微柱凝膠免疫檢測卡長春博迅第1頁/共61頁微柱凝膠免疫檢測技術MicrocolumnGelImmunoassay第2頁/共61頁

長春博迅生物技術有限責任公司是一家中外合資高新技術企業(yè)。公司自主研發(fā)了微柱凝膠免疫檢測技術，替代了在血型檢測、抗體篩查以及交叉配血過程中應用多年的試管、玻片血凝檢測方法，使Coomb’s試驗作為臨床常規(guī)檢測項目成為可能，同時解決了混合血液標本檢測標準等問題，使我國紅細胞血型檢測技術跨入國際先進行列。在國際上，博迅生物率先研發(fā)出微柱凝膠血小板血型抗原抗體檢測技術，使血小板血型抗原抗體的臨床常規(guī)檢測成為可能，并使其同紅細胞的檢測一樣簡捷、方便。我公司通過了GMP認證。獲得了SFDA頒發(fā)的兩項新藥證書。公司擁有雄厚的技術力量，竭誠為客戶提供及時、周到的售后服務和技術支持。博迅公司致力于新產(chǎn)品的開發(fā)，在市場競爭中塑造崛起的民族品牌。公司簡介第3頁/共61頁

長春博迅公司主要產(chǎn)品如下：1、ABO、RhD血型定型試劑卡（ABO、RhD血型定型試劑卡，ABO、RhD抗原檢測卡，新生兒溶血病檢測卡Ⅰ）2、血型不完全抗體檢測卡（抗人球蛋白試驗交叉配血卡，不規(guī)則抗體篩檢卡，新生兒溶血病檢測卡Ⅱ，HDN母體IgG抗體效價檢測卡，血小板抗體篩檢卡，血小板交叉配血卡）

用于血型血清學檢測。產(chǎn)品介紹第4頁/共61頁

反應原理

微柱凝膠免疫反應的本質是紅細胞凝集試驗，也可稱之微柱凝膠血凝試驗（MicrocolumnGelHeamagglutinationAssay，MGHA）在微柱凝膠管中，紅細胞和相應抗體結合后，形成紅細胞凝集團塊。在一定離心力下，該凝集團塊位于膠表面或膠中；而紅細胞未和相應抗體結合，仍為分散的紅細胞，在同樣的離心力下，紅細胞沉降到微柱管尖底部。第5頁/共61頁

特點和優(yōu)點

簡單：不需洗滌，對陰性結果不需確證試驗，適用于大量標本檢測，解決了Coombs試驗因為程序復雜費時等原因未能在臨床常規(guī)應用問題。使不完全抗體檢測理論“金標準”成為臨床的“金標準”。多份標本一次離心出結果，有利于臨床大量標本檢測。另外還具備準確、敏感、標本用量少、結果保存時間長、易于標準化、操作更安全等優(yōu)點。第6頁/共61頁ABO、RhD血型定型試劑卡

1、ABO、RhD血型定型試劑卡（正反定型）——用于血型定型

操作簡單，結果清晰、準確，尤其對弱抗原和亞型的檢測有傳統(tǒng)的方法無法比擬的敏感性，成為臨床血型檢測的常規(guī)方法。第7頁/共61頁2、ABO、RhD血型定型試劑卡(ABD)——用于血型抗原檢測一卡兩人份，可作為血型復查的常規(guī)檢測卡。3、ABO、RhD血型定型試劑卡（Rh）——用于Rh血型抗原檢測對Rh系統(tǒng)抗原進行檢測，微管中含有抗D、抗C、抗c、抗E、抗e單克隆抗體。第8頁/共61頁新生兒溶血病檢測卡系列

新生兒溶血病（HDN）是發(fā)生在胎兒和新生兒的一種免疫溶血性疾病。該病由母嬰血型不合引起，輕者出現(xiàn)貧血、水腫、肝脾腫大，嚴重者造成新生兒死亡或發(fā)生核黃疸且產(chǎn)生后遺癥。準確的產(chǎn)前和產(chǎn)后診斷可為HDN的預防及治療提供依據(jù)，并指導臨床采取相應措施，預防HDN的發(fā)生，對優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質具有重要的意義。1、血型不完全抗體檢測卡——用于孕期母體IgG抗體效價檢測

