微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全第1頁(yè)/共35頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）生物安全第2頁(yè)/共35頁(yè)第一部分：

微生物安全的相關(guān)規(guī)定第3頁(yè)/共35頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室相關(guān)規(guī)定《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)第4頁(yè)/共35頁(yè)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)氣溶膠aerosols懸浮于氣體介質(zhì)中的粒徑一般為0.001μm～100μm的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對(duì)穩(wěn)定的分散體系。

氣鎖airlock具備機(jī)械送排風(fēng)系統(tǒng)、整體消毒滅菌條件、化學(xué)噴淋（適用時(shí)）和壓力可監(jiān)控的氣密室，其門(mén)具有互鎖功能，不能同時(shí)處于開(kāi)啟狀態(tài)。生物安全柜biologicalsafetycabinet，BSC具備氣流控制及高效空氣過(guò)濾裝置的操作柜，可有效降低實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對(duì)操作者和環(huán)境的危害。緩沖間bufferroom設(shè)置在被污染概率不同的實(shí)驗(yàn)室區(qū)域間的密閉室，需要時(shí)，設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，其門(mén)具有互鎖功能，不能同時(shí)處于開(kāi)啟狀態(tài)第5頁(yè)/共35頁(yè)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

定向氣流特指從污染概率小區(qū)域流向污染概率大區(qū)域的受控制的氣流。高效空氣過(guò)濾器（HEPA過(guò)濾器）通常以0.3μm微粒為測(cè)試物，在規(guī)定的條件下濾除效率高于99.97%的空氣過(guò)濾器。實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實(shí)驗(yàn)室人員、來(lái)訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全責(zé)任的要求。實(shí)驗(yàn)室防護(hù)區(qū)實(shí)驗(yàn)室的物理分區(qū)，該區(qū)域內(nèi)生物風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較大，需對(duì)實(shí)驗(yàn)室的平面設(shè)計(jì)、圍護(hù)結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流，以及人員進(jìn)入、個(gè)體防護(hù)等進(jìn)行控制的區(qū)域。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)大小以及確定是否可接受的全過(guò)程。第6頁(yè)/共35頁(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)分級(jí)依據(jù)：對(duì)所操作生物因子采取的防護(hù)措施分為四級(jí)：一級(jí)防護(hù)水平最低，四級(jí)防護(hù)水平最高。生物安全防護(hù)水平為一級(jí)的實(shí)驗(yàn)室BSL-1：適用于操作在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物；生物安全防護(hù)水平為二級(jí)的實(shí)驗(yàn)室BSL-2：適用于操作能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物；生物安全防護(hù)水平為三級(jí)的實(shí)驗(yàn)室BSL-3：適用于操作能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物；生物安全防護(hù)水平為四級(jí)的實(shí)驗(yàn)室BSL-4：適用于操作能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第7頁(yè)/共35頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室要求適用時(shí)，應(yīng)符合BSL-1的要求。（見(jiàn)GB19489-20086.1）實(shí)驗(yàn)室主入口的門(mén)、放置生物安全柜實(shí)驗(yàn)間的門(mén)應(yīng)可自動(dòng)關(guān)閉；實(shí)驗(yàn)室主入口的門(mén)應(yīng)有進(jìn)入控制措施。實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域外應(yīng)有存放備用物品的條件。應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)配備洗眼裝置。配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當(dāng)?shù)南緶缇O(shè)備。應(yīng)在操作病原微生物樣本的實(shí)驗(yàn)間內(nèi)配備生物安全柜。應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計(jì)要求安裝和使用生物安全柜。應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)。必要時(shí)，重要設(shè)備（如：培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等）應(yīng)配置備用電源。第8頁(yè)/共35頁(yè)病原微生物危害等級(jí)分類《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489-2008WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》（第三版2004）四類在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物。Ⅰ級(jí)（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲(chóng)等生物因子。Ⅰ級(jí)（無(wú)或極低的個(gè)體和群體危險(xiǎn)）不太可能引起人或動(dòng)物致病的微生物。三類能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。Ⅱ級(jí)（中等個(gè)體危害，有限群體危害）能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原微生物。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。Ⅱ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實(shí)驗(yàn)室暴露也許會(huì)引起嚴(yán)重感染，但對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險(xiǎn)有限。二類能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物。Ⅲ級(jí)（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶爾接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲(chóng)藥物治療的病原微生物。Ⅲ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低）病原微生物通常能引起人或者動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，但一般不會(huì)發(fā)生感染個(gè)體向其他個(gè)體的傳播，并且對(duì)感染由有效的預(yù)防和治療措施。一類能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。Ⅳ級(jí)（高個(gè)體危害，高群體危害）能引起人或動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原微生物。Ⅳ級(jí)（個(gè)體和群體危險(xiǎn)均高）病原微生物通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對(duì)感染一般沒(méi)有有效的預(yù)防和治療措施。第9頁(yè)/共35頁(yè)第二部分：

