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文檔簡介

生物工藝學(xué)知識點(diǎn)第一章緒論1、生物工藝學(xué)(biotechnology):又稱為生物技術(shù),它是應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)原理,依靠生物作用劑(biologicalagents)的作用將物料進(jìn)行加工以供應(yīng)產(chǎn)品或社會服務(wù)的技術(shù)。特點(diǎn):多學(xué)科和多技術(shù)的結(jié)合、生物作用劑(生物催化劑)的參加、應(yīng)用大量高、精、尖設(shè)備。。2、生物催化劑是游離的或固定化的細(xì)胞或酶的總稱。生物催化劑特點(diǎn):優(yōu)點(diǎn):①常溫、常壓下反響②反響速率大③催化作用專一④價(jià)格廉價(jià)弊端:堅(jiān)固性差控制條件嚴(yán)格易變異(細(xì)胞)生物反響過程實(shí)質(zhì)是利用生物催化劑以從事生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)過程(processengineering)。3、生物技術(shù)研究的主要內(nèi)容:基因工程

(DNA重組技術(shù),

geneengineering)

、細(xì)胞工程

(cellengineering)

、酶工程

(enzymeengineering)

、發(fā)酵工程

(fermentationengineering)

、蛋白質(zhì)工程

(proteinengineering)

、第二章菌種的本源1、工業(yè)生產(chǎn)常用的微生物細(xì)菌、酵母菌、霉菌、放線菌、擔(dān)子菌、藻類。2、分別微生物新種的過程大體可分為采樣、增殖、純化和性能測定。含微生物質(zhì)料的預(yù)辦理方法:物理方法(加熱);化學(xué)方法(pH);誘餌法。誘餌技術(shù):將固體基質(zhì)加到待檢的土壤或水中,待其菌落長成后再鋪平板。分其他效率影響因素:1)培育基的養(yǎng)分;2)pH;3)加入的選擇性控制劑。3、高產(chǎn)培育基成分的選擇準(zhǔn)則:制備一系列的培育基,其中有各各種類的養(yǎng)分成為生長限制因素(C、N、P、O);使用一聚合或復(fù)合形式的生長限制養(yǎng)分;防范使用簡單同化的碳(葡萄糖)或氮(NH4+),它們可能引起分解代謝物隔斷;確定含有所需的輔因子(Co2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+)加入緩沖溶液以減小pH變化。4、代謝控制發(fā)酵(MetabolicControlfermentation):用人工誘變的方法,有意識地改變微生物的代謝路子,最大限度地積累產(chǎn)物,這類發(fā)酵形象地稱為代謝控制發(fā)酵,最早在氨基酸發(fā)酵中獲取成功應(yīng)用。5、菌種的衰落表觀現(xiàn)象有哪些?目的產(chǎn)物的產(chǎn)量下降營養(yǎng)物質(zhì)代謝和生長生殖能力下降發(fā)酵周期延長抗不良環(huán)境的性能減弱6、菌種的衰落的原因菌種珍藏不當(dāng)供應(yīng)不了當(dāng)?shù)臈l件或不利的條件經(jīng)誘變獲取的新菌株發(fā)生回復(fù)突變7、菌種的復(fù)壯方法:純種分別經(jīng)過寄主體進(jìn)行復(fù)壯裁汰已衰落的個(gè)體8、菌種的珍藏的原理依照菌種的生理生化特點(diǎn),人工創(chuàng)立條件,使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低,以減少其變異。一般可經(jīng)過保持培育基營養(yǎng)成分在最低水平,缺氧狀態(tài),干燥和低溫,使菌種處于“休眠”狀態(tài),控制其生殖能力。9、菌種的珍藏方法:斜面冰箱珍藏法沙土管珍藏法白臘油封存法真空冷凍干燥珍藏法液氮超低溫珍藏法第三章菌種選育1、常用菌種選育方法(1)自然選育:是指在生產(chǎn)過程中,不經(jīng)過人工辦理,利用菌種的自覺突變(spontaneousmutation)而進(jìn)行菌種優(yōu)選的過程。特點(diǎn):自覺突變的頻率較低,變異程度不大。因此該法培育新菌種的過程十分緩慢。2)誘變育種:是利用物理或化學(xué)誘變劑辦理均勻分其他微生物細(xì)胞群,促使其突變率大幅度提高,爾后采用簡略、迅速和高效的優(yōu)選方法,從中優(yōu)選少量吻合育種目的的突變株,以供生產(chǎn)實(shí)踐或科學(xué)研究使用。誘變育種的理論基礎(chǔ)是基因突變。常用誘變劑:物理誘變劑、化學(xué)誘變劑(堿基近似物、與堿基反響的物質(zhì)、在DNA分子中插入或缺失一個(gè)或幾個(gè)堿基物質(zhì))、生物誘變劑(3)分子育種(DNA重組、基因工程):用人為的方法將所需的某一供體生物的遺傳物質(zhì)DNA分子提取出來,在離體條件下切割后,把它與作為載體的DNA分子連接起來,爾后導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中,讓外來的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá),進(jìn)而獲取新物種的一種嶄新的育種技術(shù)。(4)雜交育種(Hybridization):老例雜交育種(Hybridization):一般是指人為利用真核微生物的有性生殖或準(zhǔn)性生殖或原核微生物的接合、F因子轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)變等過程,促使兩個(gè)擁有不同樣遺傳性狀的菌株發(fā)生基因重組,以獲取性能優(yōu)異的生產(chǎn)菌株。原生質(zhì)體交融技術(shù):經(jīng)過人工方法,使遺傳性狀不同樣的兩個(gè)細(xì)胞的原生質(zhì)體發(fā)生交融,重組子的過程,亦稱為“細(xì)胞交融”(cellfusion)。原生質(zhì)體交融的基本過程:原生質(zhì)體形成、原生質(zhì)體交融、原生質(zhì)體的再生。3、工程菌的不堅(jiān)固性表現(xiàn)

