Sec.1物質(zhì)對光的選擇性吸收

Sec.2光的吸收定律

Sec.3吸光光度法的儀器

Sec.4吸光光度法分析條件的選擇

Sec.5吸光光度法的應(yīng)用Ch.10吸光光度法吸光光度法是基于被測物質(zhì)的分子對光具有選擇吸收的特性而建立的分析方法。光的電磁波性質(zhì)射線x射線紫外光紅外光微波無線電波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可見光一、光的基本性質(zhì)Sec.1物質(zhì)對光的選擇性吸收光的波粒二象性波動性粒子性λνE光的折射光的衍射光的偏振光的干涉光電效應(yīng)E：光子的能量（J,焦耳）ν：光子的頻率（Hz,赫茲）λ：光子的波長（nm）c：光速（2.9979X1010cm.s-1）h：plank常數(shù)（6.6256X10-34J.s）二、物質(zhì)對光的選擇性吸收物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光光作用于物質(zhì)時，物質(zhì)吸收了可見光，而顯示出特征的顏色，這一過程與物質(zhì)的性質(zhì)及光的性質(zhì)有關(guān)。

吸收光與電子躍遷物質(zhì)對光的吸收物質(zhì)對光的吸收滿足條件hS2S1S0S3E2E0E1E3hhh定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對光的選擇吸收ABA在一定的實驗條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。AC增大Sec.2光的吸收定律透過率Transmittance透射率定義：T取值為0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光ItI0dbbItII-dIdI∝IadnN：薄層中的吸光粒子數(shù)dn=N0csdbN0：阿伏加德羅常數(shù)dA：捕獲面積，薄層中被光照射的面積。c：吸光溶液的濃度積分得或得-dI/I=kCdb吸光系數(shù)吸收率b：吸光液層的厚度，光程，厘米c：吸光物質(zhì)的濃度，g/L,mol/LK：比例常數(shù)入射光波長物質(zhì)的性質(zhì)溫度取值與濃度的單位相關(guān)c：摩爾/Lε摩爾吸光系數(shù)，L·mol–1·cm-1c：g/La吸光系數(shù)，L·g–1·cm-1c：g/100mL比吸光系數(shù)相互關(guān)系桑德爾靈敏度定義：當(dāng)光度儀器的檢測極限為A＝0.001時，單位截面積光程內(nèi)所能建處的吸光物質(zhì)的最低質(zhì)量。ug/cm2例1.利用鄰二氮菲光度法測定Fe.已知溶液中亞鐵為500ug/L，液層厚度2cm，在508nm處測得透射比為0.645，計算吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)和桑德爾靈敏度。

偏離朗伯－比爾定律的原因物理因素：1.非單色光引起的偏離2.非平行入射光引起的偏離3.介質(zhì)不均勻引起的偏離化學(xué)因素引起的偏離1.溶液年度過高引起的偏離2.化學(xué)反應(yīng)引起的偏離對吸收光譜而言，b和c固定，反映了ε隨波長變化的情況，單一波長，ε固定；不同波長，ε不同。因此，非單色光將導(dǎo)致對吸光定律的偏離。A或12在實際工作中，入射光通常具有一定的帶通。為了避免非單色光帶來的影響，一般選用峰值波長進(jìn)行測定。??1對應(yīng)的??1較小??2對應(yīng)的??2較大選用峰值波長，也可以得到較高的靈敏度。1、Plank條件2、物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對光的選擇吸收基礎(chǔ)。3、在一定的實驗條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。吸光定律c：mol/L摩爾吸光系數(shù)，L·mol–1·cm-1K

c：g/LK

a吸光系數(shù)，L·g–1·cm-10.575復(fù)習(xí)要點(diǎn)Sec.3吸光光度法的儀器紫外-可見分光光度計組件光源單色器樣品池檢測器信號輸出氫燈，氘燈，185~350nm；鹵鎢燈，250~2000nm.基本要求：光源強(qiáng)，能量分布均勻，穩(wěn)定作用：將復(fù)合光色散成單色光棱鏡光柵玻璃，350~2500nm,石英，185~4500nm平面透射光柵，反射光柵玻璃，光學(xué)玻璃，石英作用：將光信號轉(zhuǎn)換為電信號，并放大光電管，光電倍增管，光電二極管，光導(dǎo)攝像管（多道分析器）表頭、記錄儀、屏幕、數(shù)字顯示單波長單光束分光光度計0.575光源單色器吸收池檢測器顯示單波長雙光束分光光度計比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器儀器實物Sec.4吸光光度法分析條件的選擇一、顯色反應(yīng)及其條件的選擇（一）顯色反應(yīng)及顯色劑的基本要求：1.選擇性好2.靈敏度高3.對比度要大，波長相差60nm以上4.穩(wěn)定，組成恒定5.顯色反應(yīng)條件易于控制1.顯色劑的用量M+nR=MRn定量反應(yīng)實際工作中，作A~CR曲線，尋找適宜CR范圍。ACR（二）、顯色反應(yīng)條件的選擇3.溫度的選擇實際工作中，作A~T曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度。ATATATATAT4.反應(yīng)時間的選擇實際工作中，作A~t曲線，尋找適宜反應(yīng)時間。吸光定律根據(jù)誤差傳遞公式，有又得濃度測量的相對偏差令得T=0.368=36.8%A=0.434時，儀器測量誤差最小為了減少測量誤差，控制溶液的吸光度

