非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第1頁(yè)主要內(nèi)容EGFR檢測(cè)背景及意義EGFR檢測(cè)標(biāo)本類型EGFR檢測(cè)臨床開展及成功關(guān)鍵非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第2頁(yè)肺癌精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是準(zhǔn)確診療與靶向治療結(jié)合準(zhǔn)確診療靶向治療分子靶點(diǎn)藥品EGFR吉非替尼、厄洛替尼、?？颂婺?、阿法替尼、CO-1686,AZD9291ALK克唑替尼、AlectinibMetTivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184)FGFR1Nintedanib,XL999HER-2阿法替尼RET/ROS融合基因克唑替尼,AP26113,ASP3026RAS/MAPK通路Trametinib(GSK112)，Pimastertib，Refametinib,TAK733……PI3K/PTEN/AKTBEZ235,XL-765……PD-1/PDL-1Nivolumab,MPDL3280AHSP90…..GanetespibLiTH,etal.JClinOncol;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov;8(11):1381-1397.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第3頁(yè)多部權(quán)威指南強(qiáng)調(diào)治療前EGFR突變檢測(cè)ASCO指南：考慮用EGFRTKI進(jìn)行一線治療非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)該進(jìn)行腫瘤EGFR突變檢測(cè)來確定適合一線使用EGFRTKI還是一線使用化療藥品治療。

ESMO指南：進(jìn)行個(gè)體化治療決定前應(yīng)有足夠組織材料進(jìn)行組織學(xué)診療和分子檢測(cè)在疾病進(jìn)展時(shí)應(yīng)考慮重新檢測(cè)應(yīng)該系統(tǒng)分析EGFR突變狀態(tài)——在晚期非小細(xì)胞肺癌患者組織中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)A].NCCN指南：對(duì)晚期非鱗NSCLC及不吸煙/小標(biāo)本鱗癌治療強(qiáng)調(diào)了治療前必須檢測(cè)EGFR/ALK，并指出“多重/下一代測(cè)序項(xiàng)目應(yīng)該包含這2個(gè)靶點(diǎn)檢測(cè)”中國(guó)原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（版）在推薦全部NSCLC患者腫瘤組織都應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè)基礎(chǔ)上，補(bǔ)充了假如腫瘤標(biāo)本不可評(píng)定可使用從血液（血漿）標(biāo)本中取得ctDNA進(jìn)行評(píng)定.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第4頁(yè)EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國(guó)肺腺癌驅(qū)動(dòng)基因突變圖譜NSCLC中藥品療效相關(guān)EGFR突變研究RR中位PFSIPASS71.2%vs47.3%9.8vs6.4月First-SIGNAL84.6%vs37.5%8.4vs6.7月WJTOG340562.1%vs32.2%9.6vs6.6月NEJGSG00273.7%vs30.7%10.8vs5.4月OPTIMAL83%vs36%13.1vs4.6月EURTAC58%vs15%9.7vs5.2月LUX-LUNG361%

vs22%11.1vs6.9月LUX-LUNG667%vs23%11.0vs5.6月八項(xiàng)隨機(jī)研究奠定了TKI在EGFR基因突變陽(yáng)性患者中一線治療地位NCCNGuidelinesVersion3.Non-SmallCellLungCancerMoketal.,;Kimetal.,;Hirschetal.,突變類型所占百分比對(duì)EGFR-TKI敏感性19del;L858R~90%敏感G719X;L861Q;S768I~7%亞敏感T790Malone;20ins~3%不敏感非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第5頁(yè)EGFR檢測(cè)樣本起源組織活檢（腫瘤蠟片）當(dāng)前檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞學(xué)標(biāo)本（惡性胸水）樣本品質(zhì)和腫瘤細(xì)胞含量可能比組織樣本較低血液標(biāo)本（ctDNA）-

當(dāng)無(wú)法獲取組織或細(xì)胞學(xué)樣本晚期轉(zhuǎn)移患者，作為有效補(bǔ)充DNA片段化/假陰性較多，需要高敏感度技術(shù)+++--+--侵入性每個(gè)病人都適用動(dòng)態(tài)檢測(cè)對(duì)于組織和胸水都取不到患者，血液樣本是一個(gè)很好補(bǔ)充PirkerRetal.JThoracOncol;5:1706–1713;SavicSetal.BrJCancer;98:154–160;RekhtmanNetal.JThoracOncol;6:451–458;TanakaTetal.CancerSci;98:246–252;-++質(zhì)量控制非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第6頁(yè)組織/細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是當(dāng)前金標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前國(guó)內(nèi)送檢以組織和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本為主，組織/細(xì)胞學(xué)檢測(cè)仍是當(dāng)前金標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前低送檢率源于：醫(yī)生觀念經(jīng)濟(jì)原因約20%患者無(wú)組織標(biāo)本FromAZinternaldata非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第7頁(yè)肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色

