材料血液相容性表征第1頁/共22頁前言過去的十年里科技工作者對(duì)用于合成抗凝血生物材料的本體材料以及合成方法和途徑作了大量的研究,并取得了顯著的成果，即便如此,研究中也還存在諸如材料機(jī)械性能與抗凝血性能不能兼得之類的問題。為了更好的解決存在的問題,以期獲得完美的抗凝血生物材料,我們就需要對(duì)合成的材料進(jìn)行全面的表征,通過表征結(jié)果反過來指導(dǎo)我們進(jìn)行正確的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)．第2頁/共21頁第2頁/共22頁１血液相容性三個(gè)水平上的反應(yīng)血小板血栓形成

凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)激活

免疫成份改變、血小板受體、ADF(二磷酸腺苷)、前列環(huán)素釋放第3頁/共21頁第3頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第4頁/共21頁第4頁/共22頁２．１接觸活化材料與血液接觸后的凝血酶原時(shí)間(PTT)活化部分凝血激酶時(shí)間(aPTT)體外復(fù)鈣化時(shí)間(RTT)

第5頁/共21頁第5頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第6頁/共21頁第6頁/共22頁２．２補(bǔ)體激活血小板受到刺激時(shí)會(huì)激活補(bǔ)體，而補(bǔ)體中的蛋白成分即補(bǔ)體第三組分(C3)，補(bǔ)體第四組分(C4)和補(bǔ)體第五組分(C5)就會(huì)吸附到異物表面，就會(huì)激活血小板，促進(jìn)血小板的黏附和聚集，造成凝血

用SDA—PAGE凝膠電泳測(cè)定單個(gè)組分的含量

第7頁/共21頁第7頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第8頁/共21頁第8頁/共22頁２．３凝血酶的產(chǎn)生正常的血液中不含凝血酶(IIa)，當(dāng)血液與異物接觸或者受到創(chuàng)傷時(shí)，血液里的凝血酶原(II)在組織凝血活酶xa的作用下就會(huì)生成凝血酶

.它的含量的增多會(huì)直接導(dǎo)致血液凝固速度加快

.酶免疫法(EIA)

－凝血酶(IIa)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)

－凝血酶原片段和凝血酶－抗凝血酶Ⅲ復(fù)合物第9頁/共21頁第9頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第10頁/共21頁第10頁/共22頁２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化血液凝固的最后步驟是纖維蛋白原(I)在凝血酶(IIa)的作用下生成纖維蛋白凝塊(Ia)

纖維蛋白記數(shù)器(fibrintimer)

對(duì)凝血酶時(shí)間的測(cè)定來判斷纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化程度。第11頁/共21頁第11頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第12頁/共21頁第12頁/共22頁２．５纖維蛋白的溶解體內(nèi)的凝血過程和纖維蛋白溶解過程處于平衡狀態(tài)．

測(cè)定凝血酶時(shí)間和毒蛇凝血酶時(shí)間纖維蛋白記數(shù)器

第13頁/共21頁第13頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第14頁/共21頁第14頁/共22頁２．６蛋白質(zhì)的水解蛋白質(zhì)的水解會(huì)導(dǎo)致血漿內(nèi)纖維蛋白／纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)的增多，這些產(chǎn)物會(huì)占有血小板的纖維蛋白原黏附點(diǎn)(GPIIb／IIIa受體)使血小板表面GPIIb／Ilia受體不能被正常利用，這將直接導(dǎo)致血小板參與凝血的功能的減退；同時(shí)血小板GPIIb／IIIa受體被暴露于大量的激活劑中，中性粒細(xì)胞活化釋放的彈性酶(elastase)能直接水解GPIIb／IIIa受體，氧自由基使白細(xì)胞活化釋放的蛋白水解酶也能直接水解GPIIb／IIIa受體。因此，彈性酶釋放地越多，血小板可利用的受體越少，其被激活地可能也越小，因此，可以通過測(cè)定彈性酶在血漿中的含量來間接判斷血小板是否激活

第15頁/共21頁第15頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第16頁/共21頁第16頁/共22頁２．７炎癥反應(yīng)正常的人體組織與器官同外界異物接觸時(shí)，會(huì)不同程度的發(fā)生炎癥反應(yīng)

導(dǎo)致人體內(nèi)的一些反映炎癥變化的因子在體液中含量的變化，如白介素一1B(IL一1B)和白介素一6(IL一6)

可用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定。第17頁/共21頁第17頁/共22頁１血液相容性

２評(píng)價(jià)技術(shù)

２．１接觸活化

２．２補(bǔ)體激活

２．３凝血酶的產(chǎn)生

２．４纖維蛋白原和纖維蛋白間的轉(zhuǎn)化

２．５纖維蛋白的溶解

２．６蛋白質(zhì)的水解

２．７炎癥反應(yīng)

２．８血小板的激活

第18頁/共21頁第18頁/共22頁２．８血小板的激活

判斷血小板是否發(fā)生激活可以通過觀察吸附在材料表面的血小板的保持(retention)、分散情況(spreading)和測(cè)定血小板血栓球蛋白(β-TG)，血小板第4因子(PF一4)以及血小板受體抗拮劑CD62(GMP一140或P—selection)和CD63(糖蛋白53)的含量來判斷

β-TG、PF一4、CD62及CD63含量測(cè)定酶免疫分析方法(EIAs)

流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometricanalysis)第19頁/共21頁第19頁/共22頁結(jié)語從以上論述可看出對(duì)抗凝血生物材料的表征已不是單一技術(shù)和方法的使用,而應(yīng)該是多種分析測(cè)試技術(shù)的綜合。這是由于生物材料抗凝血性能的好壞不是單一因素可以決定的,對(duì)于不同的因素需要不同的技術(shù)和手