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15細(xì)胞破碎定義:細(xì)胞破碎就是采用一定的方法,在一定程度上破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,設(shè)法使胞內(nèi)產(chǎn)物最大程度地釋放到液相中,破碎后的細(xì)胞漿液經(jīng)固液分離除去細(xì)胞碎片后,再采用不同的分離手段進(jìn)一步純化.15.1細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)微生物細(xì)胞壁的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)細(xì)菌,肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)酵母菌:葡聚糖,甘露聚糖,蛋白質(zhì)真菌:細(xì)胞壁更厚植物細(xì)胞壁的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)初生壁,次生壁具有很高的機(jī)械強(qiáng)度高壓勻漿器影響勻漿破碎的主要因素是壓力、溫度和通過勻漿器閥的次數(shù)。高壓勻漿法的適用范圍較廣,在微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞的大規(guī)模處理中常采用.高速珠磨機(jī)(highspcedbeadmill)研磨是常用的一種方法,它將細(xì)胞懸浮液與玻璃小珠、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌,使細(xì)胞獲得破碎。在工業(yè)規(guī)模的破碎中常采用高速珠磨機(jī)超聲波破碎器超聲波處理細(xì)胞懸浮液時(shí),破碎作用受許多因素的影響,通常聲強(qiáng)和振幅影響很大,但強(qiáng)度太高易使蛋白質(zhì)變性,頻率的變化影響不明顯:此外介質(zhì)的離子強(qiáng)度、pH值、菌體的種類和濃度也有很大的影響.超聲波振蕩過程中遇到的最大問題就是產(chǎn)生的熱量不容易驅(qū)散,所以影響了它在大規(guī)模工業(yè)上的應(yīng)用,但在實(shí)驗(yàn)室和小規(guī)模生產(chǎn)中是一種很好的方法15.2.2非機(jī)械法非機(jī)械方法很多,包括酶解、滲透壓沖擊、凍結(jié)和融化、干燥法和化學(xué)法溶胞等.1)酶解法是利用酶反應(yīng),分解破壞細(xì)胞壁上特殊的鍵,從而達(dá)到破碎目的。酶解法可以在細(xì)胞懸浮液中加入特定的酶,也可以采用自溶作用。酶解法的優(yōu)點(diǎn)是發(fā)生酶解的條件溫和、能選擇性地釋放產(chǎn)物、胞內(nèi)核酸等泄出量少、細(xì)胞外形較完整、便于后步分離等;但酶水解價(jià)格高,故小規(guī)模應(yīng)用較廣.15.2.3選擇破碎方法的依據(jù)(1)細(xì)胞的處理量(2)細(xì)胞壁的強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)(3)目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)破碎條件的敏感性(4)破碎程度適宜的操作條件應(yīng)從高的產(chǎn)物釋放率,低的能耗和便于后步提取這二方面進(jìn)行權(quán)衡15.2.4破碎技術(shù)研究的方向(1)多種破碎法的結(jié)合(2)與上游技術(shù)結(jié)合(3)與下游操作技術(shù)結(jié)合15.4基因工程包涵體的純化方法包涵體的洗滌和目標(biāo)蛋
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