公司公司LOGO哈哈檢查方法驗(yàn)證編號(hào)：VR-FD1234（3）-01A產(chǎn)品名稱：XXXX注射液規(guī)格：XXXml：XXXmgXXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證報(bào)告驗(yàn)證項(xiàng)目：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證驗(yàn)證對(duì)象：細(xì)菌內(nèi)毒素使用部門：藥物研發(fā)中心委托單位：XXXXX（蘇州）有限公司XXXXXXX有限公司二〇二〇年二月變更歷史版本號(hào)批準(zhǔn)日期版本修訂描述A新訂驗(yàn)證報(bào)告批準(zhǔn)報(bào)告起草起草人簽名日期XXXXX技術(shù)有限公司XXXX報(bào)告審核審核人簽名日期XXXX技術(shù)有限公司XXXXXXXX（蘇州）有限公司XXXX報(bào)告批準(zhǔn)批準(zhǔn)人簽名日期XXXX（蘇州）有限公司XXXXXXXX技術(shù)有限公司XXXX驗(yàn)證報(bào)告批準(zhǔn)證書驗(yàn)證對(duì)象XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法使用部門藥物研發(fā)中心結(jié)論：分別用兩個(gè)廠家（湛江安度斯生物有限公司，福州新北生化工業(yè)有限公司）相同規(guī)格、相同靈敏度（0.25EU/mL）的鱟試劑對(duì)XXXX注射液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證，確定供試品的最小不干擾稀釋倍數(shù)為25倍；根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定最大有效稀釋倍數(shù)為200倍（MVD=CL=1mL/mL×50EU/mL=200倍），為控制產(chǎn)品質(zhì)量，XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素λ 0.25EU/mL檢測(cè)供試品稀釋倍數(shù)范圍為25倍～200倍。批準(zhǔn)意見：□該確認(rèn)報(bào)告經(jīng)審核無誤，予以批準(zhǔn)?！跗渌号鷾?zhǔn)人：質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名：日期：目 錄目的 1范圍 1法符1驗(yàn)職責(zé) 1方培確認(rèn) 2文資確認(rèn) 2儀、具試確認(rèn) 2樣確認(rèn) 2試前2證目2菌毒限的3大效釋數(shù)確定 3試靈度核3擾試方方及結(jié)果 5擾8表附件 1111.11111.211驗(yàn)證 12公司公司logo哈哈檢查方法驗(yàn)證編號(hào)：VR-FD1234（3）-01A產(chǎn)品名稱：XXXX注射液規(guī)格：0.3ml：0.15mgPAGEPAGE10/161目的XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法準(zhǔn)確可靠，同時(shí)為該產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素2范圍適用于XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證。法規(guī)符合性本方案的起草是以符合以下法規(guī)、政策的要求而編制：《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010修訂版）《中國(guó)藥典》（2015年版四部）驗(yàn)證職責(zé)序號(hào)部門姓名職務(wù)工作職責(zé)1XXX總經(jīng)辦xxxxXXX2公司xxx3XXXX藥物研發(fā)中心xxxx4公司xxx5XXXX藥物研發(fā)中心xx6XXXXX藥物研發(fā)中心xxxxxxxxx方案培訓(xùn)本驗(yàn)證方案批準(zhǔn)后（且在驗(yàn)證實(shí)施前），根據(jù)《SMP-QA104人員培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)管理程到很好地執(zhí)行。培訓(xùn)人員記錄見附件1：培訓(xùn)記錄表。文件資料確認(rèn)相關(guān)文件資料齊全，信息準(zhǔn)確且皆為現(xiàn)行有效版本。文件資料的確認(rèn)見：附表1 文件資料確認(rèn)表儀器、用具與試劑確認(rèn)驗(yàn)證過程中所用儀器的確認(rèn)見附表2 儀器確認(rèn)表驗(yàn)證過程中所用用具的確認(rèn)見附表3 用具確認(rèn)表驗(yàn)證過程中所用試劑的確認(rèn)見附表4 試劑確認(rèn)表樣品確認(rèn)從XXXX注射液中隨機(jī)取樣，作為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)驗(yàn)證的樣品，取樣時(shí)必須雙人復(fù)核進(jìn)行樣品確認(rèn)，并填寫確認(rèn)表。樣品的確認(rèn)見：附表5 細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證樣品確認(rèn)表試驗(yàn)前準(zhǔn)備玻璃器皿的洗滌將玻璃器皿放入鉻酸洗液或其他熱原滅活劑或清洗液中充分浸泡，然后取出將洗液空干，用自來水將殘留洗液徹底洗凈，再用蒸餾水反復(fù)沖洗三遍以上，空干后放入適宜的密閉金屬容器中或用錫箔紙包好后再放入金屬容器內(nèi)，放置入烤箱。除去玻璃器皿表面可能存在的外源性內(nèi)毒素玻璃器皿置烤箱后，將烤箱調(diào)至250℃，待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始計(jì)時(shí)，干烤至少30min。