&確定腫瘤組織Step1標(biāo)本病理質(zhì)控

DNA樣本制備DNA純化DNA定量Step2DNA抽提建立PCR反應(yīng)體系Step3PCR反應(yīng)

數(shù)據(jù)分析Step4匯報(bào)解讀匯報(bào)組織檢測(cè)基本流程非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第8頁(yè)組織及細(xì)胞學(xué)標(biāo)本處理-需要臨床科室?guī)椭c配合組織學(xué)標(biāo)本固定要及時(shí)，離體后即時(shí)處理（15-30分鐘內(nèi))固定液：10%中性緩沖福爾馬林（終濃度4%）；固定液量普通為組織體積10-15倍.固定時(shí)間：活檢標(biāo)本直接放入固定液，支氣管鏡活檢標(biāo)本固定時(shí)間為6～24h，手術(shù)切除標(biāo)本固定時(shí)間為12h-48h.細(xì)胞學(xué)標(biāo)本采取95%乙醇固定液，時(shí)間不宜少于15min，或采取非婦科液基細(xì)胞學(xué)固定液，固定時(shí)間和方法可按說明書進(jìn)行操作全部細(xì)胞學(xué)標(biāo)本應(yīng)盡可能制作福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）細(xì)胞學(xué)蠟塊。將細(xì)胞學(xué)標(biāo)本離心沉淀置于包埋盒中，后續(xù)操作同組織學(xué)標(biāo)本制作蠟塊流程中國(guó)原發(fā)性肺癌診療規(guī)范版非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第9頁(yè)病理評(píng)定和質(zhì)控對(duì)于基因檢測(cè)至關(guān)主要-蠟塊未染色切片H&E染色切片標(biāo)識(shí)腫瘤細(xì)胞百分比高區(qū)域刮取標(biāo)識(shí)以內(nèi)區(qū)域組織處理、蠟塊和H&E染色切片制作病理質(zhì)量控制EGFR基因突變檢測(cè)無(wú)EGFR基因突變檢測(cè)標(biāo)本接收質(zhì)量達(dá)標(biāo)質(zhì)量不達(dá)標(biāo)為何EGFR檢測(cè)要在病理科開展？非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第10頁(yè)腫瘤細(xì)胞含量評(píng)定對(duì)于EGFR結(jié)果判讀影響病理腫瘤細(xì)胞含量評(píng)定對(duì)于EGFR突變結(jié)果影響較大，檢測(cè)流程假如沒有該步驟，會(huì)造成較多假陰性。非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第11頁(yè)血液檢測(cè)價(jià)值與優(yōu)勢(shì)指導(dǎo)用藥*實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)作為無(wú)法獲取組織標(biāo)本補(bǔ)充，無(wú)創(chuàng)取樣后檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)臨床用藥實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，提升全程管理水平勻質(zhì)標(biāo)本循環(huán)而勻質(zhì)血液標(biāo)本，在一定程度有效克服異質(zhì)性*已能夠指導(dǎo)EGFR敏感性突變治療用藥1.Molina-VilaMetal.JThoracOncol;3:1224–1235;

2.SmouseJetal.CancerCytopathol;117:67–72;

3.VanEjikRetal.PLoSOne;6:e177791;

4.RekhtmanNetal.JThoracOncol;6:451–458非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第12頁(yè)吉非替尼取得血液ctDNA伴隨診療適應(yīng)癥歐盟和中國(guó)相繼同意阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴隨診療非小細(xì)胞肺癌患者用藥前檢測(cè)EGFR突變非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第13頁(yè)循環(huán)血腫瘤細(xì)胞(circulatingtumourcell，CTC)即釋放到外周血中腫瘤細(xì)胞，當(dāng)前CTC捕捉比較困難循環(huán)腫瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循環(huán)腫瘤DNA，指由腫瘤細(xì)胞釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中DNA血液標(biāo)本檢測(cè)對(duì)象非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第14頁(yè)總量少–

<500

DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctDNA豐度低血漿ctDNA特點(diǎn)片段小–集中在170bp左右，檢測(cè)方法需要能夠耐受In-housedataFractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,N=32T790M,N=11Newman

etal.,Nat

Med

()Taniguchietal.,ClinCancerRes()

信息丟失-能代表全基因組信息？TranslationalOncology.NatureVolume.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第15頁(yè)IPASS日本亞組血液/組織對(duì)比