并產(chǎn)生質(zhì)粒的不堅(jiān)固(質(zhì)粒的扔掉、重組質(zhì)粒的

DNA片段零散)、表達(dá)產(chǎn)物的不堅(jiān)固第三章微生物的代謝調(diào)治1、微生物代謝調(diào)治方式代謝流向的調(diào)控分為代謝物的合成和代謝物的降解;經(jīng)過迅速啟動蛋白質(zhì)的合成和有關(guān)的代謝路子,平衡各代謝物流和反響速率來適應(yīng)外界環(huán)境的變化。代謝速度的調(diào)控分為酶量(粗調(diào))(酶合成的引誘和酶合成的隔斷)和酶活(細(xì)調(diào))(酶活性的激活、酶活性的控制)反響隔斷是轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)治,產(chǎn)見效應(yīng)慢;影響催化一系列反響的多個(gè)酶反響控制是酶活性水平調(diào)治,產(chǎn)見效應(yīng)快。只對是一系列反響中的第一個(gè)酶起作用底物對酶的影響稱為前饋。產(chǎn)物對酶的影響稱為反響。2、微生物初級代謝調(diào)治包括酶活調(diào)治、酶合成調(diào)治、遺傳控制1)酶活性的調(diào)治(細(xì)調(diào)):必然數(shù)量的酶,經(jīng)過其分子構(gòu)象或分子結(jié)構(gòu)的改變來調(diào)治其催化反應(yīng)的速率。酶活調(diào)治的影響因素包括:底物和產(chǎn)物的性質(zhì)和濃度、壓力、pH、離子強(qiáng)度、輔助因子以及其他酶的存在等等。特點(diǎn)是反響迅速。酶活性的調(diào)治包括:酶活性的激活和酶活性的控制(反響控制)(2)酶合成的調(diào)治:經(jīng)過調(diào)治酶合成的量來控制微生物代謝速度的調(diào)治系統(tǒng)。這類調(diào)治在基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)步行,對代謝活動的調(diào)治是間接的、緩慢的(3)酶合成的隔斷:在某代謝路子中,當(dāng)尾端產(chǎn)物過分時(shí),微生物的調(diào)治系統(tǒng)就會阻攔代謝路子中包括要點(diǎn)酶在內(nèi)的一系列酶的合成,進(jìn)而完整地控制代謝,減少尾端產(chǎn)物生成,這類現(xiàn)象稱為酶合成的隔斷。尾端代謝產(chǎn)物隔斷:由于某代謝路子尾端產(chǎn)物的過分積累而引起酶合成的(反響)隔斷。分解代謝物隔斷:當(dāng)細(xì)胞內(nèi)同時(shí)存在兩種可利用底物(碳源或氮源)時(shí),利用快的底物會阻遏與利用慢的底物有關(guān)的酶合成。這類隔斷其實(shí)不是由于迅速利用底物直接作用的結(jié)果,而是由這種底物分解過程中產(chǎn)生的中間代謝物引起的,因此稱為分解代謝物隔斷(過去被稱為葡萄糖效應(yīng))。3、改變細(xì)胞膜通透性的方法A限制培育基中生物素濃度在1~5mg/L,控制細(xì)胞膜中脂質(zhì)的合成;加入青霉素,控制細(xì)胞壁肽聚糖合成中肽鏈的交聯(lián);加入表面活性劑如吐溫80或陽離子表面活性劑(如聚氧化乙酰硬脂酰胺),將脂類從細(xì)胞壁中溶解出來,使細(xì)胞壁松懈,通透性增加;2+2+D控制Mn、Zn的濃度,攪亂細(xì)胞膜或細(xì)胞壁的形成;能夠經(jīng)過誘變育種的方法,優(yōu)選細(xì)胞透性突變株。5、人工控制微生物代謝的兩種手段:(1)生物合成路子的遺傳控制(2)發(fā)酵條件的控制谷氨酸棒桿菌(生物素弊端型)生產(chǎn)谷氨酸的調(diào)控第四章微生物次級代謝與調(diào)治1、次級代謝產(chǎn)物:某些微生物在生命循環(huán)的某一個(gè)階段產(chǎn)生的物質(zhì),它們一般是在菌生長停止后合成的。其生物合成最少有一部分是與核內(nèi)和核外的遺傳物質(zhì)有關(guān),同時(shí)也與這類遺傳信息產(chǎn)生的酶所控制的代謝路子有關(guān)。微生物產(chǎn)生的次級代謝物有抗生素、毒素、色素和生物堿等。2、初級與次級代謝路子互相連接次級代謝物平時(shí)是由初級代謝中間體經(jīng)修飾后形成的修飾初級代謝中間體的三種生化過程生物氧化與還原、生物甲基化、生物鹵化3、前體:指加入到發(fā)酵培育基中的某些化合物,它能被微生物直接結(jié)合到產(chǎn)物分子中去,而自己的結(jié)構(gòu)無多大變化有些還擁有促使產(chǎn)物合成的作用。中間體是指養(yǎng)分或基質(zhì)進(jìn)入一路子后被轉(zhuǎn)變成一種或多種不同樣的物質(zhì),他們均被進(jìn)一步代謝,最后獲取該路子的終產(chǎn)物。4、次級代謝物生物合成的原理①一旦前體被合成,在合適條件下它們便流向次級代謝物生物合成的專用路子。②在某些情況下單體結(jié)構(gòu)單位被聚合,形成聚合物。這些特有的生物合成中間體產(chǎn)物需做后幾步的結(jié)構(gòu)修飾,修飾的程度取決于產(chǎn)生菌的生理?xiàng)l件。有些復(fù)雜抗生素是由幾個(gè)來自不同樣生物合成路子組成的。