對孕婦體內(nèi)IgG類不完全抗體效價做定期檢測，根據(jù)結果初步判斷胎兒是否有患新生兒溶血病的可能。第9頁/共61頁2、ABO、RhD血型定型試劑卡（新生兒溶血病檢測卡Ⅰ）

用于確定新生兒ABO、RhD抗原及新生兒紅細胞是否在母體內(nèi)被不完全抗體致敏。其靈敏度是常規(guī)血凝試驗法的十倍，且標本用量少，解決了新生兒采血不易的問題。其中檢測管含有－AB抗體，對于新生兒血型的鑒定更安全準確，避免了漏檢情況的發(fā)生。3、血型不完全抗體檢測卡（新生兒溶血病檢測卡Ⅱ）

用于游離放散試驗，檢測新生兒體內(nèi)游離抗體和放散抗體。第10頁/共61頁1、抗人球蛋白交叉配血——用于交叉配血

可同時檢出IgM和IgG類抗體，另有加入抗C3d的品種，使臨床輸血更安全，杜絕輸血反應的發(fā)生。2、不規(guī)則抗體篩檢——用于不規(guī)則抗體篩檢

配套使用的篩檢細胞包含多個血型系統(tǒng)的抗原，可以檢出更多的臨床有意義抗體，尤其對配血不合的原因查找有重要意義，也為受檢者體內(nèi)不規(guī)則抗體的進一步鑒定提供了檢測范圍。血型不完全抗體檢測卡第11頁/共61頁血小板抗原抗體反應試劑盒

用于臨床常規(guī)的血小板配型試驗和血小板抗體篩檢。指示細胞上包被著鼠抗人血小板單克隆抗體，其Fab段可與血小板抗原結合，F(xiàn)c段結合在人紅細胞膜上。如果受檢者血清中存在血小板抗體，該血小板抗體Fab段與血小板抗原結合。相鄰的血小板抗體Fc段通過抗人球蛋白Fab段橋聯(lián)成肉眼可見的免疫復合物。即以抗人球蛋白為橋，連接血小板抗體、血小板和指示細胞，形成免疫復合物（指示細胞—血小板—血小板抗體—抗人球蛋白—血小板抗體—血小板—指示細胞），形成凝集網(wǎng)絡。該復合物在一定離心力下，浮于膠表面或位于膠中。如果受檢者血清中無抗血小板抗體，則不能形成肉眼可見的免疫復合物，指示細胞沉于微柱凝膠管尖底部。第12頁/共61頁組成：

1、指示細胞1ml×42、血小板抗體陰性血清對照1.2ml×13、血小板抗體陽性血清對照1.2ml×14、紅細胞稀釋液4ml×15、微柱凝膠卡6孔/卡×126、紅細胞保存液10ml×17、血小板廣譜裂解抗原4ml×1

此檢測方法簡化了多次洗滌的繁瑣操作，大大縮短了試驗時間，可為血小板輸注無效癥在血液血清學范圍內(nèi)提供科學的解釋。第13頁/共61頁1、血型不完全抗體檢測卡——用于血小板交叉配血試驗

經(jīng)過配型，輸注與患者相合或基本相合的血小板，才能達到安全有效的輸注血小板療效。2、血型不完全抗體檢測卡——用于血小板抗體檢測

用于血小板免疫性疾病相關的同種抗體、自身抗體，藥物依賴性抗體的篩檢。第14頁/共61頁

配套試劑反定型試劑：采用新鮮血制備，抗原性穩(wěn)定、完整，保存期三個月以上，不同濃度、規(guī)格可供選擇第15頁/共61頁篩檢細胞：采用新鮮血制備，抗原性穩(wěn)定、完整，保存期三個月以上，不同濃度、規(guī)格可供選擇紅細胞稀釋液：稀釋紅細胞，排除纖維蛋白干擾紅細胞保存液：可使紅細胞保存三個月第16頁/共61頁巰基乙醇（2-Me）：新生兒溶血病檢測配套試劑牛血清白蛋白：新生兒溶血病檢測配套試劑二硫蘇糖醇(DTT)：用于滅活IgM類抗體第17頁/共61頁血小板廣譜裂解抗原：多人份血小板制備，抗原譜廣泛，可長期存放，方便使用，抗原性穩(wěn)定指示細胞：凍干品，可長期保存稀釋液：血小板配套試劑PH7.2PBS：用于洗滌血小板