EGFR突變狀態(tài)研究

靈敏性:43%

特異性:100%一致性:66%86對(duì)血清和組織樣本參加比較突變狀態(tài)組織累計(jì)EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR（+）22022EGFR（-）293564累計(jì)513586EGFR突變型吉非替尼組PFS顯著長(zhǎng)于卡鉑/紫杉醇組(HR,0.29;95%CI,0.14–0.60;p0.001)EGFR野生型吉非替尼組PFS與卡鉑/紫杉醇組無(wú)顯著差異(HR,0.88;95%CI,0.61–1.28;p0.50)GotoK.etal.JThoracOncol;7(1):115-121非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第16頁(yè)一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIAsiaPac(n=1687)1310/1687(77.7)75.6,79.6343/692(49.6)45.8,53.4967/995(97.2)96.0,98.1Russia(n=894)767/894(85.8)83.3,88.033/109(30.3)21.8,39.8734/785(93.5)91.5,95.1亞太和俄羅斯晚期NSCLC組織/細(xì)胞學(xué)和配正確血漿樣本(IGNITE)中國(guó)(N=1355)一致性敏感性特異性PPVNPVn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CI1051/1355(77.6)75.2,79.8267/548(48.7)44.5,53.0784/807(97.1)95.8,98.2267/290(92.1)88.3,94.9784/1065(73.6)70.9,76.2ChunleiShi,etal.ESMOAsia,abstract422PD非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第17頁(yè)IFUM吉非替尼治療EGFR突變

高加索NSCLC652對(duì)血液和組織樣本參加比較突變狀態(tài)組織累計(jì)EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR(+)69170EGFR(-)36546582累計(jì)105547652JThoracOncol.Sep;9(9):1345-53.

一致性:94.3%;

敏感性:65.7%;

特異性:99.8%AllmutationsMedianPFSmoTumor(n=106)9.7Plasma(n=65)10.2MedianPFSctDNA作為EGFR檢測(cè)有效補(bǔ)充69.876.959.5全部突變類型N=74/10650/6522/37TumorEGFR

mutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-negativeObjectiveresponserate(%)非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第18頁(yè)IFUM研究：血液檢測(cè)陽(yáng)性能夠指導(dǎo)TKI用藥IFUM(易瑞沙后續(xù)評(píng)定)研究中，血液與配對(duì)組織不一樣EGFR突變狀態(tài)患者ORR一致，19外顯子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月)ORR(%)PFS(月)組織血液ctDNA檢測(cè)EGFR突變陽(yáng)性可用于指導(dǎo)EGFR-TKI治療Douillard,J.-Y.,etal.()."JournalofThoracicOncology9(9):1345.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第19頁(yè)

RocheARMS:敏感性:75%,特異性:96%ADxARMS:敏感性67.5%特異性100%Liuetal.JclinpATHMoketal.,CCRQiagenARMS敏感性65.7%，特異性:99%123ARMS法特異性很好，靈敏度有限，但ADxARMS是當(dāng)前唯一取得CFDA同意血液檢測(cè)方法一代ARMS：EGFR敏感突變，組織vs血液非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第20頁(yè)血液檢測(cè)獲益人群轉(zhuǎn)移>未轉(zhuǎn)移4期>3期>2期>1期晚期、無(wú)法取得組織標(biāo)本NSCLC患者100806040200結(jié)直腸胃食管胰腺乳腺局限期轉(zhuǎn)移性可檢測(cè)ctDNA發(fā)生率(%)100806040200可檢測(cè)ctDNA發(fā)生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml突變片斷I期III期II期IV期Bettegowdaet.al.,SciTranslMed()非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第21頁(yè)非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測(cè)中國(guó)教授共識(shí)(年12月)

中國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）在年2月已同意吉非替尼說明書更新，在推薦全部NSCLC患者腫瘤組織都應(yīng)進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè)基礎(chǔ)上，假如腫瘤標(biāo)本不可評(píng)定，則可使用從血液（血漿）標(biāo)本中取得ctDNA進(jìn)行評(píng)定。EGFR基因突變檢測(cè)流程非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變檢測(cè)第22頁(yè)血液檢測(cè)試驗(yàn)流程血漿cfDNAEGFR突變檢測(cè)cfDNA提取加樣分離全血采集時(shí)間采集方式采血管（EDTA抗凝）及時(shí)高效防止污染使用可信賴血漿cfDNA提取試劑盒使用可信賴檢測(cè)試劑盒篩選適當(dāng)人群cfDNA（腫瘤標(biāo)本不可評(píng)定）（2h內(nèi)）采取EDTA抗凝管，采集10mL全血2小時(shí)內(nèi)將全血充分低溫離心兩次，分離出不含細(xì)胞成