第五章發(fā)酵培育基1、培育基平時(shí)指人工配制的供微生物生長、生殖、代謝和合成所需產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)和原料,同時(shí),培育基也為微生物等供應(yīng)除營養(yǎng)外的其他生長所必需的環(huán)境條件2、發(fā)酵培育基的要求①培育基能夠滿足產(chǎn)物最經(jīng)濟(jì)地合成②發(fā)酵后所形成的副產(chǎn)物盡可能的少③培育基的原料應(yīng)就地取材,價(jià)格廉價(jià);且性能堅(jiān)固,資源豐富,便于采買運(yùn)輸,合適大規(guī)模積蓄,能保證生產(chǎn)上的供應(yīng)。④所用培育基應(yīng)能滿足整體工藝的要求,如不應(yīng)影響通氣、提取、純化及廢物辦理等。3、工業(yè)上常用的碳源:葡萄糖、乳糖、淀粉、蔗糖工業(yè)上常用的氮源:無機(jī)氮源:氨水,銨鹽,硝酸鹽等。有機(jī)氮源:玉米漿、豆餅粉、花生餅粉、棉籽粉、魚粉、酵母浸出液等。生理酸性物質(zhì),如硫酸銨。生理堿性物質(zhì),如硝酸鈉。供應(yīng)生長因子的農(nóng)副產(chǎn)品原料:玉米漿麩皮水解液糖蜜酵母:可用酵母膏、酵母浸出液或直接用酵母粉。產(chǎn)物促使劑是指那些非細(xì)胞生長所必需的營養(yǎng)物,又非前體,但加入后卻能提高產(chǎn)量的增加劑。4、發(fā)酵培育基的設(shè)計(jì)和優(yōu)化方法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、均勻設(shè)計(jì)、響應(yīng)面解析正交試驗(yàn)設(shè)計(jì):利用正交表來安排與解析多因素試驗(yàn)的一種設(shè)計(jì)方法。它是由試驗(yàn)因素的全部水平組合中,優(yōu)選部分有代表性的水平組合進(jìn)行試驗(yàn),經(jīng)過對這部分試驗(yàn)結(jié)果的解析,認(rèn)識全面試驗(yàn)的情況,找出最優(yōu)的水平組合。正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)解析,見教材P112-114例題,表4-16,同時(shí)確定因素的主次序次、各因素的優(yōu)水平、各因素水平的最優(yōu)組合。小數(shù)點(diǎn)后保留一位。第六章發(fā)酵培育基滅菌和空氣凈化在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中,為了保證純種培育,在生產(chǎn)菌種接種培育前,要對培育基、空氣系統(tǒng)、消泡劑、流加物料、設(shè)備、管道等進(jìn)行滅菌,還要對生產(chǎn)環(huán)境進(jìn)行消毒,防范雜菌和噬菌體的大量生殖。微生物熱阻:微生物在某一特定條件下(主若是溫度和加熱方式)下的致死時(shí)間。對數(shù)殘留定律中各符號的意義。理論滅菌時(shí)間的計(jì)算3.1間歇實(shí)罐滅菌時(shí)間的計(jì)算3.2連續(xù)滅菌的滅菌時(shí)間計(jì)算:滅菌溫度的選擇:隨著溫度高升,滅菌速率常數(shù)增加的倍數(shù)大于培育基中營養(yǎng)成分的分解速率常數(shù)的增加倍數(shù)。即當(dāng)滅菌溫度高升時(shí),微生物殺滅速度提高,培育基營養(yǎng)成分破壞的速度減慢。5.影響培育基滅菌的因素:所污染雜菌的種類、數(shù)量、滅菌溫度和時(shí)間,培育基成分、pH值、培育基中顆粒、泡沫等對培育基滅菌也有影響。無菌空氣:指經(jīng)過除菌辦理使空氣中含菌量降低至一個(gè)極低的百分?jǐn)?shù),進(jìn)而能控制發(fā)酵污染至極小機(jī)遇。此種空氣稱為“無菌空氣”。介質(zhì)過濾除菌是使空氣經(jīng)過經(jīng)高溫滅菌的介質(zhì)過濾層,將空氣中的微生物等顆粒阻截在介質(zhì)層中,而達(dá)到除菌的目的。是大多數(shù)發(fā)酵廠廣泛采用的方法。按除菌系統(tǒng)可分為:絕對(表面)過濾和深層介質(zhì)過濾。介質(zhì)過濾除菌的機(jī)理:空氣流經(jīng)過這類介質(zhì)過濾層時(shí),借助慣性碰撞、攔截滯流、靜電吸附、擴(kuò)散等作用,將其塵埃和微生物截留在介質(zhì)層內(nèi),達(dá)到過濾除菌目的。第七章種子的擴(kuò)大培育1、種子擴(kuò)大培育:指將保留在砂土管、冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后,再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴(kuò)大培育而獲取必然數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子2、種子擴(kuò)大培育的目的與要求(1)種子擴(kuò)培的目的①接種量的需要②菌種的馴化③縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平(2)種子的要求①菌種細(xì)胞的生長活力強(qiáng),移種至發(fā)酵罐后能迅速生長,延延期短②生理性狀堅(jiān)固③菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求④無雜菌污染⑤保持堅(jiān)固的生產(chǎn)能力。