第18頁/共61頁產(chǎn)品操作一、準備工作：試劑卡的準備：1、在18-25℃條件下平衡30分鐘。2、離心2-3分鐘，均衡反應介質。3、外觀檢查應無氣泡、干膠和雜質。4、要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結（因冷熱交替產(chǎn)生的）污染鄰孔。第19頁/共61頁

檢測標本的準備：1、標本要求新鮮血（如陳舊血需設陰性對照）。2、抗凝血樣標本要上清澄清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、溶血、脂肪等狀，應再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影響紅細胞沉降，建議使用紅細胞稀釋液。3、血辮血樣須放置試管中離心處理，確保血清澄清微黃。必要時需洗滌。4、在18-25℃條件下平衡30分鐘，防止冷凝集。紅細胞懸液的制備：1、將紅細胞配制為0.5-0.8%的懸液，最高濃度不要超過1%。如，取8微升壓積紅細胞，加入到1毫升的紅細胞稀釋液中，配制出的即是0.8%的紅細胞懸液。2、外觀檢查呈均勻淡紅色，無血塊、無絮狀物（如有纖維蛋白需去除）。第20頁/共61頁

二、結果判定：陽性結果：紅細胞抗原與相應抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應。陰性結果：紅細胞抗原無相應的抗體結合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復合物，紅細胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反應。反應強度：特異性紅細胞抗原抗體復合物位于膠表面，為強陽性反應；復合物在膠中，為弱陽性反映；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應愈弱。第21頁/共61頁4+紅細胞復合物（凝集）位于凝膠表面3+大部分紅細胞復合物位于凝膠表面，少部分位于凝膠中部2+大部分紅細胞復合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部1+紅細胞復合物位于凝膠中下部±

與同一卡中陰性管結果對照，如與陰性結果有差別，即為±—

紅細胞完全沉積在凝膠管尖底部完全溶血凝膠和液體無凝集或未凝集的紅細胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色不完全溶血殘留紅細胞在膠表面、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色混合凝集紅細胞復合物位于凝膠表面和凝膠底部反應強度現(xiàn)象及說明４＋

３＋２＋＋±－ＨＨＭ

完全不完全混合凝集第22頁/共61頁三、標準操作規(guī)程：

1、ABO、RhD血型定型試劑卡（單克隆抗體）操作步驟：1）將準備好的試劑卡做好標記；2）將待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液分別加入1-4管中，各50μl；待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl第23頁/共61頁3）將待檢者血清分別加入5-6管中，各50μl；4）取0.5-0.8%的ABO血型反定型紅細胞試劑懸液，分別加入5-6管中，各50μl；50μl50μl50μl50μl待檢者血清A細胞B細胞第24頁/共61頁5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；6）肉眼觀察結果。結果：A型RhD陽性第25頁/共61頁2、ABO、RhD血型定型試劑卡（單克隆抗體）—紅細胞抗原檢測

操作步驟：1）將準備好的試劑卡做好標記；2）將待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液分別加入第1—3或4—6管中，各50μl；

待檢者1的0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl待檢者2的0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl第26頁/共61頁3）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；4）肉眼觀察結果。結果：1.A型RhD陽性；2.B型RhD陽性第27頁/共61頁3、ABO、RhD血型定型試劑卡（單克隆抗體）——Rh血型抗原檢測

操作步驟：1）將準備好的試劑卡做好標記；2）將待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液分別加入1—6管中，各50μl；待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl50μl50μl第28頁/共61頁3）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；4）肉眼觀察結果。結果：RhD、C、e陽性第29頁/共61頁

4、血型不完全抗體檢測卡—交叉配血試驗操作步驟：1）將準備好的檢測卡做好標記；

2）將供血者0.5-0.8%紅細胞懸液與受血者血清各50μl先后加入主側管中；

受血者1血清50μl受血者2血清50μl受血者3血清50μl供血者1紅細胞50μl供血者2紅細胞50μl供血者3紅細胞50μl第30頁/共61頁3）將受血者0.5-0.8%紅細胞懸液與供血者血清各50μl先后加入次側管中；4）37℃孵育15分鐘；供血者1血清50μl供血者2血清50μl供血者3血清50μl受血者1紅細胞50μl受血者2紅細胞50μl受血者3紅細胞50μl第31頁/共61頁5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；6）肉眼觀察結果。結果：1、3不配合；2配合第32頁/共61頁

