癌癥分子解析preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用案例分享總結(jié)主要內(nèi)容第一頁，共58頁。惡性腫瘤現(xiàn)狀惡性腫瘤已成為人類的“頭號殺手”。全球每年新發(fā)腫瘤>1400萬人，死亡約820萬人。預(yù)計2025年，因人口增加和老齡化等因素，每年新增超2000萬病例?！?012年中國腫瘤登記年報”數(shù)據(jù)表明，中國每年新發(fā)腫瘤約310萬人，死亡270萬人（右上圖）。近60年來癌癥致死率沒有明顯下降（右下圖）。第二頁，共58頁。世衛(wèi)組織（WHO）：早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療“三早”是關(guān)鍵，“早發(fā)現(xiàn)”是根本!

目前還無法攻克癌癥（尤其是中晚期）；

癌癥可防、可治：

癌前階段：可實(shí)現(xiàn)近100%預(yù)防

早期癌癥：可以實(shí)現(xiàn)80%治愈率晚期癌癥：僅30%人活過5年。按照平均壽命74歲計算，人一生中患癌幾率是22%。從年齡看，45歲以后發(fā)病率上升明顯，應(yīng)在40歲開始重視針對腫瘤的專項(xiàng)檢查。2014世界癌癥報告“抗擊癌癥，重在預(yù)防”第三頁，共58頁。癌癥的分子解析第四頁，共58頁。ICGC：癌癥基因組學(xué)研究國際癌癥基因組聯(lián)盟(InternationalCancerGenomeConsortium，ICGC)2014年2月4日公布超過1萬個癌癥基因組的數(shù)據(jù)。

2013年12月5日ICGC宣布：在原來白血病、膀胱癌、胃癌的基礎(chǔ)上，中國又發(fā)起針對腸癌、食道癌、肝癌的驅(qū)動基因檢測項(xiàng)目。

“眼下癌癥診治急需新的途徑。如果能更好地從基因組來了解癌癥，那么將更有利于癌癥的預(yù)防和控制。"

——TomHudson安大略癌癥研究所（OICR）所長、ICGC創(chuàng)始人之一第五頁，共58頁。致癌突變（oncogenicmutations）到腫瘤形成需要10-20年；期間，涉及多基因的異常發(fā)生，具有早期性和特異性：（早期性：分子異常是癌癥發(fā)生的早期事件；特異性：分子異常是癌癥發(fā)生的特有標(biāo)記）癌變的分子事件AlfredG.Knudson,NatureRev.Cancer,

1,157-162(2001)CarloM.Croce,N.Engl.J.Med.

358,502-511(2008)第六頁，共58頁。第七頁，共58頁。原癌基因（Proto-oncogene）原癌基因是是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的高度保守的基因。原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時（此時轉(zhuǎn)化為癌基因），使細(xì)胞過度增殖。第八頁，共58頁。抑癌基因（TumorSuppressor）抑癌基因一般調(diào)控DNA的修復(fù)和細(xì)胞凋亡。在被激活情況下它們具有抑制細(xì)胞增殖作用。抑癌基因突變能導(dǎo)致活性降低或消失，從而減弱甚至消除抑癌作用。第九頁，共58頁。Sanger研究所：Cosmic數(shù)據(jù)庫EmerginglandscapeofoncogenicsignaturesacrosshumancancersNatureGenetics45,1127–1133(2013)腸癌中基因異常發(fā)生率GaoH.etal,CancerRes.,54,4342-4346(1994)MorganC.etal,Br.J.Cancer,89,,1314-1319(2003)第十頁，共58頁。

preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用第十一頁，共58頁。傳統(tǒng)檢測突變檢測癌癥的“冰山學(xué)說”早期癌癥幾乎沒有癥狀，極其容易被傳統(tǒng)檢測所忽視，一旦檢出，則大部分為中晚期。preMiD超早期防癌檢測，提前約3年預(yù)防發(fā)現(xiàn)潛伏體內(nèi)的癌癥或癌前病變。preMiD?超早期防癌檢測，提前臨床癥狀3-5年預(yù)警！第十二頁，共58頁。突變preMiD?技術(shù)檢測的是來自于腫瘤相關(guān)的原癌基因和抑癌基因的異常突變。第十三頁，共58頁?；蛲蛔冾愋腿缦拢旱谑捻?，共58頁。血液循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）來源NatRevCancer.2011Jun;11(6):426-37ctDNA由癌變細(xì)胞死亡、凋亡或主動分泌進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)cfDNA的長度一般為100-500堿基，攜帶有癌癥細(xì)胞內(nèi)部所含異常信息，如突變、copy數(shù)變化、甲基化、融合基因及染色體異常等。血液中含有驅(qū)動突變或致癌突變分子，意味身體內(nèi)有癌變細(xì)胞。