3、種子罐級數(shù):是指制備種子需逐級擴(kuò)大培育的次數(shù),取決于菌種生長特點(diǎn)、孢子萌芽及菌體繁殖速度、所采用發(fā)酵罐的容積。種子罐級數(shù)受發(fā)酵規(guī)模、菌體生長特點(diǎn)、接種量的影響。級數(shù)大,難控制、易染菌、易變異,管理困難,一般2~4級。4、種子制備分兩個(gè)階段:實(shí)驗(yàn)室種子制備階段生產(chǎn)車間種子制備階段5、種齡:是指種子罐中培育的菌絲體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時(shí)的培育時(shí)間。接種量:是指移入的種子液體積和接種后培育液體積的比率。平時(shí)接種量:細(xì)菌1-5%,酵母菌5-10%,霉菌7-15%,有時(shí)20-25%青霉素生產(chǎn)的種子制備過程:安瓿管→斜面孢子→大米孢子→一級種子→二級種子→發(fā)酵第八章發(fā)酵工藝控制1、微生物發(fā)酵的生產(chǎn)水平取決于生產(chǎn)菌種自己的性能和合適的環(huán)境條件。2、發(fā)酵過程的代謝變化從產(chǎn)物形成來說,代謝變化就是反響發(fā)酵中的菌體生長、發(fā)酵參數(shù)的變化(培育基和培育條件)和產(chǎn)物形成速率這三者之間的關(guān)系。在分批培育過程中依照產(chǎn)物生成可否與菌體生長同步的關(guān)系,將微生物產(chǎn)物形成動力學(xué)分為①生長關(guān)系型和②非生長關(guān)系型。3、發(fā)酵方式(1)補(bǔ)料-分批發(fā)酵:指分批培育過程中,間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培育基的培育方法。優(yōu)點(diǎn)在于使發(fā)酵系統(tǒng)中保持很低的基質(zhì)濃度。低基質(zhì)濃度的優(yōu)點(diǎn):①能夠除掉迅速利用碳源的隔斷效應(yīng),并保持合適的菌體濃度,使不至于加劇供氧的矛盾;②戰(zhàn)勝養(yǎng)分的不足,防范發(fā)酵過早結(jié)束。(2)半連續(xù)發(fā)酵:是指在補(bǔ)料-分批發(fā)酵的基礎(chǔ)上,間歇地放掉部發(fā)散酵液的培育方法。優(yōu)點(diǎn):①能夠除掉迅速利用碳源的隔斷效應(yīng),并保持合適的菌體濃度,使不至于加劇供氧的矛盾;②戰(zhàn)勝養(yǎng)分的不足,防范發(fā)酵過早結(jié)束;③緩解有害代謝產(chǎn)物的積累。(3)連續(xù)發(fā)酵:指培育基料液連續(xù)輸入發(fā)酵罐,并同時(shí)放出含有產(chǎn)品的發(fā)酵液的培育方法。在這樣的環(huán)境中培育,菌的生長就碰到所供應(yīng)基質(zhì)的限制,培育液中的菌體濃度能保持必然的堅(jiān)固狀態(tài)。與傳統(tǒng)的分批發(fā)酵對照,連續(xù)培育有以下優(yōu)點(diǎn):①保持低基質(zhì)濃度:能夠除掉迅速利用碳源的隔斷效應(yīng),并保持合適的菌體濃度,使不至于加劇供氧的矛盾;②防范培育基積累有毒代謝物;③能夠提高設(shè)備利用率和單位時(shí)間的產(chǎn)量,節(jié)約發(fā)酵罐的非生產(chǎn)時(shí)間;④便于自動控制。4、發(fā)酵控制參數(shù)按性質(zhì)分類:物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)、生物參數(shù)按檢測手段分類:①直接參數(shù):⑴在線檢測參數(shù)⑵離線檢測參數(shù)②間接參數(shù)5、發(fā)酵熱發(fā)酵熱就是發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量。Q發(fā)酵=Q生物+Q攪拌-Q蒸發(fā)-Q顯-Q輻射生物熱(biologicalheat)是菌體生長過程中直接釋放到體外的熱能,使發(fā)酵液溫度高升。攪拌熱(agitationheat)是攪拌器引起的液體之間和液體與設(shè)備之間的摩擦所產(chǎn)生的熱量。6、發(fā)酵過程pH值的一般變化規(guī)律(1)生長階段:菌體產(chǎn)生蛋白酶水解培育基中的蛋白質(zhì),生成銨離子,使pH上升至堿性;隨著菌體量增加,銨離子的耗資也增加,其他糖利用過程中有機(jī)酸的積累使pH值下降。(2)生產(chǎn)階段:這個(gè)階段pH值趨于堅(jiān)固。(3)自溶階段:隨著養(yǎng)分的耗盡,菌體蛋白酶的活躍,培育液中氨基氮增加,致使pH又上升,此時(shí)菌體趨于自溶而代謝活動停止。7、引起發(fā)酵液pH值異常顛簸的因素pH值的變化決定于所用的菌種、培育基的成分和培育條件pH下降:①培育基中碳、氮比率不當(dāng)。碳源過多,特別是葡萄糖過分,也許中間補(bǔ)糖過多加上溶氧不足,致使有機(jī)酸大量積累而pH下降;②消泡劑加得過多;③生理酸性物質(zhì)的存在,銨被利用,pH下降。pH上升:①培育基中碳、氮比率不當(dāng)。氮源過多,氨基氮釋放,使pH上升;②生理堿性物質(zhì)存在;③中間補(bǔ)料氨水或尿素等堿性物質(zhì)加入過多。8、臨界氧濃度(criticalvalueofdissolvedoxygenconcentration)