A=0.15~1（0.2～0.8）T=70~10%二.儀器測量條件的選擇測量條件的選擇1.測量波長的選擇無干擾，選擇max有干擾AA2.待測溶液吸光度的選擇控制A=0.15~1T=70%~10%方法選擇C選擇b1、非單色光影響小2、靈敏度高3.參比液的選擇原則：扣除非待測組分的吸收以顯色反應(yīng)為例進(jìn)行討論M+R=M-Rmax試液 顯色劑溶劑吸光物質(zhì)參比液組成無吸收無吸收光學(xué)透明溶劑基質(zhì)吸收無吸收吸收不加顯色劑的試液無吸收吸收吸收顯色劑基質(zhì)吸收吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測組分的掩蔽劑若欲測M-R的吸收maxA（樣）=A（待測吸光物質(zhì)）+

A（干擾）+A（池）A（參比）=

A（干擾）+A（池）Sec.5吸光光度法的應(yīng)用微量組分的測定1.單組分的測定2.多組分的測定介紹一種解聯(lián)立方程法AXY12原則：根據(jù)吸光度加合性解聯(lián)立方程，可求得Cx,Cy為物質(zhì)的特征參數(shù)，可通過配制標(biāo)準(zhǔn)溶液測得。請設(shè)計一個測定兩組分的濃度的實驗方案ACs(x)純物質(zhì)或共存物質(zhì)不干擾單組分的測定微量鐵的測定氨基酸的測定鄰二氮菲法茚三酮法蛋白質(zhì)的測定考馬斯亮藍(lán)法總磷的測定磷鉬藍(lán)法海水中營養(yǎng)鹽的測定返回3.示差光度法方法常規(guī)法以空白溶劑為參比示差法以濃度為Cs

的標(biāo)準(zhǔn)溶液為參比A△C△CxA′（Cx>Cs）適宜高

濃度的測定思考：（Cx

Cs）時情況怎樣？示差法的誤差方法定量原理相對誤差常規(guī)法示差法∴Tr>Tx∵I0>Is有結(jié)論：示差法提高了準(zhǔn)確度例題例題已知dT=0.01,樣品Tx=2.00%,標(biāo)準(zhǔn)Ts=10.0%示差法常規(guī)法誤差示差法誤差已知dT=0.01,樣品Tx=2.00%,標(biāo)準(zhǔn)Ts=5.00%示差法提高準(zhǔn)確度的實質(zhì)常規(guī)法TxT051050100落在測量誤差較大的范圍示差法T051050100TrTsTs落在測量誤差較小的范圍結(jié)論：示差法通過提高測量的準(zhǔn)確度提高了方法的準(zhǔn)確度4.絡(luò)合物的組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定A.摩爾比法測絡(luò)合比（飽和法）M+nR=MRnCM,固定；CR,從0開始增大CMRnCR在特定波長測定ACR/CMnB等摩爾連續(xù)變化法M+nR=MRn保持CM+CR=常數(shù)CM/C從0→1連續(xù)改變在特定波長測定A作圖00.51.0ACM/C0.33n=1,CM/C=0.5n=2,CM/C=0.33條件穩(wěn)定常數(shù)的測定00.51.0ACM/CA′A′<A由于絡(luò)合物離解引起離解度MR=R+M總濃度C平衡濃度C(1-a)CaCa將代入上式便可求出絡(luò)合物的條件穩(wěn)定常數(shù)弱酸弱堿離解常數(shù)的測定HR

=H++

R-HR用光度法可以測定其離解常數(shù)RAHRRHRR用吸光值表征，相對于pH作圖，可求得pKa或雙波長分光光度法21AXY∵∴Y

的存在不干擾X的測定光源單色器單色器檢測器切光器狹縫吸收池1、Plank條件2、物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對光的選擇吸收基礎(chǔ)。3、在一定的實驗條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。吸光定律