“ctDNA是最有希望發(fā)現(xiàn)早期癌癥”

——美國約翰霍普金斯大學(xué)LuisDiaz博士Free-floatingDNAfromtumorcouldprovideearlywarning！——USAtoday第十五頁，共58頁。分子癌變階段（8-10年）細(xì)胞癌變階段（3-5年）細(xì)胞簇形成組織形成早癌（1-3年）中晚期癌（？）1.不死2.無限增殖3.表型正常1.逃避免疫監(jiān)視2.形成新血管3.異性增生常規(guī)手段可以檢測preMiD可以第十六頁，共58頁。血漿突變檢測技術(shù)-preMiD挑戰(zhàn)血漿游離DNA含量極低突變DNA占比低于0.1%血漿成分復(fù)雜某些屏障存在………………應(yīng)對preMiD檢測基于PCR，擴(kuò)增DNA融合Blocker、偏向擴(kuò)增及熔點(diǎn)分析，極大提高靈敏度納米技術(shù)提高核酸萃取效率新技術(shù)平臺的融入第十七頁，共58頁。preMiD?

=Blocker+ASA+MCA突變偏向擴(kuò)增系統(tǒng)（ASA）PCR引物的3'端位必須和突變擴(kuò)增子匹配，而野生不匹配采用特異探針，實(shí)時PCR反應(yīng)熔解曲線分析（MeltingCurveAnalysis）熒光vs溫度作圖得到DNA熔解曲線DNA溶解曲線是DNA序列的“指紋”核酸blocker阻滯野生擴(kuò)增設(shè)計野生匹配blocker（含PNA修飾）阻滯對野生片段擴(kuò)增三種已有技術(shù)的有機(jī)結(jié)合成preMiD，靈敏度達(dá)到0.01%，特異性近100%。第十八頁，共58頁。美國斯坦福癌癥研究院近30年調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)：癌前階段，癌癥是可逆性“工程”。消除突變，抑制癌變第十九頁，共58頁。正常DNADNA突變（腫瘤驅(qū)動基因）DNA修復(fù)抑癌基因誘導(dǎo)凋亡免疫監(jiān)視失敗癌

干預(yù)（突變逆轉(zhuǎn)）第二十頁，共58頁。早發(fā)現(xiàn)與早預(yù)防突變篩查免疫力遠(yuǎn)離致癌物干預(yù)第二十一頁，共58頁。突變定量分析1.對于有基因突變的受檢者，同時加做突變定量值，便于后期干預(yù)有效性的對比；2.隨著樣本量的增加，跟蹤后續(xù)發(fā)展變化，將給出突變風(fēng)險提示。突變值第二十二頁，共58頁。QRAM-qPCR相對定量檢測腫瘤特異突變位點(diǎn)在血漿中含量在干預(yù)前后的變化，判斷效果。干預(yù)有效性判斷

主要用途：

1.直觀反應(yīng)干預(yù)或治療方案的有效性，避免無效治療。 2.評估手術(shù)后患者基本狀態(tài)，如體內(nèi)有無殘留或轉(zhuǎn)移。 3.判斷有無復(fù)發(fā)。第二十三頁，共58頁。第二十四頁，共58頁。第二十五頁，共58頁。第二十六頁，共58頁。第二十七頁，共58頁。第二十八頁，共58頁。preMiD專業(yè)性

preMiD?德國標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)質(zhì)控體系國際公認(rèn)檢測內(nèi)容COSMIC數(shù)據(jù)庫，包含突變基因及位點(diǎn)信息，屬于國際最權(quán)威機(jī)構(gòu)最新研究成果。國家批準(zhǔn)專有檢測試劑美國Roche檢測儀器注冊號:(進(jìn))字2009第3402689號第二十九頁，共58頁。preMiD?血漿突變技術(shù)驗(yàn)證：

NSCLC組織和血漿中EGFR突變一致性研究試驗(yàn)單位：北京協(xié)和醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院、江蘇省腫瘤醫(yī)院、青島大學(xué)附屬醫(yī)院