:指不影響菌的呼吸所贊成的最低氧濃度。如對產(chǎn)物形成而言便稱為產(chǎn)物合成的臨界氧濃度。呼吸強(qiáng)度又稱氧比耗資速率,是指單位質(zhì)量的干菌體在單位時(shí)間內(nèi)所吸取的氧量,以QO2表示,單位為mmolO2/(g干菌體·h)。耗氧速率又稱攝氧率,是指單位體積培育液在單位時(shí)間內(nèi)的吸氧量,以r表示,單位為mmolO2/(L·h)。9、引起溶氧異常下降,可能有以下幾種原因:①污染好氣性雜菌,大量的溶氧被耗資掉,可能使溶氧在較短時(shí)間內(nèi)下降到零周邊,若是雜菌自己耗氧能力不強(qiáng),溶氧變化即可能不明顯;②菌體代謝發(fā)生異?,F(xiàn)象,需氧要求增加,使溶氧下降;③某些設(shè)備或工藝控制發(fā)生故障或變化,也可能引起溶氧下降,如攪拌功率耗資變小或攪拌速度變慢,影響供氧能力,使溶氧降低。10、泡沫的形成及其對發(fā)酵的影響在大多數(shù)微生物發(fā)酵過程中,通氣、攪拌以及代謝氣體的逸出,再加上培育基中糖、蛋白質(zhì)、代謝物等表面活性劑的存在,培育液中就形成了泡沫。形成的泡沫有兩各種類:一種是發(fā)酵液液面上的泡沫,氣相所占的比率特別大,與液體有較明顯的界限,如發(fā)酵先期的泡沫;另一種是發(fā)酵液中的泡沫,又稱流態(tài)泡沫(fluidfoam),分別在發(fā)酵液中,比較堅(jiān)固,與液體之間無明顯的界限大量的泡沫引起的負(fù)作用:發(fā)酵罐的裝料系數(shù)減少、氧傳達(dá)系統(tǒng)減小;增加了菌群的非均一性;造成大量逃液,增加染菌機(jī)遇;嚴(yán)重時(shí)通氣攪拌無法進(jìn)行,菌體呼吸碰到阻攔,致使代謝異?;蚓w自溶;消泡劑的增加將給提取工序帶來困難。泡沫的除掉調(diào)整培育基中的成分(如少加或緩加易起泡的原料)或改變某些物理化學(xué)參數(shù)(如pH值、溫度、通氣和攪拌)也許改變發(fā)酵工藝(如采用分次投料)來控制,以減少泡沫形成的機(jī)遇。采用菌種選育的方法,優(yōu)選不產(chǎn)生流態(tài)泡沫的菌種,來除掉起泡的內(nèi)在因素。采用機(jī)械消泡或消泡劑來除掉已形成的泡沫。常用的消泡劑有4大類:天然油脂類、脂肪酸和酯類、聚醚類、硅酮類11、造成染菌的主要原因設(shè)備滲漏空氣帶菌種子帶菌滅菌不完整技術(shù)管理不善第十章下游加工過程概論1、下游技術(shù)(工程)(downstreamprocessing):對于由生物界自然產(chǎn)生的或由微生物菌體發(fā)酵的、動植物細(xì)胞組織培育的、酶反響等各種生物工業(yè)生產(chǎn)過程獲取的生物原料,經(jīng)提取分別、加工并精制目的成分,最后使其成為產(chǎn)品的技術(shù)。發(fā)酵液的特點(diǎn)1)含水多,產(chǎn)物含量低;2)含菌體蛋白;3)溶有原來培育基成分;4)相當(dāng)多的副產(chǎn)物和色素;5)易被雜菌污染或使產(chǎn)物進(jìn)一步分解;6)易起泡,粘性物質(zhì)多。3、整個(gè)下游加工過程應(yīng)依照以下四個(gè)原則時(shí)間短;2)溫度低,(選擇在生物物質(zhì)的溫度范圍內(nèi));3)pH適中;4)嚴(yán)格沖刷消毒(包括廠房、設(shè)備及管路,注意死角)。4、一般下游加工過程可分為4個(gè)階段培育液(發(fā)酵液)的預(yù)辦理和固液分別;2)初步純化(提?。?)高度純化(精制);4)成品加工。5、下游加工過程的一般流程第十二章發(fā)酵液的預(yù)辦理和固液分別方法1、改進(jìn)發(fā)酵液過濾特點(diǎn)的物理化學(xué)方法:調(diào)酸(等電點(diǎn))、熱辦理、電解質(zhì)辦理、增加凝聚劑、增加表面活性物質(zhì)、增加反響劑、冷凍-解凍及增加助濾劑等。2、凝聚——指在電解質(zhì)作用下,由于膠粒之間雙電層電排斥作用降低,電位下降,而使膠系統(tǒng)統(tǒng)不堅(jiān)固的現(xiàn)象;常用的凝聚劑電解質(zhì)有:硫酸鋁Al2(SO4)3?18H2O(明礬);氯化鋁AlCl3?6H2O;三氯化鐵FeCl3;硫酸亞鐵FeSO4·7H2O;石灰;ZnSO4;MgCO3絮凝——指在某些高分子絮凝劑存在下,基于橋架作用,使膠粒形成較大絮凝團(tuán)的過程。工業(yè)上使用的絮凝劑可分為三類:1)有機(jī)高分子聚合物,如聚丙烯酰胺類衍生物、聚苯乙烯類衍生物;2)無機(jī)高分子聚合物,如聚合鋁鹽、聚合鐵鹽等;3)天然有機(jī)高分子絮凝劑,如聚糖類膠粘物、海藻酸鈉、明膠、骨膠、殼多糖、脫乙酰殼多糖等。目前最常有的高分子聚合物絮凝劑有機(jī)合成的聚丙烯酰胺(polyacrylamide)類衍生物3、雜蛋白的去除方法有積淀法、變性法、吸附法4、固液分其他方法:重力沉降、浮選、旋液分別、介質(zhì)過濾、離心。5、依照過濾機(jī)理,過濾操作可分為澄清過濾和濾餅過濾。