微生物實(shí)驗(yàn)室的安全及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第10頁(yè)/共35頁(yè)

1.微生物實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)安全事故手套損壞、污染及衣物污染感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜刺傷、切割傷或擦傷潛在危害性氣溶膠的釋放容器破碎及感染性物質(zhì)溢出在臺(tái)面、地面和其他表面未裝可封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂在可封閉的離心桶（安全杯）內(nèi)離心管發(fā)生破裂……第11頁(yè)/共35頁(yè)2.微生物實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估當(dāng)實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)涉及傳染或潛在傳染性生物因子時(shí)，應(yīng)進(jìn)行危害程度評(píng)估。危害程度評(píng)估應(yīng)至少包括下列內(nèi)容：生物因子的種類（已知的、未知的、基因修飾的或未知傳染性的生物材料）、來(lái)源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、預(yù)防和治療。微生物實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的核心風(fēng)險(xiǎn)鑒定與識(shí)別制定降低風(fēng)險(xiǎn)的方案殘余風(fēng)險(xiǎn)鑒定執(zhí)行和再評(píng)估第12頁(yè)/共35頁(yè)生物實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的意義確定生物安全防護(hù)水平（實(shí)驗(yàn)室）；確定保藏、運(yùn)輸、滅活、銷毀的條件；潛在危害分析與意外事故處理程序；個(gè)人防護(hù)；制定微生物操作程序；健康保障與監(jiān)督程序。第13頁(yè)/共35頁(yè)3.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)考慮的因素傳染或疑似傳染媒介的致病性，包括疾病的發(fā)生率和嚴(yán)重性潛在的危害性愈大，風(fēng)險(xiǎn)越高staphylococcusaureus：BSL-2VirusessuchasEbola,Marburg,andLassafever：BSL-4其它因素的抑制作用(HIV)andhepatitisBvirus：也在BSL-2，HIV因?yàn)榉强諝鈧鞑epatitisBvirus:有疫苗傳播途徑遺傳、空氣、食入：新分離出來(lái)的媒介很難確定空氣傳播的：引起最大的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傳染；氣溶性越強(qiáng)，風(fēng)險(xiǎn)越大媒介的穩(wěn)定性氣溶傳染性，脫水，陽(yáng)光/UV，化學(xué)脫水性等第14頁(yè)/共35頁(yè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)考慮的因素傳染劑量微生物與宿主的交互作用復(fù)雜：1unit-成百上千units工作人員的免疫力直接影響其對(duì)工作中接觸的傳染媒介的抵抗力濃度單位體積內(nèi)微生物的數(shù)量含有微生物的環(huán)境（固體組織、粘度等）和操作（媒介擴(kuò)增，超聲或離心等）高擴(kuò)增倍數(shù)的媒介體積越大，風(fēng)險(xiǎn)越大起源地理位置（國(guó)內(nèi)或國(guó)外）宿主起源性質(zhì)（潛在動(dòng)物源性，伴隨疾病爆發(fā)）第15頁(yè)/共35頁(yè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)考慮的因素動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在動(dòng)物中的致病性，傳染性，傳染途徑有效的治療和干預(yù)措施免疫過(guò)的工作人員在BSL-3操作BSL-4Juninvirus免疫也可能是被動(dòng)的（暴露HBV時(shí)，使用血清免疫球蛋白）免疫，提供除機(jī)械工程控制，正確操作，和使用個(gè)人保護(hù)措施外的保護(hù)措施醫(yī)療監(jiān)督風(fēng)險(xiǎn)管理的一部分：雇員健康狀況，血清庫(kù)，參與暴露后管理受風(fēng)險(xiǎn)威脅的人員的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)水平實(shí)驗(yàn)員，維修工，清潔工，動(dòng)物飼養(yǎng)人員第16頁(yè)/共35頁(yè)其它風(fēng)險(xiǎn)因素處理可能被污染的利器：針頭，刀片，碎玻璃，有缺口的金屬手、胳膊或臉上暴露的傷疤、擦傷或刮痕，胳膊或臉可能接觸到、或被噴濺血，血液污染物或病原培養(yǎng)基。第17頁(yè)/共35頁(yè)第18頁(yè)/共35頁(yè)第三部分：