Sanger測序1212例非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織EGFR突變；

preMiD?法檢測對應(yīng)1212例血漿EGFR突變。總體結(jié)果：陽性符合率為80.49%，陰性符合率為94.66%，總符合率為90.35%

（唯一完成臨床試驗(yàn)研究，血漿-組織突變一致性最高的結(jié)果）（已完成CFDA批準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn)，2011年12月28號-2013年12月28號）第三十頁，共58頁。中國唯一入選國際腫瘤學(xué)術(shù)大會ASCO會議的主講報告第三十一頁，共58頁。中國醫(yī)師協(xié)會preMiD項(xiàng)目專家論證會第三十二頁，共58頁。ctDNA在國際上的應(yīng)用NDRG4,BMP3NDRG4,BMP3,KRAS總靈敏度：92%sensitivity早期腸癌靈敏度：94%特異性：87%ColonGuard（EXACT）第三十三頁，共58頁。ColonVantage(QUEST)ColoVantage檢測血漿中SEPTIN9的甲基化狀態(tài)，達(dá)到檢測和預(yù)警結(jié)直腸癌的目的。ColoVantage是一種無創(chuàng)的檢測方法靈敏度達(dá)到70%特異性達(dá)到89%適用于各個分期的結(jié)直腸癌第三十四頁，共58頁。ctDNA在甲狀腺癌檢測中的應(yīng)用基因檢測對甲狀腺腫瘤診斷的準(zhǔn)確率在80%以上突變檢測能夠應(yīng)對病理檢測不能確定的情況NikiforovYEetal,JClinEndocrinolMetab.2011Nov;96(11):3390-7第三十五頁，共58頁。案例分享第三十六頁，共58頁。preMiD檢測：FLT3突變案例一：FLT3基因突變，2年半后診斷大腸癌中晚期個人不相信，不愿面對，沒有采取必要干預(yù)措施第三十七頁，共58頁。案例二：KRAS突變檢測者：男性，35歲，重慶人家族史：其父患肺癌進(jìn)行preMiD檢測：KRAS基因突變第三十八頁，共58頁。KRAS突變報告解讀：結(jié)合健康問卷及專家咨詢其父患肺癌作息紊亂干咳、胸悶近期沒有體檢資料結(jié)合該情況給出建議：進(jìn)行胸部增強(qiáng)CT檢查，判斷突變在哪個階段（臨床前期或臨床階段）第三十九頁，共58頁。KRAS突變2014年5月8日右肺下葉斜裂旁小結(jié)節(jié)影肝左葉多發(fā)小囊腫第四十頁，共58頁。KRAS突變—干預(yù)方案匹多莫德口服液服用方法：1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用）3個月為一周期第四十一頁，共58頁。KRAS突變--跟蹤隨訪2014年9月9日胸部CT增強(qiáng)未發(fā)現(xiàn)腫瘤第四十二頁，共58頁。干預(yù)后4個月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析：復(fù)查結(jié)果，基因仍有突變，并對再次突變情況進(jìn)行與第一次的定量值分析，突變較之前下降。KRAS突變--復(fù)查及定量第四十三頁，共58頁。案例三：THR-α基因突變檢測者：男性，41歲，南京人進(jìn)行preMiD檢測：THR-α基因突變第四十四頁，共58頁。THR-α基因突變報告解讀：結(jié)合健康專家咨詢作息紊亂20年吸煙史，每日1包近期沒有體檢資料第四十五頁，共58頁。THR-α基因突變右頸部、頜下多發(fā)小淋巴結(jié)，部分淋巴結(jié)FDG代謝增高；甲狀腺瘤可能第四十六頁，共58頁。THR-α基因突變--干預(yù)方案胸腺肽a1方法：1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射3個月為一周期第四十七頁，共58頁。干預(yù)后3個月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析：復(fù)查結(jié)果：突變消失。THR-α基因突變--干預(yù)方案第四十八頁，共58頁。病理：肺腺癌案例四：EGFR突變確診6mm早癌檢測者男性，62歲，無錫人士，某醫(yī)院院長，體檢發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)有6mm孤立影，不能確定其性質(zhì)，經(jīng)preMiD?檢測發(fā)現(xiàn)EGFR突變。該檢測者在上海肺科醫(yī)院行胸腔鏡手術(shù)，取出病理為肺腺癌。第四十九頁，共58頁。案例五：FHIT突變確診胃癌晚期檢測者男性，62歲，機(jī)關(guān)干部，既往慢性胃病史，平時喜食蒜泥等刺激食物。經(jīng)preMiD?檢測：FHIT突變，后追加蛋白標(biāo)志物FMD1值異常升高。建議進(jìn)一步胃鏡檢查，結(jié)果為低分化腺癌晚期，對化療均不敏感。病理：低分化腺癌第五十頁，共58頁。案例六：宮頸癌復(fù)發(fā)監(jiān)控案例檢測者女性，29歲，2012年12月確診宮頸癌，術(shù)后、放、化療后。2013年5月經(jīng)perMiD檢測發(fā)現(xiàn)FHIT-exon8位點(diǎn)和HLA-A-c.835C>T位點(diǎn)有突變，確診為術(shù)后復(fù)發(fā)。第五十一頁，共58頁。案例七：鑒別：前列腺癌or前列腺增生（BPH）？PSA>700,前列腺癌？！PSA=25，BPH？第五十二頁，共58頁?？偨Y(jié)第五十三頁，共58頁。preMiD檢測原理突變preMiD