)胞形態(tài)的性質(zhì)，是降解明膠的蛋白水解酶，可能是RA的致病因子之一。第十六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

明膠酶是分解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS)的一種，屬于基質(zhì)金屬蛋白酶n型，含72kDa(A型,MMP-2)和92kDa(B型,MMP-9)兩種。研究表明,明膠酶的表達(dá)和胃癌、結(jié)腸癌和乳癌等癌癥的發(fā)展有關(guān)。第十七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

細(xì)菌液化明膠的能力可因細(xì)菌種類(lèi)不同而有顯著差異,因此明膠液化試驗(yàn)很早以來(lái)就被用來(lái)作為鑒定細(xì)菌的重要生化指標(biāo)之一。第十八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四利用明膠-營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板對(duì)分離鑒定的RA進(jìn)行明膠液化特性測(cè)定。有毒力的菌株能液化明膠,無(wú)毒力的菌株不液化明膠。圖14.RA不同菌株的明膠液化特性第十九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四明膠酶對(duì)RA侵襲力的影響

10日齡試驗(yàn)鴨頸部皮下接種后，對(duì)16h靜脈血中細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。圖15．明膠酶對(duì)細(xì)菌侵襲力的影響第二十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四表1.明膠酶對(duì)細(xì)菌侵襲力的影響第二十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四明膠酶對(duì)動(dòng)物致死率的影響表2.動(dòng)物死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)第二十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

外膜蛋白外膜蛋白是致病菌細(xì)胞外膜中的一個(gè)主要組成成分，參與細(xì)菌黏附與侵襲體細(xì)胞。

圖16.大腸桿菌外圍結(jié)構(gòu)示意圖第二十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

Hu(2011)通過(guò)對(duì)含外膜蛋白（OmpA）菌株與不含外膜蛋白的菌株特性研究證實(shí)RA外膜蛋白是其一個(gè)重要的致病相關(guān)因子。第二十四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四圖17.RAompA缺失株的構(gòu)建技術(shù)原理第二十六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四獲得opmA缺失株Th4ΔompA用BamHI、MscI、XhoI、SphI處理RA的ompA基因用MscI、XhoI將SpecR從質(zhì)粒pFW5切下將片段連接在BamHI-和SphI-處理過(guò)的載體pMEG375上合成載體pMEG375-LSR(SpecR)載體pMEG375-LSR轉(zhuǎn)化至E.coliDH5aλPir第二十七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四細(xì)菌黏附與侵襲試驗(yàn)圖18.Th4ΔompA缺失株及其親本株的黏附與侵襲試驗(yàn)結(jié)果第二十八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

外膜蛋白的致病作用外膜蛋白有助于細(xì)菌對(duì)宿主細(xì)胞的吸附外膜蛋白有助于細(xì)菌通過(guò)防御屏障外膜蛋白有助于細(xì)菌逃避免疫防御外膜蛋白的致病機(jī)理第二十九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四其他的致病因子莢膜多糖：病原菌的莢膜多糖對(duì)宿主來(lái)說(shuō)都是致病因子,可使菌體免受吞噬細(xì)胞與抗體的攻擊,在細(xì)菌毒力中起著極其重要的作用。莢膜多糖亦是鴨疫里默氏桿菌的一種主要抗原,對(duì)其研究對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐有著重要的意義。第三十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四五、疫苗含菌體成分苗滅活苗活苗現(xiàn)階段的疫苗第三十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

活苗

Sandhu等(1991)用1、2、5型鴨疫里默氏桿菌自然弱毒菌株制備了三價(jià)活疫苗，經(jīng)口服和氣霧免疫1日齡北京雛鴨后不引起任何明顯的副作用，對(duì)同血清型強(qiáng)毒的攻擊保護(hù)期長(zhǎng)達(dá)42天。據(jù)了解該疫苗已在美國(guó)等國(guó)家上市銷(xiāo)售使用。第三十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四

滅活苗

Sandhu等(l979)將鴨疫里默氏桿菌1、2、5型培養(yǎng)后用福爾馬林滅活制成三價(jià)滅活菌苗；在三價(jià)滅活苗的基礎(chǔ)上，將大腸桿菌O78與鴨疫里默氏桿菌(1、2、5型)的福爾馬林滅活液混合制備二聯(lián)疫苗，該種聯(lián)苗對(duì)鴨疫里默氏桿菌的保護(hù)效果優(yōu)于鴨疫里默氏桿菌單苗。

胡海清等(2002)用鴨疫里默氏桿菌制成三價(jià)油乳劑滅活苗。

程安春等(2004)將鴨疫里默氏桿菌1、2、4、5血清型制成鋁膠復(fù)合佐劑四價(jià)滅活疫苗。

黃承鋒等(2006)將鴨疫里默氏桿和大腸桿菌制成雙聯(lián)滅活蜂膠苗。第三十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期四含菌體成分苗包括亞單位疫苗和基因工程苗。目前關(guān)于RA