微生物實(shí)驗(yàn)室安全控制第19頁(yè)/共35頁(yè)1.微生物實(shí)驗(yàn)室安全控制措施不得在實(shí)驗(yàn)室吃、喝、吸煙、或使用化妝品不得使用嘴吸式移液管或需用嘴操作的吸式儀器穿實(shí)驗(yàn)服、戴手套、適當(dāng)?shù)难?面部保護(hù)；處理傳染性或污染性材料，使用一次性手套。在使用前檢查所有的個(gè)人防護(hù)衣服和設(shè)備，注意更換受損的或有可能無(wú)效的。避免手/眼/臉接觸，離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前徹底洗手使用75%酒精來(lái)清理工作臺(tái)和手，以減少交叉污染確定動(dòng)物過(guò)敏原接觸人員名單，促使他們參加健康監(jiān)督第20頁(yè)/共35頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室安全控制措施從事轉(zhuǎn)基因工作的人員必須獲得轉(zhuǎn)基因安全委員會(huì)的認(rèn)可，轉(zhuǎn)基因項(xiàng)目必須得到類似批準(zhǔn)工作允許的情況下，避免使用活的病原菌，盡量使用危害性最小的成立專門(mén)小組，以從事傳染性生物媒介物工作；該小組僅在限制范圍內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作在訂購(gòu)任何化學(xué)品之前，確保已經(jīng)建立適當(dāng)?shù)馁A存、使用和應(yīng)急措施在適當(dāng)?shù)奈⑸锇踩珯恢羞M(jìn)行產(chǎn)生氣溶膠的操作盡可能減少使用銳器；迫不得已情況下，必須使用適當(dāng)?shù)目勾┩溉萜鞯?1頁(yè)/共35頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室安全控制措施潔凈操作臺(tái)或其它表面可能被污染，在實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備新配的消毒液備用經(jīng)常清理和換水浴鍋里的水；尤其是在被活微生物或培養(yǎng)基污染的時(shí)候?qū)⑺械膫魅镜幕蛭廴镜奈⑸飶U棄物放入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，以備滅菌；或者，浸入消毒溶液中。進(jìn)行焚燒處理的人類或動(dòng)物廢棄物，必須冷凍貯存在有顏色標(biāo)識(shí)的塑料袋中傳染物或污染物，除非是在密封在有標(biāo)識(shí)的容器中，否則不得從實(shí)驗(yàn)室運(yùn)到其它區(qū)域免疫性或其它常規(guī)注射應(yīng)當(dāng)提供，以提高接觸病原菌人員的免疫力第22頁(yè)/共35頁(yè)2.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急物資儲(chǔ)備急救箱：包括常用的傷口處理藥品和特殊的解毒劑等工具：錘子、（斧子）、扳手、螺絲刀、（繩梯）等適合實(shí)驗(yàn)室使用的滅火器、（滅火毯）房間消毒設(shè)備，如噴霧器和甲醛熏蒸器劃分危險(xiǎn)區(qū)域界限的器材和警告標(biāo)示全套防護(hù)服（*連體防護(hù)服、手套和頭套—用于涉及第一類和第二類病原微生物的事故）有效防護(hù)化學(xué)物質(zhì)和顆粒的全面罩式防毒面具第23頁(yè)/共35頁(yè)3.微生物實(shí)驗(yàn)室安全事故應(yīng)急措施3.1手套損壞、污染1.手套被污染時(shí)應(yīng)立即用消毒劑噴灑手套2.脫下手套，放入黃色垃圾袋內(nèi)（待統(tǒng)一滅菌）3.更換新手套繼續(xù)實(shí)驗(yàn)【注意】在操作高致病性病原微生物時(shí)應(yīng)該佩戴雙層手套第24頁(yè)/共35頁(yè)3.2衣物污染盡快脫掉最外層防護(hù)服，并注意防止感染性物質(zhì)進(jìn)一步擴(kuò)散將已污染的防護(hù)服放入黃色垃圾袋內(nèi)，待高壓滅菌脫掉手套，到污染區(qū)出口處洗手更換防護(hù)服和手套必要時(shí)對(duì)發(fā)生污染及脫防護(hù)服的地方進(jìn)行消毒處理第25頁(yè)/共35頁(yè)3.3感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜感染性液體（血液、尿液標(biāo)本或培養(yǎng)物）外溢到皮膚立即停止工作，脫掉手套用75%的酒精進(jìn)行皮膚消毒再用大量水沖洗感染性液體濺入眼睛立即停止工作，脫掉手套迅速到緩沖區(qū)用洗眼器沖洗再用生理鹽水沖洗（注意動(dòng)作輕柔，勿損傷眼睛）兩種情況都應(yīng)做適當(dāng)?shù)念A(yù)防治療和醫(yī)學(xué)觀察，并報(bào)告實(shí)驗(yàn)室安全員進(jìn)行事故記錄第26頁(yè)/共35頁(yè)3.4刺傷、切割傷或擦傷應(yīng)急處理保持鎮(zhèn)靜，立即停止實(shí)驗(yàn)，脫掉手套。用清水和肥皂水清洗傷口。盡量擠出傷口處的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒精擦洗傷口，適當(dāng)?shù)陌?。及時(shí)就醫(yī)，告知醫(yī)生受傷原因及可能的微生物污染，必要時(shí)要進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理。向?qū)嶒?yàn)室安全員報(bào)告，進(jìn)行事故記錄。第27頁(yè)/共35頁(yè)3.5潛在危害性氣溶膠的釋放