第十三章細(xì)胞破碎1、細(xì)胞破碎的阻力:細(xì)菌破碎的主要阻力:肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越致密,破碎的難度越大,革蘭氏陰性細(xì)菌網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不及革蘭氏陽性細(xì)菌的堅(jiān)固;酵母細(xì)胞壁破碎的阻力:主要決定于壁結(jié)構(gòu)交聯(lián)的親密程度和它的厚度;霉菌細(xì)胞壁中含有幾丁質(zhì)或纖維素的纖維狀結(jié)構(gòu),其強(qiáng)度比細(xì)菌和酵母菌的細(xì)胞壁有所提高。2、常用破碎方法機(jī)械法:珠磨法(固體剪切作用)、高壓勻漿法(液體剪切作用)、超聲破碎法(液體剪切作用)、X-press法(固體剪切作用)。非機(jī)械法:酶溶法(酶分解作用)、化學(xué)浸透法(改變細(xì)胞膜的浸透性)、浸透壓法(浸透壓激烈改變)、凍結(jié)融化法(屢次凍結(jié)-融化)、干燥法(改變細(xì)胞膜浸透性)3、破碎率的測定方法1)直接測定法2)目的產(chǎn)物測定法3)導(dǎo)電率測定法第十四章積淀法(Precipitation)1、固相析出技術(shù):經(jīng)過加入某種試劑或改變?nèi)芤簵l件,使生化產(chǎn)物溶解度降低,以固體形式(沉淀和晶體)從溶液中沉降析出的分別純化技術(shù)。結(jié)晶法:在固相析出過程中,析出物為晶體稱為結(jié)晶法。積淀法:在固相析出過程中,析出物為無定形固體稱為積淀法。常用的積淀法:鹽析法、有機(jī)溶劑積淀法和等電點(diǎn)積淀法等。2、鹽析(Saltinducedprecipitation):在高濃度的中性鹽存在下,蛋白質(zhì)(酶)等生物大分子物質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,產(chǎn)生積淀的過程。原因以下:1)無機(jī)離子與蛋白質(zhì)表面電荷中和,形成離子對,部分中和了蛋白質(zhì)的電性,使蛋白質(zhì)分子之間的排斥力減弱,進(jìn)而能夠互相靠攏;2)中性鹽的親水性大,使蛋白質(zhì)脫去水化膜,疏水區(qū)裸露,由于疏水區(qū)的互相作用致使積淀;Ks鹽析法:在必然pH和溫度下,改變系統(tǒng)離子強(qiáng)度進(jìn)行鹽析的方法;β鹽析法:在必然離子強(qiáng)度下,改變pH和溫度進(jìn)行鹽析;常用的鹽析用鹽:硫酸銨、硫酸鈉,磷酸鹽,檸檬酸鹽。3、有機(jī)溶劑積淀:在含有溶質(zhì)的水溶液中加入必然量親水的有機(jī)溶劑,降低溶質(zhì)的溶解度,使其積淀析出。原理:(1)降低了溶質(zhì)的介電常數(shù),使溶質(zhì)之間的靜電引力增加,進(jìn)而出現(xiàn)齊聚現(xiàn)象,致使積淀。(2)有機(jī)溶劑的水合作用,降低了自由水的濃度,降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度,降低了親水性,致使脫水凝聚。常用的有機(jī)溶劑沉析劑:乙醇:沉析作用強(qiáng),揮發(fā)性適中,無毒常用于蛋白質(zhì)、核酸、多糖等生物大分子的沉析;丙酮:沉析作用更強(qiáng),用量省,但毒性大,應(yīng)用范圍不廣;4、等電點(diǎn)積淀:調(diào)治系統(tǒng)pH值,使兩性電解質(zhì)的溶解度下降,析出的操作稱為等電點(diǎn)積淀。原理:蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),當(dāng)溶液pH值處于等電點(diǎn)時(shí),分子表面凈電荷為0,雙電層和水化膜結(jié)構(gòu)被破壞,由于分子間引力,形成蛋白質(zhì)齊聚體,進(jìn)而產(chǎn)生積淀。第十五章膜過濾法1、膜過濾法指以壓力為推動力,依靠膜的選擇性,將液體中的組分進(jìn)行分其他方法?;驹蠢硎呛Y孔分別過程。在壓差的推動下,原料液中的溶劑和小的溶質(zhì)粒子從高壓的料液側(cè)透過膜到低壓側(cè),所獲取的液體一般稱為濾出液或透過液,而大的粒子組分被膜截留。包括微濾(MF)、超濾(UF)、納濾(NF)和反浸透(RO)四種過程。在工業(yè)上用得最廣的膜資料是醋酸纖維素和聚砜。濃差極化:當(dāng)溶劑透過膜,而溶質(zhì)留在膜上,使膜面濃度增大,并高于主體中濃度,這類濃度差致使溶質(zhì)自膜面反擴(kuò)散至主體中,這類現(xiàn)象稱為濃差極化。在超濾中,為減少濃差極化,平時(shí)采用錯(cuò)流操作。膜的污染:膜在使用中,盡管操作條件保持不變,但通量仍逐漸降低的現(xiàn)象。污染原因:膜與料液中某一溶質(zhì)的互相作用;吸附在膜上的溶質(zhì)和其他溶質(zhì)的互相作用。膜污染的除掉:污染必定經(jīng)過沖刷的方法才能除掉。經(jīng)沖刷后如純水通量達(dá)到或湊近原來水平,則認(rèn)為污染已除掉。減少膜污染的方法1)預(yù)辦理2)改變膜的表面性質(zhì)市售的超濾器大體有四種型式:管式、中空纖維式、螺旋卷繞式和平板式。將以下表示相贊成義的詞連線concentrationfactor