5、血型不完全抗體檢測卡—不規(guī)則抗體篩檢

操作步驟：1）將準備好的檢測卡做好標記；

2）將0.5-0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞各50μl分別加入對應的微管中;

50μl50μl50μlⅠⅡⅢ50μl50μl50μlⅠⅡⅢ0.5-0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞第33頁/共61頁3）將待檢者血清各50μl分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中；4）37℃孵育15分鐘；待檢者1血清50μl50μl50μl待檢者2血清50μl50μl50μl第34頁/共61頁5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；6）肉眼觀察結果。根據(jù)所提供的篩檢紅細胞或譜紅細胞的反應格局來判定結果：待檢者1血清中可能含有抗-E待檢者2血清中可能含有抗-c編號Rh-hrKiddMNSDuffyDiegoKellLewisPDCEceJkaJkbMNSsFyaFybDiaKkLeaLebP1Ⅰ＋＋－－＋－＋＋＋－＋＋－－－＋＋＋－Ⅱ＋＋＋＋＋－＋＋＋－＋＋－＋－＋＋＋＋Ⅲ＋＋－＋＋＋＋＋－－＋＋＋－－＋－＋－第35頁/共61頁

6、血型不完全抗體檢測卡—抗人球蛋白試驗

操作步驟：1）將準備好的檢測卡做好標記；

2）將0.5-0.8%待檢者和陰性對照（健康男性O型）紅細胞懸液各50μl分別加入微管中；

50μl陰性對照50μl50μl50μl50μl50μl0.5-0.8%待檢者紅細胞懸液12345第36頁/共61頁3）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；4）肉眼觀察結果。結果：1、2、3和5陽性；4陰性第37頁/共61頁7、ＡＢＯ、ＲhＤ血型定型試劑卡（單克隆抗體）—新生兒溶血病檢測卡Ⅰ

操作步驟：1）將準備好的試劑卡做好標記；2）將0.5％-0.8％待檢者紅細胞懸液分別加入１—６管中,各50μl；

待檢者0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl50μl50μl第38頁/共61頁3）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；4）肉眼觀察結果。結果：AB型RhD陽性，直抗試驗陽性第39頁/共61頁8、血型不完全抗體檢測卡—新生兒溶血病檢測卡Ⅱ

準備工作：熱放散：取同體積的壓積血（至少洗滌三次）和６％牛血清白蛋白混勻，置于56℃孵育10分鐘，期間不斷搖動，然后離心２－３分鐘（1000rpm），取上清。即放散液。酸放散：取一定量的紅細胞用生理鹽水洗滌至少6次,與等體積的酸放散液(取4體積的A液與1體積的B液均勻混合)均勻混合,室溫孵育1-2分鐘,3000rpm離心1分鐘,盡量取盡上清,加入中和液(500μl上清加入60-80μl的中和液),在3000rpm離心2分鐘,取上清,即放散液.操作步驟：1）將準備好的檢測卡做好標記；第40頁/共61頁2）將１－３管分別加入50μl新生兒血清，4—6管分別加入50μl新生兒紅細胞放散液；3）將0.5％-0.8％A型紅細胞懸液各50μl分別加入1號、4號管中；將0.5％-0.8％B型紅細胞懸液各50μl分別加入2號、5號；將0.5-0.8％的O型紅細胞懸液各50μl分別加入3號、6號孔中；

新生兒血清50μl50μl50μl50μl50μl50μl新生兒紅細胞放散液50μl50μl50μl50μl50μl50μl0.5-0.8%紅細胞懸液ABO第41頁/共61頁4）37℃孵育15分鐘；5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；6）肉眼觀察結果。結果：游離抗體陽性、放散試驗陽性第42頁/共61頁9、血型不完全抗體檢測卡—母體IgG抗體效價檢測操作步驟：1）在試管中分別加入200μl母體血清和200μlDTT（或2-Me）應用液，然后置于37℃水浴30-60分鐘。以充分破壞血清中IgM類抗體；200μl母體血清200μlDTT（或2-Me）應用液37℃水浴30-60分鐘第43頁/共61頁2）取6只干凈試管，分別做好標記。將處理后的血清做倍比稀釋；