(在生物安全柜以外)哪些意外情況下可能發(fā)生危害性氣溶膠的釋放？操作中生物安全柜突然停機(jī)或轉(zhuǎn)為正壓大量感染性物質(zhì)溢出、濺灑非封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)帶有感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂第28頁(yè)/共35頁(yè)3.6潛在危害性氣溶膠釋放的處理

（在生物安全柜以外）所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域報(bào)告實(shí)驗(yàn)室安全員在1小時(shí)內(nèi)任何人不得進(jìn)入事發(fā)實(shí)驗(yàn)室，以使氣溶膠排出和重粒子沉降；無(wú)中央通風(fēng)系統(tǒng)則應(yīng)推遲進(jìn)入（如24小時(shí)）貼出標(biāo)識(shí)以示禁止入內(nèi)過(guò)后由專業(yè)人員指導(dǎo)清除污染，如甲醛蒸汽熏蒸，操作時(shí)注意防護(hù)（暴露人員應(yīng)進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，必要時(shí)及時(shí)就醫(yī)）第29頁(yè)/共35頁(yè)3.7生物安全柜內(nèi)少量溢出處理處理溢灑物時(shí)不要將頭伸入安全柜內(nèi)，也不要將臉直接面對(duì)前操作口，而應(yīng)處于前視面板的后方。選擇消毒劑時(shí)需要考慮消毒劑對(duì)生物安全柜的腐蝕性。（使用含氯制劑后再用清水擦拭）如果溢灑的量不足1mL時(shí)，可直接用消毒劑浸濕的紙巾（或其它材料）擦拭。如果溢灑物流入生物安全柜內(nèi)部，則視情況，如需要可對(duì)生物安全柜進(jìn)行熏蒸。第30頁(yè)/共35頁(yè)3.8生物安全柜內(nèi)大量溢出處理使生物安全柜保持開(kāi)啟狀態(tài)。在溢灑物上覆蓋浸有消毒劑的吸收材料，作用一定時(shí)間以發(fā)揮消毒作用。（必要時(shí)，用消毒劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽）消毒后脫下手套。如果防護(hù)服已被污染，脫掉污染的防護(hù)服后，洗手。穿好新的防護(hù)裝