驗(yàn)證的實(shí)施驗(yàn)證項(xiàng)目確認(rèn)根《中國(guó)藥典2015年版四部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求確認(rèn)驗(yàn)證項(xiàng)目驗(yàn)證項(xiàng)目的確認(rèn)見：附表6 驗(yàn)證項(xiàng)目確認(rèn)表細(xì)菌內(nèi)毒素限值XXXXXXXXXX0EU/mL。最大有效稀釋倍數(shù)的確定根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定最大有效稀釋倍數(shù)：公式為MVD﹦CL/λ。式中：MVD為最大有效稀釋倍數(shù)；λ為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，本驗(yàn)證方案擬采用標(biāo)示靈敏度為0.25EU/mL的鱟試劑；L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，以EU∕mL表示，為50EU/mL；最大有效稀釋倍數(shù)MVD=CL=1mL/mL×50EU/mL=200倍。λ鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)

0.25EU/mL按《中國(guó)藥典》20151143驗(yàn)”，對(duì)在本次驗(yàn)證中使用到的鱟試劑進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值（λ），將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用152λλ0.5λ0.25λ30秒鐘。待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為0.1ml/支的鱟試劑18支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，掰開?？?，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。加樣反應(yīng)0.1mL/185列，其中44240.1ml2λλ0.5λ0.25λ20.1ml檢查用水，作為陰性對(duì)照。37℃±160分鐘±2分鐘后，觀察并記錄結(jié)果。180°保溫和拿取試管過程應(yīng)避免受到振動(dòng)，造成假陰性結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)2λ0.25λλc0.5λ～2λ之間時(shí)，結(jié)果均符合規(guī)定。按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測(cè)定值（λc）。λc=antilg（∑X/n）式中 X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是指系列遞減的細(xì)菌內(nèi)素濃度中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度；n為每個(gè)濃度的平行管數(shù)，由于每個(gè)濃度的平行管數(shù)為4管，因此n=4。λc0.5λλ為該批鱟試劑的靈敏度。試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果鱟試劑靈敏度復(fù)核原始試驗(yàn)記錄見：附件2：鱟試劑靈敏度復(fù)核記錄。鱟試劑1（廠：湛安度生有公司 批號(hào)1907032 ，度：0.25EU/mL）平行管細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度（EU/ml）NC反應(yīng)終點(diǎn)濃度（EU/ml）X0.50.250.1250.0625（lg反應(yīng)終點(diǎn)濃度）1++0.25-0.6022++--0.25-0.6023++--0.25-0.6024+0.5-0.301計(jì)算公式λc=lg-1（∑X/4）=0.30EU/mL備注“+”代表陽性；“-”代表陰性鱟試劑2（廠：州北生工有公司號(hào)：19110212 ，靈敏度：0.25EU/mL ）平行管細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度（EU/ml）NC反應(yīng)終點(diǎn)濃度（EU/ml）X0.50.250.1250.0625（lg反應(yīng)終點(diǎn)濃度）1+++0.125-0.9032++--0.25-0.6023+++-0.125-0.9034+++-0.125-0.903計(jì)算公式λc=lg-1（∑X/4）=0.15EU/mL備注“+”代表陽性；“-”代表陰性干擾預(yù)試驗(yàn)按《中國(guó)藥典》20151143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法“干擾試驗(yàn)”進(jìn)行干擾本次驗(yàn)證使用兩個(gè)不同廠家相同規(guī)格的鱟試劑進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)。內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液1支（80EU/支），1mL15min80EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；80EU/mL30s10EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；10EU/mL30s1.0EU/mL（4λ）的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；1.0EU/mL30s0.5EU/mL（2λ）的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；供試品溶液A溶液：取本品0.2mL，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2.3mL溶解，制成稀釋倍數(shù)為12.5倍的溶液；B2mL12.52mL25倍的溶液；C2mL252mL50倍的溶液；D2mL502mL100倍的溶液；E100200倍的溶液；供試品陽性對(duì)照溶液B-PPC0.5mL0.5mL稀釋倍12.51mL2λ25的溶液。