3264128256512161.4ml

200μl

200μl

200μl

200μl

200μl

標記并加入稀釋液326412825651216處理后的血清200μl

200μl

200μl

200μl

200μl

200μl

第44頁/共61頁3）將準備好的母體IgG抗體效價檢測卡做好標記，依次將50μl倍比稀釋血清分別加入標記卡中；

16326412825651250μl

50μl

50μl

50μl

50μl

50μl

第45頁/共61頁4）在所有孔中分別加入50μl父親（或父親同型）的0.5-0.8%紅細胞懸液（ABO血型系統(tǒng)IgG血型抗體）或在所有孔中分別加入50μl標準O型0.5-0.8%紅細胞懸液（測定孕婦ABO血型系統(tǒng)以外IgG血型抗體）；

5）37℃孵育15分鐘；0.5-0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl50μl50μl第46頁/共61頁6）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）；7）肉眼觀察結果。結果：效價為

1：128第47頁/共61頁

臨床遇到的一些問題及原因的分析第48頁/共61頁

1.問題：正反定型卡反定型側出現(xiàn)弱陽性結果原因及分析：可能是一些特殊標本（如血液病、腫瘤病人和老年人等）抗體比較弱，有些大醫(yī)院做過統(tǒng)計（當?shù)?0%左右的人群存在此情況），不同地區(qū)比例可能不同。第49頁/共61頁

2.問題：血型卡正定型結果陽性弱原因及分析：可能是一些特殊疾病引起抗原減弱。第50頁/共61頁3.問題：交叉配血陰性結果不好（假陽性，有1+或2+結果）原因及分析：a.標本本身的問題（放置時間長；標本本身存在致敏現(xiàn)象；標本被污染）。b.低于實驗要求溫度或沒有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問題。第51頁/共61頁4.問題：正反定型不符原因及分析：a.一些特殊疾病引起。b.新生兒抗體弱或無抗體。c.抗原弱或亞型引起。第52頁/共61頁5.問題：血型卡或抗人球卡出現(xiàn)類似混合凝集現(xiàn)象原因及分析：a.不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。b.標本存放時間過長，存在一些細胞碎片、細胞團塊或纖維蛋白（在膠上部形成紅線或紅色圓環(huán)）。第53頁/共61頁6.問題：卡式法檢測HDN母體IgG抗體效價的臨界值卡式法靈敏度更高，比試管法高1-2個滴度。第54頁/共61頁

注意事項運輸造成的檢測卡凝膠有斷裂，氣泡，干膠時，都會阻礙紅細胞的通過，該卡不能使用。必須使用博研專用離心機，必要時請廠家對離心機進行校正，以確保結果的準確。嚴禁使用非抗凝血標本配制的紅細胞懸液，以避免出現(xiàn)假陽性結果。被測定的血清中，蛋白含量異常時會出現(xiàn)假陽性結果，細胞凝聚團會被誤認為是陽性凝集。不準確的加樣（如加入高濃度的細胞或不足加樣量的血清等）均可干擾結果。實驗溫度過低時，因凝膠顆粒活動性減少單個紅細胞穿過時困難，易出現(xiàn)假陽性結果。由于抗原有效期問題，與新鮮紅細胞相比，存放久的紅細胞抗原反應會相應的減弱；破碎的紅細胞膜浮于膠中或膠面。第55頁/共61頁

血漿或血清中含有顆粒狀的物質可能會阻礙紅細胞通過凝膠顆粒間隙，應對這樣的標本進行離心處理分離。加樣紅細胞亦不應含有顆粒狀物質，此種物質同樣會阻礙紅細胞通過凝膠顆粒間隙，建議使用紅細胞稀釋液。禁用嚴重溶血的標本，它會對結果的判讀產(chǎn)生強烈的干擾。多種藥物（包括大劑量的抗菌素）的使用或在某種疾病的狀態(tài)下，與直抗試驗的陽性結果有關。禁止使用被污染的標本和材料。不同抗原性紅細胞的混合標本、多凝集紅細胞（如T/Tn）或亞型紅細胞（如A3）等可能出現(xiàn)混合反應。被酶過度處理的紅細胞將會產(chǎn)生非特異性凝集。第56頁/共61頁交叉配血實驗注意事項1、應用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫試驗檢測病人紅細胞時，一定要用適量EDTA的試管采血液標本，該標本不能放入4℃-10℃冰箱保存