萃取separationfactor

離子交換extraction

超濾reverseosmosis

膜分別membraneseparation

離心ion-exchange

分別因子cross-flowfiltration

下游技術(shù)centrifugation

反浸透ultra-filtration

濃縮率錯(cuò)流萃取微濾第十六章溶劑萃取和浸取1、溶劑萃取利用一種溶質(zhì)組分(如產(chǎn)物)在兩個(gè)互不混溶的液相(如水相和有機(jī)溶劑相)中竟?fàn)幮匀芙夂头峙湫再|(zhì)上的差別來進(jìn)行分別操作的。2、“相似相溶”原理分子之間能夠有兩方面的相似:一是分子結(jié)構(gòu)相似,如分子的組成、官能團(tuán)、形態(tài)結(jié)構(gòu)的相似;二是能量(互相作用力)相似,如互相作用力有極性的和非極性之分,兩種物質(zhì)如互相作用力周邊,則能互相溶解。與水“相似”的物質(zhì)易溶于水,與油“相似”的物質(zhì)易溶于油就是相似相溶原理的表現(xiàn)。3、分配定律和分別因數(shù)1)分配定律:在必然溫度必然壓力的條件下,溶質(zhì)分配在兩個(gè)互不相溶的溶劑中,達(dá)到平衡時(shí)溶質(zhì)在兩相中的活度之比為一常數(shù)。若是是稀溶液,活度可用濃度代替,則達(dá)到平衡時(shí)溶質(zhì)在兩相中的濃度之比為一常數(shù)。稱之為分配系數(shù)K,2)分別因數(shù)3、乳化和去乳化乳化:一種液體(分別相)分別在另一種不相混溶的液體(連續(xù)相)中的現(xiàn)象。乳化的結(jié)果可能形成兩種形式的乳濁液:一種是水包油型(O/W),另一種為油包水型(W/O)。生產(chǎn)過程出現(xiàn)的乳濁液是水包油型(O/W),還是油包水型(W/O),主要由表面活性劑的性質(zhì)決定。4、雙水相萃?。涸诒厝粭l件下,水相也能夠形成兩相(即雙水相系統(tǒng))甚至多相。于是有可能將水溶性的酶、蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì)從一個(gè)水相轉(zhuǎn)移到另一水相中,進(jìn)而完成分別任務(wù)。常用聚合物雙水相系統(tǒng):聚乙二醇-葡聚糖、聚乙二醇-無機(jī)鹽系統(tǒng)雙水相萃取的優(yōu)點(diǎn):1)使固液分別和純化兩個(gè)步驟同時(shí)進(jìn)行,一步完成;2)合適熱敏物質(zhì)的提取,主若是胞內(nèi)酶;3)親水性聚合物加入水中,形成兩相,在這兩相中,水分都占大比率(85~95%),這樣生物活性蛋白質(zhì)在兩相中不會失活,且以必然比率分配于兩相中。第十七章離子交換法1、離子交換原理及分類離子交換樹脂是一種不溶于酸、堿和有機(jī)溶劑的固態(tài)高分子資料。是一類帶有官能團(tuán)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物,其結(jié)構(gòu)有三部分組成:不溶性的三維空間網(wǎng)狀骨架,連接在骨架上的官能團(tuán)和官能團(tuán)所帶的相反電荷的可交換離子。骨架上的活性離子在水溶液中發(fā)生離解,可在較大的范圍內(nèi)自由搬動,擴(kuò)散到溶液中,同時(shí),在溶液中的同種類離子也能從溶液中擴(kuò)散到骨架的網(wǎng)格或孔內(nèi)。當(dāng)這兩種離子濃度差較大時(shí),就產(chǎn)生一種交換的推動力,使它們之間產(chǎn)生交換作用,利用這類濃度差的推動力使樹脂上的可交換離子發(fā)生可逆交換反響。樹脂按活性離子分類,活性離子是陽離子(和陽離子發(fā)生交換)就稱為陽離子交換樹脂;若是是陰離子,則稱為陰離子交換樹脂。2、樹脂的命名依照離子交換樹脂官能團(tuán)的性質(zhì),將其分為強(qiáng)酸(0)、弱酸(1)、強(qiáng)堿(2)、弱堿(3)、螯合(4)、兩性(5)及氧化還原(6)等7類。3、離子交換樹脂的理化性能指標(biāo)1)外觀;2)交聯(lián)度;3)化學(xué)堅(jiān)固性;4)機(jī)械強(qiáng)度;5)交換量4、影響離子交換樹脂選擇性的因素1)離子價(jià)數(shù)離子交換樹脂總是優(yōu)先選擇高價(jià)離子,而低價(jià)離子被吸附時(shí)則較弱。陽離子被吸附的序次為:Fe3+>Al3+>Ca2+>Mg2+>Na+,陰離子序次為:檸檬酸根>硫酸根>硝酸根2)溶液濃度的影響樹脂對離子交換吸附的選擇性,在稀溶液中比較大,而在濃溶液中選擇性較小。3)離子的水化半徑水化半徑較小的離子優(yōu)先吸附。4)有機(jī)溶劑的影響有機(jī)溶劑會使樹脂對有機(jī)離子的選擇性降低,而簡單吸附無機(jī)離子,可利用有機(jī)溶劑從樹脂上洗脫難洗脫的有機(jī)物質(zhì)。5)樹脂與交換離子間的輔助力凡能與樹脂間形成輔助力,如氫鍵、范德華力等輔助力的離子,樹脂對其吸附力就大;反之,能破壞這些輔助力的溶液就能簡單地將離子從樹脂上洗脫下來。5、離子交換樹脂的工作過程:1)樹脂預(yù)辦理:新樹脂裝入柱后,先用去離子水浸泡12h左右,使樹脂充分吸水膨脹,再用2-3倍樹脂體積的10%左右食鹽水浸泡4h以上。用水洗凈殘留的NaCl,再依照樹脂種類和使用所需要的型號分別用酸和堿辦理,最后調(diào)pH值至所需范圍。2)上柱交換交換方式:采用順流和逆流進(jìn)行3)洗脫:用親和力更強(qiáng)的同性離子代替樹脂上吸附的目的產(chǎn)物。4)樹脂的再生:先用清水沖洗,爾后用再生劑再生,最后用清水洗至所需pH值。ISEP系統(tǒng)是一種連續(xù)的離子交換系統(tǒng)目前已成功的應(yīng)用在各種不同樣的產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域中。ISEP系統(tǒng)采用多柱(20/30交換柱)吸附以及在穩(wěn)定狀態(tài)下連續(xù)運(yùn)行。不需要備用設(shè)備;離子交換樹脂的再生也不用中斷正常的生產(chǎn)。ISEP系統(tǒng)能夠辦理雜質(zhì)濃度較高的物料,保證產(chǎn)品擁有堅(jiān)固的成分和濃度;采用多通道逆向流動再生方式,減少了離子交換樹脂及、再生劑和沖洗水的用量。第十八章色譜分別法1、色譜分別(ChromatographicResolution,CR)利用多組分混雜物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)(如吸附力、分子極性、分子形狀和大小、分子親合力、分配系數(shù)等)的差別,使各組分以不同樣程度分布在固定相和流動相中。當(dāng)多組分混雜物隨流動相流動時(shí),由于各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差別,而以不同樣的速率搬動,使之分別。分類吸附色譜分別是指混雜物隨流動相經(jīng)過固定相(吸附劑)時(shí),由于固定相對不同樣物質(zhì)的吸附力不同樣而使混雜物分其他方法。分配色譜是利用混雜物中各物質(zhì)在兩液相中的分配系數(shù)不同樣而分別。依照固定相和流動相的極性與非極性的差別,分配色譜可分為正相色譜和反相色譜。離子交換色譜是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中擁有同樣電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換,由于混雜物中不同樣溶質(zhì)對交換劑擁有不同樣的親合力而將它們分別。凝膠色譜以凝膠為固定相,是一種依照各物質(zhì)分子大小不同樣而進(jìn)行分其他色譜技術(shù),