C-PPC0.5mL0.5mL稀釋倍251mL2λ50D-PPC0.5mL0.5mL稀釋倍501mL2λ100液。E-PPC0.5mL0.5mL稀釋倍1001mL2λ200液。加樣反應(yīng)：每個(gè)鱟試劑生產(chǎn)廠家驗(yàn)證需要的鱟試劑量為：供試品溶液8支，供試品陽性對(duì)照溶液8支，陽性對(duì)照2支，陰性對(duì)照2支，總計(jì)20支。0.1mL20.1mL；0.5EU/mL（2λ）0.1mL；陰性對(duì)照溶液管：每支加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水0.1mL。將上述樣品置37℃±1℃試管恒溫儀中，保溫60分鐘±2分鐘后，觀察并記錄結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：即可選擇該稀釋倍數(shù)進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。（不得（）排除干擾。干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果鱟試劑廠家湛江安度斯生物有限公司供試品稀釋倍數(shù)（倍）供試品PPC編號(hào)反應(yīng)結(jié)果編號(hào)反應(yīng)結(jié)果鱟試劑廠家湛江安度斯生物有限公司供試品稀釋倍數(shù)（倍）供試品PPC編號(hào)反應(yīng)結(jié)果編號(hào)反應(yīng)結(jié)果25B--B-PPC++50C--C-PPC++100D--D-PPC++200E--E-PPC++陰性--陽性++試驗(yàn)結(jié)果供試品最小不干擾稀釋倍數(shù)為：25倍備注“+”代表陽性；“-”代表陰性福州新北生化工業(yè)有限公司福州新北生化工業(yè)有限公司鱟試劑廠家供試品稀釋倍數(shù)（倍）供試品PPC編號(hào)反應(yīng)結(jié)果編號(hào)反應(yīng)結(jié)果25B--B-PPC++50C--C-PPC++100D--D-PPC++200E--E-PPC++陰性--陽性++試驗(yàn)結(jié)果供試品最小不干擾稀釋倍數(shù)為：25倍備注“+”代表陽性；“-”代表陰性結(jié)論：分別用兩個(gè)廠家（湛江安度斯生物有限公司，福州新北生化工業(yè)有限公司）相同規(guī)格、相同靈敏度（0.25EU/mL）的鱟試劑對(duì)XXXX注射液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證，確定供試品的最小不干擾稀釋倍數(shù)為25倍。干擾試驗(yàn)參考《中國(guó)藥典》20151143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法“干擾試驗(yàn)”項(xiàng)下進(jìn)擾作用，為能否使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供依據(jù)。25行干擾試驗(yàn)。內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液1支（80EU/支），1mL15min80EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；80EU/mL30s10EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；4λ10EU/mL0.5mL4.5mL30s1.0EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。2λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取1.0EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2mL，置渦旋混合器上混合30s，混勻，制成0.5EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。1λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取0.5EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2mL，置渦旋混合器上混合30s，混勻，制成0.25EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.5λ0.25EU/mL2mL，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢2mL30s0.125EU/mL0.25λ0.125EU/mL2mL，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2mL，置渦旋混合器上混合30s，混勻，制成0.0625EU/mL的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。供試品溶液取本品0.2m2.3mL12.52mL12.52mL，混勻，制成稀釋倍數(shù)為25倍的溶液。含內(nèi)毒素的供試品溶液F-PPC0.5mL1EU/mL（4λ）0.5mL稀釋倍12.51mL2λ25的溶液。G-PPC0.5mL0.5EU/mL（2λ）0.5mL稀釋12.51mL2λ25的溶液。H-PPC0.5mL0.25EU/mL（1λ）0.5mL稀12.51mL2λ的溶液。I-PPC0.5mL0.5mL稀12.51mL2λ25的溶液。