瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA【一】背景知識凝膠電泳是分離和純化DNA片段最常用的技術(shù)；分離、鑒定和提純核酸首選的標(biāo)準(zhǔn)方法。根據(jù)制備凝膠的材料:

瓊脂糖電泳凝膠電泳聚丙烯酰胺電泳【二】實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳分離DNA的原理和方法檢測堿裂解法提取質(zhì)粒的結(jié)果檢測雙酶切法鑒定重組質(zhì)粒的結(jié)果檢測PCR法鑒定重組質(zhì)粒的結(jié)果瓊脂糖濃度(%)線型DNA分子的分離范圍(Kb)0.35～600.61～200.70.8～100.90.5～71.20.9～61.50.2～312.00.1～2配制多大濃度的瓊脂糖凝膠，要根據(jù)被檢的DNA分子大小來確定。（3）溴化乙錠為扁平狀分子，在紫外光照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其熒光強度與DNA的含量成正比。據(jù)此可判斷DNA分子量大小和粗略估計樣品DNA濃度。瓊脂糖是一種線性多糖聚合物。濃度越高，孔隙越小，其分辨能力就越強。瓊脂糖濃度(%)線型DNA分子的分離范圍(Kb)0.35～600.61～200.70.8～100.90.5～71.20.9～61.50.2～312.00.1～2【四】儀器、材料與試劑質(zhì)粒樣品、酶切樣品和PCR樣品。凝膠電泳系統(tǒng)和電泳圖像分析系統(tǒng)(凝膠成像系統(tǒng))等。瓊脂糖、

1XTBE電泳緩沖液、溴化乙錠、

6X載樣緩沖液（

6Xloadingbuffer）和DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)（

LambdaDNA/EcoRI+HindIIIMarker）等。

凝膠成像分析系統(tǒng)LambdaDNA/EcoRI+HindIIIMarker（Ferments）一個已知分子質(zhì)量的DNA樣品做最對照，用來確定待測樣品的相對分子質(zhì)量。電泳指示劑溴酚蘭在堿性液體中呈紫蘭色，一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成上樣緩沖液。作用：①增加樣品比重，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)。②形成肉眼可見的指示帶，預(yù)測核酸電泳的速度和位置。③使樣品呈色，使加樣操作更方便。上樣緩沖液溴化乙錠溴化乙錠（3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶溴鹽EthidiumBromide，EB），EB染色（EB可很好地?fù)饺氲诫p鏈DNA中），在紫外光下會發(fā)出橙紅色的熒光，用于對DNA進行染色和觀察。用于觀察的紫外光有３種波長，一般使用中波紫外光（３０２ｎｍ）。短波紫外光（２５４ｎｍ）觀察效果較好，但對DNA的破環(huán)很大。長波紫外光（３６６ｎｍ）：回收。EB染料優(yōu)點：染色操作簡便，快速，室溫下15-20min；不會使核酸斷裂；靈敏度高，10ng或更少的DNA即可檢出；可以加到樣品中或膠中。EB是誘變劑，使用時一定要戴手套。EB廢液要經(jīng)過處理才能丟棄。SYBR:新型低毒，高靈敏度染料，加入樣品中，價格較昂貴?！疚濉繉嶒灢襟E制備瓊脂糖凝膠（1%）制備凝膠板加樣電泳

染色結(jié)果觀察

（1）制備凝膠和膠板：

45ml(1×TBE)+0.4g瓊脂糖（三角瓶

），

煮膠，溶解，冷卻至60℃(不燙手)，倒板(4-6mm)，室溫下充分凝固，豎直拔下梳子。膠板設(shè)計（44人）：每1