又稱為分子篩色譜(MolecularSieveChromatography,MSC)、空間排阻色譜或尺寸排阻色譜(

SizeExclusionChromatography,SEC)。第十九章蒸發(fā)、蒸餾和結(jié)晶1、真空蒸發(fā):冷凝器和蒸發(fā)器溶液側(cè)的操作壓力低于大氣壓、此時(shí)系統(tǒng)中的不凝性氣體必定用真空泵抽出。目的:降低溶液的沸點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn):溶液沸點(diǎn)低,可用溫度較低的低壓蒸汽或廢蒸汽作加熱蒸汽。溶液沸點(diǎn)低,同樣蒸汽所需的傳熱面小。沸點(diǎn)低,有利于辦理高溫下易分解和變質(zhì)的熱敏性物料。蒸發(fā)器的操作溫度低,系統(tǒng)的熱損失小。2、多效蒸發(fā):第一個(gè)蒸發(fā)器(稱為第一效)中蒸出的二次蒸汽用作第二個(gè)蒸發(fā)器(第二效)的加熱蒸汽,第二個(gè)蒸發(fā)器蒸出的二次蒸汽用作第三個(gè)蒸發(fā)器(第三效)的加熱蒸汽,依此類推。3、蒸發(fā)器的分類:分為膜式蒸發(fā)器和非膜式蒸發(fā)器兩大類。膜式蒸發(fā)器又分為升膜蒸發(fā)器、降膜蒸發(fā)器、旋轉(zhuǎn)刮板蒸發(fā)器、板式蒸發(fā)器。4、酒精發(fā)酵醪液蒸餾的理論基礎(chǔ)是拉烏爾定律。拉烏爾定律:混雜液中,蒸氣壓高的組分,在氣相中的含量總是比液相中的高;反之,蒸氣壓低的組分,在液相中的含量總是比氣相中的高。5、飽和曲線和過飽和曲線飽和溶液:溶液恰好飽和,溶質(zhì)既無溶解也無結(jié)晶,即溶質(zhì)與溶液處于平衡狀態(tài),此溶液稱為飽和溶液;未飽和溶液:若增加固體則固體溶解;過飽和溶液:高出飽和點(diǎn)的溶質(zhì)早晚要從溶液中積淀出來。要使溶質(zhì)從溶液中結(jié)晶出來,須第一使溶液成為過飽和狀態(tài),也即必定想法產(chǎn)生必然的過飽和度作為推動力。6、溶液的過飽和度與結(jié)晶的關(guān)系:AB為飽和曲線;CD為過飽和曲線。AB和CD將圖分為:堅(jiān)固區(qū)、介穩(wěn)區(qū)和不穩(wěn)區(qū)。堅(jiān)固區(qū):溶液還沒有飽和,沒有結(jié)晶的可能。介穩(wěn)區(qū):也不會自覺產(chǎn)生晶核,但如已有晶核,則晶核長大而吸取溶質(zhì)直至濃度回落到飽和線上。不穩(wěn)區(qū):能自覺產(chǎn)生晶核。如E點(diǎn)是溶液的原始末飽和狀態(tài),EH是冷卻結(jié)晶線,F(xiàn)點(diǎn)是飽和點(diǎn),不能夠結(jié)晶,到達(dá)G點(diǎn)時(shí),自覺產(chǎn)生晶核。7、結(jié)晶包括三個(gè)過程:形成過飽和溶液;晶核形成;晶體生長。8、接觸成核(碰撞成核):再生的晶核是晶漿(有晶體存在的結(jié)晶溶液)中已有的晶體顆粒,在結(jié)晶器中與其他固體接觸碰撞時(shí)產(chǎn)生的晶體表層的碎粒。其中較大的就是新的晶核。優(yōu)點(diǎn):①動力學(xué)級數(shù)較低,即溶液過飽和度對成核影響較小。②在低過飽和度下進(jìn)行,能獲取優(yōu)異結(jié)晶產(chǎn)品。③產(chǎn)生晶核所需要的能量特別低,被碰撞的晶體不會造成宏觀上的磨損。在工業(yè)生產(chǎn)中,接觸成核有以下4種方式:晶體與攪拌螺旋槳間的碰撞;湍流下晶體與結(jié)晶器壁間的碰撞;湍流下晶體與晶體的碰撞;沉降速度不同樣,晶體與晶體的碰撞。其中以第1種方式為主。第十一章典型發(fā)酵產(chǎn)品介紹1、釀造酒包括黃酒、啤酒、葡萄酒,酒精含量比較低。蒸餾酒主要指白酒、白蘭地等。蒸餾酒的酒精含量高。2、紅葡萄酒:用果皮帶色的葡萄帶皮發(fā)酵制成,酒色呈深紅、鮮紅、紫紅或?qū)毷t。白葡萄酒用白葡萄或紅皮白肉葡萄的果汁制成,酒色呈淺黃、禾稈黃、金黃色或近似無色。3、白蘭地商標(biāo)上的英文縮寫:X.O(ExtraOld)酒齡(即貯陳期)規(guī)定不低于10年。4、啤酒生產(chǎn)中麥汁煮沸的目的:蒸發(fā)水分,濃縮麥汁;鈍化全部酶和麥汁殺菌;蛋白質(zhì)變性和絮凝;酒花有效組分的浸出;消除麥汁中特異的異雜臭氣。5、白酒的四大香型:米香型:桂林三花酒;發(fā)酵完成后經(jīng)過屢次二至三次蒸餾,酒精度數(shù)較高,民間過去叫“三蒸酒”、“三熬酒”。釀酒師們總結(jié)出了“觀花論酒”的經(jīng)驗(yàn)。當(dāng)酒度在55°至60°時(shí),由于液體表面張力,酒面晃動便浮起數(shù)層酒花,長遠(yuǎn)不散。釀酒師們說“起花了,三花!”就接酒。醬香型(茅型酒)茅臺酒;原料為高粱,曲為純小麥制高溫曲,八次蒸料,八次下曲,八次發(fā)酵,八次蒸餾(但僅取酒7次,由于第一次蒸餾出的不作正品,潑回酒窖重新發(fā)酵)。濃香型(廬型酒):廬州老窖——產(chǎn)于四川瀘州市。千年窖,萬年糟,傳統(tǒng)的老五甑生產(chǎn)工藝,混蒸,主體香為己酸乙酯。。純小麥制大曲,以糯玉米為原料。依照酒的質(zhì)量可分特曲、頭曲、二曲和三曲。五糧液采用五種糧食(高梁、大米、糯米、小麥、玉米)為原料。清香型(汾型酒):汾酒——產(chǎn)于山西汾陽縣杏花村,二次發(fā)酵二次勾兌。上一次發(fā)酵21天,蒸餾,加酒糟,再發(fā)酵21天,再蒸餾。清蒸二次清工藝,乙酸乙酯和乳酸乙酯兩者的結(jié)合為主體香。6

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