加樣反應(yīng)每個(gè)鱟試劑生產(chǎn)廠家驗(yàn)證需要的鱟試劑量為：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液組8支，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水陰性對(duì)照2支；含內(nèi)毒素的供試品溶液組16支，供試品陰性對(duì)照2支。按鱟試劑裝量每支用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水0.1mL溶解鱟試劑。10544524列0.1mL2λ1λ0.5λ0.25λ52細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為檢查用水陰性對(duì)照。18544524列0.1mL2λ1λ0.5λ0.25λ5225的供試品溶液作為樣品陰性對(duì)照。37℃±160分鐘±2分鐘后，觀察并記錄結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)只有當(dāng)每批供試品陰性對(duì)照平行管和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水陰性對(duì)照平行管都為陰2λ0.25λ0.5λ～2λ2λ0.25λ管均為陰性，λc0.5λ～2λ之間時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下無干擾作用。λc=antilg（∑X/n）式中 X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是指系列遞減的細(xì)菌內(nèi)素濃度中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度；n為每個(gè)濃度的平行管數(shù)。干擾試驗(yàn)結(jié)果干擾試驗(yàn)原始試驗(yàn)記錄見：附件4：XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證-干擾試驗(yàn)鱟試劑廠家湛江安度斯生物有限公司分組細(xì)菌內(nèi)毒素濃度（EU/mL）NCλC0.50.250.1250.0625內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液組++0.25++--含內(nèi)毒素的供試品溶液組++0.25++--++--++--備注“+”代表陽性；“-”代表陰性鱟試劑廠家福州生化工業(yè)有限公司分組細(xì)菌內(nèi)毒素濃度（EU/mL）NCλC0.50.250.1250.0625內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液組++0.25++--含內(nèi)毒素的供試品溶液組++0.25++--++--++--備注“+”代表陽性；“-”代表陰性結(jié)論：采取不同兩個(gè)廠家的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)，結(jié)果均符合規(guī)定，說明XXXX注射液在進(jìn)行25稀釋后確已排除干擾，在低于或等于此濃度的情況下即可使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。附表及附件附表編號(hào)名稱附表1文件資料確認(rèn)表附表2儀器確認(rèn)表附表3用具確認(rèn)表附表4試劑確認(rèn)表附表5細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證樣品確認(rèn)表附表6驗(yàn)證項(xiàng)目確認(rèn)附件編號(hào)名稱編號(hào)附件1培訓(xùn)記錄表/附件2鱟試劑靈敏度復(fù)核記錄014，017附件3XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證-干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)FD1234-ZXXXJ-010附件4XXXX注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法驗(yàn)證-干擾試驗(yàn)FD1234-ZXXXJ-011再驗(yàn)證當(dāng)供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變等可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須重新驗(yàn)證。公司公司LOGO哈哈檢查方法驗(yàn)證編號(hào)：VR-FD1234（3）-01A頁碼：1/1產(chǎn)品名稱：XXXX注射液規(guī)格：XXXml：XXXXmgPAGEPAGE11/16附表1 文件資料確認(rèn)表文件資料存放地點(diǎn)是否齊全《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂版）藥物研發(fā)中心?是 否《中國(guó)藥典》（2015年版四部）藥物研發(fā)中心?是 否《XXXX注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（編號(hào)：CS-QA-1085B）藥物研發(fā)中心?是 否可接受標(biāo)準(zhǔn)所有資料應(yīng)該齊全。結(jié)論是否合準(zhǔn) ?是 □否備注：N/A確認(rèn)人日： 復(fù)人/期：附表2 儀器確認(rèn)表序號(hào)儀器名稱儀器廠家儀器編號(hào)有效期至1電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司G-9-S-00012021年7月1日2渦旋混合器上海允延設(shè)備有限公司//3試管恒溫儀杭州奧盛儀器有限公司G-9-S-00012021年7月1日4生物安全柜美國(guó)法瑪西亞公司G-9-S-00012021年7月1日可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證所用儀器均已檢定并在有效期內(nèi)。結(jié)論是否合接標(biāo)