細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（優(yōu)選）細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二教學(xué)大綱掌握內(nèi)容標(biāo)本的采集和送檢原則病原菌的檢驗(yàn)程序細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷及常用方法了解內(nèi)容病原體的抗原成分、核酸及其他成分的檢測(cè)方法現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二病原學(xué)檢查的目的進(jìn)行病因?qū)W診斷指導(dǎo)合理用藥觀察治療進(jìn)行傳染病的流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二標(biāo)本的采集和送檢六原則※無(wú)菌操作：避免雜菌污染不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位運(yùn)送注意保存采集雙份血清現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二第一節(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二可疑細(xì)菌感染采集標(biāo)本血清學(xué)實(shí)驗(yàn)雙份血清直接形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌成分檢測(cè)特異性抗體檢測(cè)細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定形態(tài)學(xué)檢查生化學(xué)檢查血清學(xué)鑒定藥物敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（毒力）實(shí)驗(yàn)抗原檢測(cè)核酸檢測(cè)直接凝集實(shí)驗(yàn)協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)乳膠凝集實(shí)驗(yàn)免疫熒光檢測(cè)ELISA等核酸雜交聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）DNA芯片凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)ELISA等現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二細(xì)菌學(xué)診斷

檢測(cè)病原菌成分檢測(cè)患者血清中特異性抗體細(xì)菌病原學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查分離培養(yǎng),純培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)毒力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)抗原核酸現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二一、細(xì)菌學(xué)診斷現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（一）形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查法：細(xì)菌染色檢查法革蘭染色法抗酸染色法負(fù)染法暗視野檢查：用于檢查活菌、螺旋體及其動(dòng)力熒光顯微鏡現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二腦脊液的直接涂片染色-肺炎鏈球菌現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二鏈球菌現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二淋病奈瑟球菌-膿液直接涂片現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二結(jié)核分枝桿菌現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二霍亂弧菌現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二暗視野顯微鏡鉤端螺旋體現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二肺炎雙球菌現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二病原菌的分離培養(yǎng)/直接涂片大小形態(tài)顏色表面性狀透明度溶血性Flamesterilizewireloop,metalforceps,etcbeforeandafteruseinahoodedBunsenburner現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二細(xì)菌動(dòng)力的檢測(cè)現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二化膿性球菌葡萄球菌鏈球菌現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二腸道桿菌大腸埃希菌沙門(mén)氏菌志賀菌細(xì)菌形態(tài)無(wú)特異性可采用生化學(xué)檢查法-鑒別細(xì)菌的重要方法現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（二）生化試驗(yàn)

糖發(fā)酵試驗(yàn)H2S試驗(yàn)枸櫞鹽利用試驗(yàn)現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二鑒定中最重要的生化反應(yīng)※乳糖發(fā)酵試驗(yàn)?zāi)c道非致病菌（埃希菌屬）發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣＋腸道致病菌（志賀菌屬、沙門(mén)菌屬等）不發(fā)酵乳糖—現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（三）血清學(xué)鑒定利用含已知的特異性抗體的免疫血清，檢測(cè)未知的細(xì)菌抗原，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種的鑒定志賀菌屬、沙門(mén)菌屬常用方法是玻片凝集試驗(yàn)現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二測(cè)定抗生素或其他抗微生物制劑在體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力方法：擴(kuò)散法、稀釋法（四）藥物敏感試驗(yàn)現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二MIC&MBC最低抑菌濃度，MIC最低殺菌濃度，MBC現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二全自動(dòng)分析儀全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀全自動(dòng)生化分析儀現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（五）檢測(cè)毒力-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.常用動(dòng)物

Mouse

GuineaPig

RabbitDogMonkey現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二接種途徑皮內(nèi)皮下腹膜內(nèi)靜脈顱內(nèi)椎管內(nèi)鼻內(nèi)灌胃現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二毒力檢測(cè)半數(shù)致死量

LD50半數(shù)感染量

ID50現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二二、檢測(cè)病原菌成分抗原的檢測(cè)核酸的檢測(cè)現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（一）抗原的檢測(cè)利用已知的特異性Ab檢測(cè)Ag的方法常用的方法有玻片凝集協(xié)同凝集試驗(yàn)ELISA免疫熒光法現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二ELISA現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（二）核酸檢測(cè)方法聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）核酸雜交技術(shù)SouthernblotNorthernblotDotblotInsituhybridization基因芯片(Genechip)16SrRNA現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二16sRNA基因序列分析只存在于原核細(xì)胞型微生物的染色體基因中16sRNA，23sRNA,5sRNA可變區(qū)和保守區(qū)保守區(qū)：所有的細(xì)菌所共有可變區(qū)：屬和種的特異性現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二PCRGeneChip現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二三、抗體的檢測(cè)用已知細(xì)菌或其Ag檢測(cè)相應(yīng)的特異性Ab及其量的多少，作為某些病原菌感染的輔助診斷急性期和恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期效價(jià)升高≥4倍有診斷價(jià)值方法玻片或試管凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、冷凝集試驗(yàn)、ELISA局限難以早期診斷現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二第二節(jié)病毒感染的微生物學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)病毒的分離鑒定在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)病毒成分的檢測(cè)病毒抗體的檢測(cè)現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（一）病毒的形態(tài)學(xué)檢查

電子顯微鏡（EM）

免疫電鏡,IEM光學(xué)顯微鏡（CM）包涵體內(nèi)基小體（Negribody）HAVNegribody現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二動(dòng)物接種：動(dòng)物模型雞胚接種：9～14d組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法（二）病毒的分離培養(yǎng)的方法現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二血凝抑制實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)PCR檢測(cè)病毒分離培養(yǎng)及鑒現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二細(xì)胞病變（cytopathy)

※紅細(xì)胞吸附(hemadsorption)病毒干擾作用(viralinterference)中和試驗(yàn)(neutralizationtest,NT)空斑形成試驗(yàn)(plaqueformation)病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)※現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二細(xì)胞病變—細(xì)胞病變效應(yīng)※

（CPE）

細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）A：未感染病毒的HeLa細(xì)胞；B：被柯薩奇病毒B3感染后，細(xì)胞變圓、皺縮，細(xì)胞折光性減弱；C：被腺病毒感染后，細(xì)胞腫脹，折光性增強(qiáng)，呈葡萄狀排列。200

50%組織細(xì)胞感染量TCID50:根據(jù)有無(wú)細(xì)胞病變來(lái)判斷病毒感染性和毒力的指標(biāo)現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二細(xì)胞病變紅細(xì)胞吸附：血凝素（HA）病毒干擾作用中和試驗(yàn)病毒數(shù)量及感染性的檢測(cè)空斑形成試驗(yàn)紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞吸附病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)plaque現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二空斑形成試驗(yàn)用于病毒濃度的精確定量和測(cè)定抗病毒藥物的作用一個(gè)空斑是由一個(gè)病毒大量復(fù)制而成，稱為空斑形成單位（Plaqueformingunit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（三）病毒成分的檢測(cè)病毒抗原的檢測(cè):ELISA病毒核酸的檢測(cè)核酸雜交、PCR、基因芯片現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二病毒成分的檢測(cè)現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二（四）病毒抗體的檢測(cè)中和試驗(yàn)（NT）血凝抑制試驗(yàn)（HT）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF）ELISA法蛋白印跡技術(shù)現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有53頁(yè)\編輯于星期二小結(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法病原體檢查核酸的檢測(cè)抗原、抗體的檢測(cè)病毒