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實(shí)驗(yàn)六、植物組織中總糖和還原性糖含量的測定1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆湛偺呛瓦€原糖含量的測定方法學(xué)習(xí)總糖和還原糖提取的方法2、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)和難點(diǎn)利用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量的實(shí)驗(yàn)原理多糖在酸性加熱條件下會降解為還原糖3.2、3,5-二硝基水楊酸比色法

總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸(黃色）則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應(yīng)乘以0.9。相對密度法折光法旋光法物理法3.3、糖含量測定方法

紙色譜薄層色譜GCHPLCβ—半乳糖脫氫酶測半乳糖、乳糖葡萄糖氧化酶測葡萄糖發(fā)酵法——測不可發(fā)酵糖重量法——測果膠、纖維素、膳食纖維素

色譜法

酶法4、操作步驟4.1、制定標(biāo)準(zhǔn)曲線管號012345標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.0蒸餾水/mL1.00.80.60.40.20DNS試劑/mL2.02.02.02.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來水冷卻至室溫蒸餾水/mL9.09.09.09.09.09.0葡萄糖濃度/mg/mL00.20.40.60.81.0A5404.2、植物組織中總糖與還原糖溶液的獲取(1)還原糖：30mL水沖研缽2-3次1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中50℃水浴0.5h冷卻定到100mL混勻,過濾取濾液作為還原糖提取液(2)總糖：1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中沸水浴0.5h冷卻,用NaOH中和,加水定容到100mL混勻,過濾取濾液作為總糖提取液12mL水沖研缽2-3次10mL6MHClI2-KI檢測5、數(shù)據(jù)處理與問題5.

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